综述：感染宿主中γδ T细胞与西尼罗病毒的免疫学相互作用

《Reviews in Medical Virology》：Immunological Interactions Between Gammadelta T Cells and West Nile Virus in the Infected Host

　　

西尼罗病毒（West Nile virus, WNV)是一种嗜神经性黄病毒，为虫媒病原体，在蚊类和鸟类之间维持地方性流行循环。此外，WNV可感染人和马，导致严重疾病。自1999年以来，WNV已扩散至北美和南美，包括墨西哥和加勒比地区；在欧洲、非洲、中东和亚洲的多个区域亦呈地方性流行。WNV侵袭中枢神经系统（central nervous system, CNS)，在少数感染者中引起重症，尤其在免疫受损或老年宿主中。该再发病原体于2025年7月在意大利拉齐奥地区的一次暴发中被检出，重新激发了人们对该区域的兴趣，并引发关于WNV传播媒介及其扩散的诸多问题。γδ T淋巴细胞是先天免疫细胞，能够快速而非特异性地应对病毒感染及其他病原体，从而连接先天免疫与适应性免疫。多项小鼠和人体研究提示，γδ T细胞通过与其他免疫细胞通讯，在控制WNV感染中发挥独特作用，凸显了其抗病毒功能，这对于遏制病毒在宿主体内播散至关重要。本综述将讨论γδ T细胞在WNV感染期间病毒致病机制和保护性免疫中作用的近期研究进展。

1 引言

西尼罗病毒（WNV）是一种具有单股RNA基因组的嗜神经性黄病毒，十多年来对北美公共卫生构成挑战。WNV于1937年首次在乌干达被鉴定，20世纪末在欧洲首次报道，随后成为欧洲流行性病毒性脑炎的主要病因。病毒遵循 nun enzootic 传播循环，以蚊类为媒介、鸟类为扩增宿主。哺乳动物可通过蚊虫叮咬感染，但被视为终末宿主；人和马为偶然宿主。

WNV通过来自撒哈拉以南非洲、北非和中东的迁徙鸟类传入欧洲，蚊类在温暖月份充当传播媒介。欧洲WNV传播的主要媒介包括尖音库蚊（Culex pipiens）和谦逊库蚊（Culex modestus）等物种，白纹伊蚊（Aedes albopictus）和（Ochlerotatus）detritus 亦参与传播。大多数人感染发生在7月至9月蚊类活动高峰期。这些媒介促进鸟类和哺乳动物间的传播，并作为桥接媒介增强向人和马的流行传播。鸟类通过口腔和泄殖腔分泌物排出高浓度病毒，某些鸟类物种（如鹅）之间存在直接病毒传播的证据。

自2018年以来，欧洲、突尼斯、以色列和美国记录了WNV的重大暴发。近期意大利拉齐奥地区发生流行，仅2025年7月就报告超过101例病例。具体而言，2025年7月18日至8月期间，共确认171例本地获得性WNV感染，包括110例WNV发热、57例神经侵袭综合征、4例无症状献血者及9例死亡，这就在意大利此前未受影响的地区管理该感染提出了新问题。这些发现凸显了对未来公共卫生策略进行进一步研究的必要性，包括提高现有监测系统的敏感性，以及强调对发热性和/或神经侵袭性病例进行鉴别诊断的重要性。此外，对于免疫受损宿主人群尤为关键，原因在于WNV通过器官移植传播的潜在风险以及这些患者发生神经侵袭性疾病的风险增加。2002年至2023年间，美国和意大利多项聚集性病例中识别出实体器官移植（solid organ transplantation, SOT）期间的WNV传播。

WNV感染研究已利用多种动物模型，包括仓鼠、小鼠、猴和马。涉及这些模型的研究——以及细胞培养或感染患者样本——为宿主免疫如何应对WNV提供了关键见解。

γδ T细胞作为连接人和小鼠模型中先天与适应性免疫应答的先天淋巴细胞，识别称为磷酸抗原（Phosphoantigens, PhAgs）的非肽类抗原。它们快速而非特异性地应对病毒感染，不受主要组织相容性复合体（MHC）限制。γδ T细胞在抗病毒免疫应答中的作用已在多种疾病模型中详述；值得注意的是，γδ T细胞在人和小鼠中均表现出保护性和致病性效应。然而，γδ T细胞在WNV感染期间激活的机制仍不清楚。本综述旨在汇集关于这些独特免疫细胞的近期发现，聚焦于WNV致病机制和保护性免疫。

