SM03——一种非清除性(non-depleting)抗CD22单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)，通过调节B细胞活化及免疫互作(immune crosstalk)减轻自身免疫性疾病(autoimmunity)

《Journal of Translational Autoimmunity》：SM03, a Non-Depleting Anti-CD22 Antibody, Modulates B Cell Activation and Immune Crosstalk to Attenuate Autoimmunity

　　

目的(Objective)： 通过探究新型人源化抗CD22单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb) SM03在自身免疫微环境中抑制B细胞失调的机制，评估其对B细胞介导的自身免疫性疾病(autoimmune diseases)的疾病修饰潜力(disease-modifying potential)。 方法(Methods)： 体外(in-vitro)研究采用健康供者及系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)/舍格伦综合征(Sj?gren's syndrome, SS)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)进行功能学检测。体内(in-vivo)疗效评估分别在人源化(humanized) pristane诱导SLE小鼠模型及预防型胶原诱导关节炎(collagen-induced rheumatoid arthritis, RA)食蟹猴(Macaca fascicularis)模型中进行。分析疾病特异性生物标志物、组织病理学和免疫细胞表型。 结果(Results)： SM03在不引起B细胞清除(B cell depletion)的前提下，降低类别转换B细胞(class-switched B cells)、浆母细胞(plasma-blast)分化及促炎细胞因子产生，从而减弱T细胞依赖的B细胞活化。SLE模型中，SM03抑制脾肿大(splenomegaly)、抗双链DNA(anti-dsDNA)抗体、蛋白尿(proteinuria)及肾小球沉积物等关键疾病表现，并减少活化T细胞。RA模型中，SM03呈剂量依赖性抑制关节评分、软骨损伤、滑膜增生(synovial hyperplasia)、Ⅱ型胶原抗体(anti-collagen II antibodies)及白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)。 结论(Conclusion)： SM03通过增强CD22抑制性信号以阻断自身反应性B–T细胞相互作用，发挥疾病修饰治疗作用，减轻自身免疫中淋巴细胞失调。此非清除性(non-depleting)机制支持其在SLE和RA中的临床转化潜力，并提示其对其他B细胞驱动的自身免疫性疾病的更广泛应用价值。

本文解读基于发表于《Journal of Translational Autoimmunity》的研究论文：SM03, a Non-Depleting Anti-CD22 Antibody, Modulates B Cell Activation and Immune Crosstalk to Attenuate Autoimmunity，由SinoMab BioScience Limited的Kin Lok Wong、Lung Hei Cheng等共同完成。

【研究背景】

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)等自身免疫性疾病由B细胞与其他免疫细胞（T细胞、单核/巨噬细胞）异常互作驱动，自身反应性B细胞通过产生自身抗体、抗原提呈及细胞因子招募炎性细胞参与致病。生理状态下多个耐受检查点限制致病性自身反应性B细胞克隆扩增，但SLE、RA及舍格伦综合征(Sj?gren's syndrome, SS)中这些调控受损。CD22是B细胞表面抑制性共受体(co-receptor)，属唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin, Siglec)家族，与相邻细胞表面α2,6-唾液酸糖链(CD22 ligand, CD22L)结合后通过其免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif, ITIM)招募蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1，抑制B细胞受体(B cell receptor, BCR)信号钙流，负调BCR超活化以维持B细胞耐受。现有B细胞靶向治疗如抗CD20利妥昔单抗(rituximab, RTX)、BAFF/APRIL阻断剂贝利木单抗(belimumab)虽有效，但常无法完全缓解自身反应性且可能清除保护性B细胞亚群。Epratuzumab（抗CD22单抗）可通过调节而非清除B细胞发挥疗效。SM03是一种新型人源化抗CD22单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)，此前研究提示其通过与trans配体结合增强CD22抑制信号而不引起广泛B细胞清除。本研究旨在明确SM03对B细胞活化、B–T细胞互作及自身免疫病理的调控作用及体内外疗效。

【主要关键技术方法】

研究人员采用以下主要实验体系开展研究：(1) 体外(in-vitro)——健康供者及SLE/SS患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)、原代初始(na?ve)B细胞及B细胞系DAUDI，经TLR-9激动剂ODN 2006、CD40配体(CD40 ligand, CD40L)、IL-21及自身抗原肽(Ro60、DWEYS)刺激，以流式细胞术分析活化标志物CD69、MHCⅠ/Ⅱ(HLA-ABC/HLA-DR)及浆母细胞(CD27^hiCD38^hi)，ELISA检测细胞因子及自身抗体；(2) RNA测序(RNA-sequencing, RNA-seq)分析抗IgM刺激的SM03处理健康供者PBMC来源B细胞差异基因表达及基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis, GSEA)；(3) 人源化(humanized) NOD.Cg-Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/SzJ(NSG)小鼠经人脐带血CD34⁺造血干细胞移植后pristane诱导SLE模型，尾静脉给药SM03(20 mg/kg)、同型对照IgG1或RTX，评估抗-dsDNA、蛋白尿、脾大小、肾/肺/肝组织病理(H&E、PAS、免疫组化immunohistochemistry, IHC、免疫荧光immunofluorescence, IF)及脾免疫细胞表型；(4) 牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant, CFA)诱导的食蟹猴(Macaca fascicularis)胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)预防模型，设安慰剂、低剂量SM03(10 mg/kg)及高剂量SM03(20 mg/kg)组，每周静脉给药共十次，评估关节临床评分、组织病理、关节灌洗液及血清细胞因子/抗胶原II抗体、外周血免疫细胞表型。统计学采用单因素方差分析(one-way ANOVA)及重复测量双因素方差分析(two-way ANOVA)配合Dunnett多重比较。

