一种新型的双顺反子载体，可诱导平衡的选择性剪接以用于抗体生产

《Scientific Reports》：A novel bicistronic vector inducing balanced alternative splicing for antibody production

　　

摘要

高效且稳定地生产重组单克隆抗体需要在宿主细胞内充分表达轻链（LC）和重链（HC）。传统的双顺反子系统（如基于内源性核糖体进入位点（IRES）或2A肽的载体）常常存在翻译效率不平衡的问题，或者残留的肽标签会降低抗体的质量。我们开发了一种新型的双顺反子表达平台，称为cassette exon-associated (CAE) 系统，该系统利用HEG1基因的可变剪接机制，从单个启动子生成两种mRNA异构体。CAE载体包含合成的剪接供体和受体序列，从而无需额外的肽序列即可实现轻链和重链的表达。经过优化的构建体pCAE3.31能够在多种哺乳动物细胞系中高效表达功能性抗体，其启动子包括鸡β-actin、巨细胞病毒和人延长因子-1α。与基于IRES的系统相比，CAE载体产生的抗体产量提高了8倍。此外，使用CAE系统还可以生产Fab片段。CAE系统是一种紧凑且多功能的双顺反子表达策略，能够确保轻链和重链的表达，避免不必要的肽融合，并且与主要的哺乳动物启动子兼容。这一平台有助于高效生产重组抗体和Fab片段，为抗体筛选及潜在的治疗应用提供了支持。