2 WNV疾病：临床特征与后遗症

WNV已成为全球关注的问题，导致病毒性脑炎的暴发和病例。该病毒影响中枢神经系统，可在少数感染者中引起重症，尤其在免疫受损者或老年人中。在人体中，潜伏期通常为2-6天；但在免疫系统较弱者可延长至21天。人体病毒血症水平通常较低，发生于感染后1-3天，可能持续长达11天。然而，该病毒血症不被认为对蚊虫具有感染性。WNV风险升高的因素包括高血压、高龄、脑肿瘤、血液系统疾病、糖尿病和肾脏问题、酗酒以及遗传问题。虽然人际传播罕见，但可通过人体来源物质（substances of human origin, SoHO）发生，如来自感染个体的输血或器官移植。报告显示WNV感染者死亡率可达10%。美国记录了通过胎盘转移和母乳喂养的垂直传播病例。此外，与职业暴露相关的感染也有报道，如蚊虫采集或尸检过程中。

约80%的WNV人感染无症状；约20%表现为发热性疾病（西尼罗热），不到1%进展为神经侵袭性疾病（West Nile neuroinvasive disease, WNND），包括脑膜炎和脑炎。少数情况下，WNV感染可能导致吉兰-巴雷综合征或其他脱髓鞘性神经病。WNND患者总体死亡率约为10%，70岁及以上增至20%，血液系统恶性肿瘤患者、SOT受者或接受B细胞耗竭性单克隆抗体治疗者死亡率为30%-40%。因WNV疾病住院的患者中，超过半数经历长期后遗症，如疲劳、无力、肌痛、记忆障碍和抑郁。目前尚无特异性治疗药物获批，亦无获批人用疫苗用于预防WNV感染和/或疾病。

3 γδ T细胞：感染性疾病中的先天淋巴细胞

γδ T细胞在人和小鼠的感染性疾病中发挥重要作用。γδ T细胞在淋巴组织、血液以及上皮和黏膜表面构成非常规CD3⁺ T细胞的少数群体。与识别抗原呈递细胞（antigen-presenting cells, APCs）上MHC分子呈递的肽类抗原的常规αβ T细胞不同，γδ T细胞具有独特的TCR重排，使其能够识别多种肽类或非肽类抗原，包括微生物产物、应激分子和自身抗原，既可通过模式识别受体（pattern recognition receptors, PRRs）也可通过TCR识别。γδ T细胞表面还具有自然杀伤受体（natural killer receptors, NKRs），如NKG2D，其配体包括人类MHC I类相关链A或B（MICA或MICB）及UL-16结合蛋白（ULBP1-6），小鼠则为H60、MULT-1和RAE-1。遭遇不同抗原后，γδ T细胞快速产生促炎细胞因子[干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-17（IL-17）]以杀灭病原体或感染细胞。这些细胞因子对于募集和激活其他免疫细胞（如中性粒细胞、树突状细胞、巨噬细胞和NK细胞）以杀伤感染或肿瘤细胞并促进组织修复亦属必需。此外，活化γδ T细胞可通过释放穿孔素（perforin）和颗粒酶（granzymes）等细胞毒分子直接清除感染细胞，从而诱导凋亡。γδ T细胞还可产生调节性细胞因子，或通过直接的细胞间接触与其他免疫细胞（CD4和CD8 T细胞、B细胞和NK细胞）通讯。这些相互作用对于增强针对病原体的先天和适应性免疫应答、促进快速病原体清除至关重要。

γδ T细胞对多种病毒性疾病（如WNV、CMV、HIV、肠道病毒）、细菌（如结核分枝杆菌，MTB）和寄生虫病原体（如疟原虫属和单核细胞增生李斯特菌）表现出强效抗病毒活性，通过溶细胞和非溶细胞机制发挥作用。