【研究结果】

3.1. Sequencing results from samples of SM03 treated PBMC activated by IgM implicated T cell related modulation parameters

研究人员对健康供者PBMC予抗IgM刺激模拟BCR活化并予SM03或IgG1处理，分离B细胞行RNA-seq。SM03处理产生988个差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)，下调VPREB3、CEACAM1反映B细胞增殖信号减弱，上调CD276(B7-H3)、CD200提示增强T细胞检查点抑制及B细胞免疫抑制功能。GSEA显示BCR信号通路及SLE相关通路显著下调。提示SM03可抑制BCR驱动活化并调节免疫互作。

3.2. SM03 modulated T cell dependent B cell activation and decreased autoantigen driven B cell differentiation in diseased patient PBMC

在DAUDI细胞及健康供者原代初始B细胞中，SM03显著降低CD40L＋α2,6-唾液酸配体或ODN 2006＋CD40L＋IL-21诱导的CD69表达及MHCⅠ/Ⅱ上调，表明SM03抑制T细胞样共刺激信号驱动的B细胞活化及抗原提呈分子表达。健康及SLE/SS患者PBMC中用Ro60(SS相关)或DWEYS(SLE交叉反应肽)刺激，SM03显著降低IL-6、IFN-γ、CXCL13分泌；SS患者PBMC在高IL-6背景下SM03显著抑制IL-6。SLE及SS患者PBMC中SM03显著抑制自身抗原诱导的浆母细胞扩增且不减少总B细胞数，并降低抗-DWEYS IgG分泌。说明SM03在自身免疫背景下选择性抑制自身抗原驱动的B细胞反应及浆母细胞分化。

3.3. SM03 modulates autoimmune related phenotypes in SLE pre-clinical studies

在人源化pristane诱导SLE模型（因SM03特异结合人CD22不结合鼠CD22故选用NSG人源化模型）中，SM03降低血清抗-dsDNA抗体水平至同RTX相当，减轻脾肿大，将蛋白尿恢复至基线水平，降低肝组织IL-6及CXCL10 mRNA。流式显示SM03如RTX般降低CD27⁺CD38^hi浆母细胞比例，但保留总CD19⁺B细胞（RTX致广泛清除）；同时降低脾CD4⁺HLA-DR^hi活化辅助T细胞。肾组织学示SM03显著减轻肾小球免疫复合物沉积、坏死、鲍曼囊肿胀及CD45⁺白细胞浸润，降低肾小球IgG、IgM及补体C3沉积，效果与RTX相当。肺组织IgG1对照组见血管周/间质浸润、胸膜炎及纤维化，SM03明显减轻而RTX作用较弱，提示非清除性CD22调节对肺组织具潜在优势。证实SM03在SLE模型中改善血清学、肾脏及肺部病理且不引起B细胞广泛耗竭。

3.4. SM03 ameliorated clinical symptoms and in a Collagen induced arthritis in Macaca fascicularis preclinical model

在预防型CIA食蟹猴模型中，高剂量SM03(20 mg/kg)近完全抑制关节病理进展及临床评分，低剂量(10 mg/kg)部分抑制；组织学示减轻软骨破坏、骨吸收、滑膜增生及炎性浸润，减少关节CD3⁺T及CD19⁺B细胞浸润。关节灌洗液CXCL5、MCP-1、IL-6及抗胶原II IgG降低；外周血循环浆母细胞及CD4⁺T辅助细胞受高剂量SM03调节，总B/T细胞数无明显变化；血清抗胶原II IgG/IgM及IL-6呈剂量依赖性下降。表明SM03通过调节B–T细胞互作及髓系炎症减轻关节炎症状及组织破坏。

【讨论与结论总结】

讨论部分指出，SM03在SLE及RA模型中减轻自身抗体产生、组织炎症及器官病理，且不引起广泛B细胞清除，组织病理学改善优于或部分媲美RTX。体外SM03下调BCR信号及MHCⅡ提呈分子，上调免疫检查点基因(CD276、CD200)，抑制自身抗原刺激的浆母细胞分化及促炎因子，并在既往研究中被报道可下调单核细胞TLR-4减少IL-12/IL-23分泌，提示可间接影响T细胞及髓系细胞活化。人源化SLE模型中SM03降低活化的CD4⁺HLA-DR⁺T细胞及浆母细胞，减轻肾免疫复合物沉积与肺炎性纤维化；CIA模型中降低循环浆母细胞、Th细胞、关节浸润及滑液炎性因子。值得注意的是本模型未直接评估表位扩展(epitope spreading)，但SM03抑制浆母细胞分化及自身抗体分泌与阻断其传播过程相符。SLE及RA中自身反应性广度与病情严重度相关，SM03选择性抑制自身反应性B细胞活化而非清除整体B细胞，符合非清除性免疫调节特征。未来需纵向评估SM03对抗体重广度及BCR库的影响；已完成RAⅢ期临床试验数据分析待公布，个别大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid, BP)超说明书使用见临床改善。

结论翻译(Conclusion)： 通过增强CD22抑制性信号以破坏自身反应性B–T细胞相互作用，SM03作为一种疾病修饰疗法(disease-modifying therapy)，减轻自身免疫中淋巴细胞失调。此非清除性(non-depleting)机制支持其在SLE和RA中的转化潜力，并提示其对其他B细胞驱动的自身免疫性疾病的更广泛应用价值。