人γδ T细胞可根据T细胞受体δ（TCRδ）链表达分为五个主要群体（δ1、δ2、δ3、δ4和δ5），并以器官特异性方式分布。后三个亚群文献有限，而Vδ2 T细胞是人中研究最多的。

小鼠γδ T细胞主要包括Vγ1、Vγ2、Vγ4、Vγ5、Vγ6和Vγ7亚群，在多种病原体免疫防御中显示直接和间接功能。

4 人γδ T细胞

Vδ2 T细胞是成人外周血中γδ T细胞的优势亚群，约占循环γδ T细胞总数的90%。TCR重排过程中，Vδ2链几乎完全与Vγ9链配对，形成广泛分布的Vγ9Vδ2 T细胞群体。作为不依赖MHC的免疫细胞，γδ T细胞近期被证明使用与Vγ9相关的非限制性识别机制。在感染细胞中聚集的磷酸抗原（PhAgs）并不直接与Vγ9Vδ2 T细胞结合，而是作为"分子胶水"促进靶细胞上丁酰甘油碱亚科3成员A1（BTN3A1和BTN2A1）之间的细胞内相互作用。该相互作用使BTN2A1的胞外域能够结合Vγ9 TCR链，从而激活γδ T细胞。因此，PhAgs或BTN单克隆抗体可用于特异性刺激Vγ9Vδ2 T细胞。除通过Vγ9Vδ2 TCR依赖模式识别外，Vδ2 T细胞还可通过NKG2D识别病毒感染细胞上NKG2D配体（如MICA、MICB和ULBP）的上调，通过Fas-Fas配体（Fas-FasL）和TNF相关凋亡诱导配体-死亡受体5（TRAIL-DR5）途径诱导靶细胞死亡。此外，Vδ2 T细胞还可表达Fcγ受体III（CD16），通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用增强其抗病毒活性。

Vδ1 T细胞占成人外周血γδ T细胞的0.1%-0.5%，代表γδ T细胞的"适应性"亚群。尽管其在血液中频率较低，但广泛分布于外周组织和器官，包括肠道上皮、皮肤、肝脏和脾脏，参与组织稳态维持。Vδ1 T细胞不与特定Vγ链结合，也不与Vγ9配对，因此不能被PhAgs激活，这与Vδ2 T细胞不同。相反，Vδ1 T细胞识别多种MHC样蛋白，包括CD1家族成员和MHC I类相关分子（MR1），后者呈递脂质抗原或小分子代谢物。有趣的是，Vδ1 T细胞还可通过TCR识别靶细胞，与MHC II类复合物HLA-DR相互作用，或通过NKG2D途径识别，类似于Vδ2 T细胞。其他分子如自然杀伤受体（NKRs）和活化受体（DNAM-1）进一步增强其细胞毒活性。这些多样化的识别机制拓宽了其针对病原体的免疫效应功能。

Vδ3 T细胞健康人外周血中通常缺如，但在人巨细胞病毒（HCMV）再活化感染个体中更为常见。这些细胞主要存在于肝脏、肠道和固有层。值得注意的是，Vδ3 T细胞在功能相似性和抗原识别模式上与Vδ1 T细胞相似。观察发现Vδ3 T细胞识别CD1d并对CD1d⁺靶细胞的杀伤产生应答，释放Th1、Th2和Th17细胞因子，并促进DC成熟为APCs。然而，Vδ3、Vδ4和Vδ5 T细胞的研究仍然有限，主要原因是缺乏允许高效免疫表型和细胞分选的特异性单克隆抗体。

5 小鼠γδ T细胞

根据TCR γ链变异，小鼠γδ T细胞分为六个不同亚群：Vγ1、Vγ2、Vγ4、Vγ5、Vγ6和Vγ7 T细胞。值得注意的是，na?ve小鼠肺中γδ T细胞主要由Vγ1⁺和Vγ4⁺亚群组成。多种疾病模型研究表明，表达特定TCR的Vγ链T细胞执行专门化功能。例如，虽然Vγ1⁺ T细胞增强气道反应性，但Vγ4⁺ T细胞已被证明减轻该反应。尽管越来越多证据表明γδ T细胞在多种小鼠模型中的功能，如肺炎克雷伯菌和隐球菌性肺炎，不同γδ T细胞亚群在肺部炎症中的作用仍未充分探索。近期发现强调Vγ4⁺ T细胞是感染性和非感染性条件下IL-17的主要产生者。其在伯氏疟原虫血液期感染后期的IFN-γ产生能力显著降低。在单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌感染模型中，Vγ4⁺ T细胞快速分泌大量IL-17，与感染期间DC产生的IL-23协同作用。脾脏Vγ1⁺ γδ duplex T细胞优先扩增并表达CD40L；此外，Vγ1⁺和Vγ4⁺ γδ T细胞在感染期间均分泌促炎因子。虽然Vγ1⁺ γδ T细胞上的CD40L表达在感染期间保持稳定，但由于γδ T细胞群体内功能障碍，其IFN-γ阳性率在晚期感染中下降。值得注意的是，小鼠γδ T细胞缺乏Vγ9链，因此不能被PhAgs激活。此外，小鼠和人γδ T细胞在组织分布上存在显著差异。例如，Vγ5⁺树突状表皮T细胞是小鼠表皮中最丰富的亚群，而人表皮中既含αβ也含γδ T细胞，Vδ1 T细胞存在于表皮和真皮两层。尽管组成和分布存在差异，小鼠γδ T细胞与其人对应物表现出功能相似性。例如，CD1d在两物种中均为Vδ1 T细胞的配体。此外，人和小鼠表皮γδ T细胞均通过产生角质形成细胞生长因子（KGF）和胰岛素样生长因子1（IGF-1）促进伤口愈合。因此，使用小鼠模型的研究可为理解人γδ T细胞的生物学和功能提供宝贵见解。

6 WNV感染期间γδ T细胞的保护性调控作用

γδ T细胞通过直接和间接机制表现出强效抗病毒活性。直接机制方面，它们释放颗粒酶B和穿孔素杀伤感染细胞，或通过体外实验模型中的死亡受体途径（Fas/FasL和TRAIL）。γδ T细胞还能通过应激诱导分子（如NKG2D）或代谢性病原体相关标志物如异戊烯基焦磷酸（IPP）识别病毒感染细胞。

间接机制方面，PhAg活化的Vδ2 T细胞产生大量可溶性抗病毒/免疫调节因子，能够在体外干扰病毒复制；实际上，它们产生促炎细胞因子如IFN-γ和TNF-α，有助于清除感染细胞。此外，还释放β-趋化因子（如RANTES、MIP-1α、MIP-1β）以阻断病毒进入，例如针对HIV通过占据CCR5共受体。γδ T细胞的保护性抗病毒活性在抗黄病毒以及特异性抗WNV中也被观察到。

在小鼠模型中，观察到γδ T细胞缺陷小鼠表现出更高的WNV病毒血症和更严重的脑炎，对WNV感染的易感性显著高于野生型对照。一项研究显示γδ T细胞可在WNV感染后早期（2天）快速扩增，是IFN-γ的主要来源之一，与NK细胞和CD8 T细胞一起。另一研究组证明，耗尽Vγ1⁺ T细胞的小鼠对WNV感染的反应表型与TCR^?/?小鼠相似，凸显Vγ1⁺ T细胞是产生促炎因子的重要γδ亚群。一项研究展示，用IFN-γ缺陷γδ T细胞重建的 irradiated 小鼠在感染期间血液和脑中的WNV病毒载量显著高于用产生IFN-γ的γδ T细胞重建者。

在人中，含氮双膦酸盐（N-BPs）如唑来膦酸（ZA）通过抑制甲羟戊酸途径中的关键酶法尼基二磷酸合酶，导致IPP细胞内积聚，从而间接刺激Vγ9Vδ2 T细胞。ZA是目前最强效的第三代双膦酸盐，安全且广泛用于治疗骨质疏松症、高钙血症以及乳腺癌和前列腺癌骨转移。一旦被N-BPs活化，Vδ2细胞是针对恶性肿瘤和HIV感染细胞的强效细胞毒效应细胞。

研究团队证明了ZA活化的人Vδ2 T细胞系释放可溶性因子的强效抗WNV活性。在WNV复制的体外模型中评估了Vδ2 T细胞系对WNV感染细胞的细胞毒性。ZA活化Vδ2 T细胞系通过诱导IFN-γ释放抑制WNV复制，该因子参与特异性抗WNV活性。此外，Vδ2 T细胞系直接杀伤WNV感染细胞，可能通过穿孔素介导的细胞毒性，呈剂量和时间依赖性，为理解人Vδ2 T细胞抗WNV感染的效应功能提供了见解。

γδ T细胞病毒控制的另一关键机制是其作为"细胞毒细胞"的能力。γδ T细胞通过与感染或肿瘤细胞细胞接触汗液后释放穿孔素和颗粒酶，在人和小鼠中发挥细胞裂解活性。Vδ2 T细胞类似的细胞毒能力在抗流感和SARS-CoV感染细胞中也有报道。Vδ2 T细胞的细胞毒性可通过涉及T细胞受体（TCR）和/或自然杀伤（NK）受体的多种途径诱导，并可由穿孔素等多种可溶性因子的分泌介导。耗尽γδ T细胞并感染WNV的小鼠在感染后6天脾脏细胞中穿孔素水平较低，有助于病毒控制，提示穿孔素可能参与Vδ2介导的WNV感染细胞杀伤，这此前已在CD8⁺ T细胞中得到证实。相反，在二次感染前从主要感染WNV的小鼠中耗尽γδ T细胞似乎不影响宿主易感性。这提示γδ T细胞可能不直接在WNV记忆反应的发展中发挥作用，或对原发或二次感染期间的抗体反应无显著影响。γδ T细胞反应的参与已在人和灵长类细菌感染研究中得到记录。此外，在TCRδ^?/?小鼠中观察到CD4⁺和CD8⁺记忆T细胞反应降低。而且，γδ T细胞还可能在WNV感染期间调节CD4⁺和CD8⁺ T细胞的反应，如在TCR^?/?小鼠中观察到的，提示其在调节WNV感染期间记忆T细胞反应中的作用。多项研究表明γδ T细胞是WNV特异性CD8⁺ T细胞最佳启动和/或扩增所必需的，从而影响其细胞毒效率和CNS病毒清除。此外，γδ T细胞上调穿孔素、颗粒酶和死亡配体，可直接裂解脾脏和其他外周部位的WNV感染细胞。该功能在完全CD8 T细胞扩增前尤为重要，连接早期先天和延迟的适应性阶段。

B细胞在WNV感染期间对存活至关重要。它们通过产生中和抗体阻止病毒在体内和CNS中扩散。B细胞功能受损者面临严重神经系统并发症的显著更高风险。B淋巴细胞在WNV感染期间也受γδ T细胞影响，促进更高的体液和中和抗体反应。

在γδ T细胞与其他先天细胞复杂相互作用中，DC是最重要的抗原呈递细胞（APC）之一，因其具有启动原发T细胞应答的独特能力。T细胞与DC之间的交叉对话在促进WNV感染期间DC成熟和T细胞启动以及通过细胞因子（IFN-γ、TNF-α）和共刺激相互作用增强抗原呈递能力方面发挥关键作用，从而塑造适应性应答的强度和性质。在WNV感染小鼠中，脾脏DC表现出受损的呈递细胞活性和较低的CD40、CD80、CD86标志物水平。WNV感染的γδ T细胞贡献促炎细胞因子如IFN-γ、TNF-α和IL-6，辅助DC成熟过程。证据表明，与未感染γδ T细胞共培养相比，与感染γδ T细胞共培养的DC上共刺激分子和MHC II类表达显著上调，提示这些感染亚群分泌的因素对于促进DC成熟和后续CD4⁺启动至关重要。

此外，在人模型中，γδ T细胞和WNV允许性DC可能通过诱导人对poly I:C（TLR3配体）的γδ T细胞反应，在DC介导的I型干扰素存在下相互施加调节影响。

关于抗WNV先天免疫应答，γδ和NK细胞已知协同抑制WNV病毒血症。它们均快速而非特异性地应对WNV感染，通过分泌IFN-γ和/或细胞溶解活性控制病毒播散，强调小鼠和人中的时机、区室化和亚群平衡。NK细胞在体WNV感染中的作用复杂，其功能意义应以器官特异性方式研究，并全面表征其细胞表面多种活化和抑制受体。

γδ T细胞在WNV感染期间被激活并产生促炎细胞因子的机制仍了解甚少。γδ T细胞在WNV暴露期间激活的机制尚不完全清楚；然而，已提出此类感染可能触发Toll样受体（TLRs）信号或参与病原体识别的其他先天免疫受体，如RIG-I或MDA5。实际上，TLR激活后的信号可导致I型IFN产生，这对WNV控制和通过干扰素刺激基因（ISG）的病毒抑制至关重要。多种ISG产物及其受体，包括IRF1、HPSE、RIG-I、MDA5和IFITM3，表现出直接抗WNV活性，凸显IFN介导抗病毒防御的复杂性和广泛性。I/II型IFN促进抗病毒基因表达并增强I型IFN限制早期病毒复制的效应。

所有证据清楚证明γδ T细胞能够通过直接接触和/或释放可溶性因子与适应性（αβ T细胞）和先天（DCs）免疫对应物通讯，从而抑制WNV病毒血症并优化下游先天和适应性免疫。此外，所有这些研究可能凸显将γδ T细胞作为感染性疾病潜在免疫治疗靶点的概念，以及为HIV研究提供的知识，并利用癌症治疗研究的优势。

7 γδ T细胞在WNV致病机制中的作用

在小鼠所有γδ T细胞克隆中，循环Vγ4⁺ T细胞参与WNV致病机制，尽管潜在机制仍不清楚。老年小鼠研究数据显示，它们比年轻成年小鼠更易感WNV感染。一项研究中，老年小鼠显示比年轻成年小鼠更高的V4⁺细胞含量，且当年轻小鼠中V4⁺细胞被耗尽时，WNV诱导脑炎后的死亡率降低。假设机制提示Vγ4⁺ T细胞通过产生促炎细胞因子促进WNV致病机制。TNF-α已知损害血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）完整性，促进WNV进入CNS。在耗尽Vγ4⁺ T细胞的小鼠中，观察到CNS TNF-α水平降低，脑病毒载量减少，WNV脑炎死亡率降低。此外，Vγ4⁺ T细胞还产生IL-17，在多种疾病模型中募集中性粒细胞和巨噬细胞至感染部位。然而，体内阻断IL-17并未改变宿主对WNV感染的易感性。有趣的是，Vγ4⁺ T细胞还通过产生转化生长因子-β（TGF-β）在WNV感染期间负面影响脾脏Vγ1⁺ T细胞反应。这导致病毒血症增加，促进WNV向CNS扩散，并诱导脑炎和加剧脑部炎症。在耗尽Vγ4⁺ T细胞的WNV感染小鼠中，离体抗CD3刺激后其他γδ T细胞亚群的增殖能力高于WNV感染对照，且该差异在TGF-β抑制剂存在下消失。此外，来自WNV感染小鼠的Vγ4⁺ T细胞通过直接和间接途径贡献于升高的IL-10水平，后者已知在WNV宿主免疫中发挥致病作用。在此情境下，Vγ1⁺ T细胞可抑制WNV致敏和挑战小鼠肺中IL-10产生CD4⁺CD25⁺ T细胞，从而在细菌和柯萨奇病毒感染期间发挥保护作用。此外，Vγ1⁺ T细胞促进免疫治疗老年小鼠中WNV病毒血症的控制。一项研究显示，MyD88（髓样分化因子88）缺陷小鼠的γδ T细胞在WNV感染后表现出比野生型小鼠降低的扩增和活化能力，提示MyD88依赖的PRR途径可能在γδ T细胞活化中发挥作用。此外，PRRs、TLR3和TLR7在γδ T细胞中表达，其先天应答参与WNV感染期间保护和致病机制。TLRs已知直接或间激活化γδ T细胞，TLR配体可作为TCR激活人γδ T细胞的共刺激信号。MyD88还对WNV表现出强效作用，抑制其细胞复制并调节免疫细胞向CNS的迁移。WNV是否直接通过其先天免疫受体如TLRs诱导T细胞，或间接通过与TLR表达的先天免疫细胞相互作用，尚需研究。

8 争议与未解决问题

在此背景下，需考虑关于人γδ T细胞在WNV感染中明确作用的未解决问题。首先，必须考虑参与WNV感染的人γδ T细胞亚群（Vδ1或Vδ2循环/组织中）中，哪一个模拟小鼠γδ T细胞反应，以更好利用小鼠实验模型理解其在人中的作用。这一前瞻性概念仍有待确定。一些自然的问题包括：γδ T细胞表型与血液和脑脊液中WNV病毒载量动力学之间是否存在关联？WNV患者是否存在神经侵袭风险和长期后遗症？回答这些问题需要前瞻性、良好表型化的人队列，采用高参数流式细胞术或单细胞工具。

第二，有必要但当前缺乏对老年和年轻受试者WNV-γδ T细胞反应的分析。在此背景下，问题应涉及衰老过程如何削弱WNV感染中IFN-γ保护性γδ T细胞反应，或如何通过更具致病性的γδ-IL-17/TGF-β轴绕过该保护反应。

第三，必须考虑γδ T细胞如何在WNV感染期间识别抗原并被激活的未解决问题。γδ T细胞反应是由WNV感染细胞中积累的PhAg产生，还是由WNV感染期间释放或积累的应激或代谢分子产生？澄清这些点可能对靶向治疗和理解为WNV致病/保护机制涉及的免疫机制具有功能意义。

第四方面涉及γδ T细胞与其他先天和适应性免疫细胞之间的通讯。总体而言，文献包括分别分析γδ和NK细胞WNV反应的研究，而缺乏对γδ T细胞与MAIT、NK、NKT和B细胞之间关系的研究。对这些变量进行系统分析的此类研究，可能凸显WNV免疫控制和病理发展的复杂网络。

最后需评估的方面是在WNV流行期间进行的研究类型。这些研究很少测量WNV病理的结果。未来疫苗试验、涉及IFN和细胞因子调节剂的治疗研究以及WNV队列患者观察性研究，需要标准化的细胞 panel，特别关注表型和功能 profile。

9 未来方向与结论

综上所述，γδ T细胞在小鼠和人WNV感染期间的保护性免疫和病毒致病机制中发挥独特而多方面的作用。γδ T细胞主要是Vγ1⁺ T细胞，参与小鼠WNV播散的即时控制，部分归因于其IFN-γ产生活性。相反，Vγ4⁺ T细胞在小鼠模型中发挥致病作用，在WNV感染期间产生促炎和调节性细胞因子，促进WNV病毒血症和/或脑中更强的炎症反应。此外，γδ T细胞可能通过PRRs直接产生促炎细胞因子识别WNV感染细胞，或间接通过其他可杀伤感染细胞从而清除病毒的免疫细胞。WNV对γδ T细胞的活化增强DC的成熟和活化，最终启动针对病毒的T细胞反应。尽管人和小鼠γδ T细胞亚群及其配体识别机制存在差异，但它们在效应功能和抗病原体感染的保护作用方面表现出显著相似性。人Vγ9Vδ2 T细胞的数据也为保护性免疫做出贡献，通过增强对WNV感染靶细胞的溶细胞和非溶细胞活性，从而展示强效抗病毒活性。然而，γδ T细胞在人WNV感染中的具体作用仍不清楚。需要进一步分析以阐明活化Vδ2产生可溶性抗病毒因子中的其他抗WNV分子，并鉴定Vδ2介导杀伤WNV感染细胞背后的分子机制。总之，该数据为理解人Vδ2 T细胞抗WNV的效应功能提供了见解。此外，用ZA（一种人用商业可及药物）靶向这些细胞可能为WNV感染提供新的潜在免疫治疗策略。研究小鼠γδ T细胞执行的类似活性将加深对与人类WNV疾病研究相关的免疫监视和调控的理解。目前对病原体感染期间γδ T细胞受体生物学意义的理解仍不明确。未来研究还将旨在澄清人γδ T细胞在WNV感染期间作为宿主防御策略的一部分如何被激活或耗竭。