《Behavioural Brain Research》：Fatty Acid Amide Hydrolase (FAAH) inhibitor reduces persistent inflammatory pain in mice depending on μ- and δ-opioid receptors activity: involvement of heme oxygenase-1
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内源性大麻素系统在慢性痛调制中具有重要作用，其作用于神经系统的效应可能涉及与其他系统的相互作用。研究人员旨在探讨通过抑制脂肪酸酰胺水解酶（FAAH）激活内源性大麻素系统对持续性炎性痛的影响，以及其与血红素加氧酶-1（HO-1）、μ-阿片受体（MOR）和δ-阿片
内源性大麻素系统在慢性痛调制中具有重要作用，其作用于神经系统的效应可能涉及与其他系统的相互作用。研究人员旨在探讨通过抑制脂肪酸酰胺水解酶（FAAH）激活内源性大麻素系统对持续性炎性痛的影响，以及其与血红素加氧酶-1（HO-1）、μ-阿片受体（MOR）和δ-阿片受体（DOR）的相互作用。采用足底内注射完全弗氏佐剂（CFA）建立持续性炎性痛模型的雄性BALB/c小鼠，给予FAAH抑制剂（PF3845）或HO-1诱导剂（CoPP），并联合HO-1抑制剂（SnPP）、MOR拮抗剂（CTAP）或DOR拮抗剂（纳曲吲哚，naltrindole）。结果显示，PF3845和CoPP降低了伤害感受和痛厌恶，该效应被SnPP、CTAP和纳曲吲哚阻断。PF3845降低了杏仁核中FAAH水平并提高HO-1水平，且阻止了基底外侧杏仁核中小胶质细胞表达的升高。本研究强调FAAH抑制是调制持续性痛的相关机制，可能涉及MOR、DOR和HO-1活性。包括杏仁核核团在内的脊髓上回路可能与FAAH抑制剂减轻痛厌恶的发生和发展有关，需进一步研究以确定因果关系。
该研究发表在《Behavioural Brain Research》。研究背景方面，痛是包含感觉和情感成分的负性体验，慢性痛常伴随显著痛苦及情绪障碍。内源性阿片系统与内源性大麻素系统均参与痛调制与情感调节，两者在脑区分布与作用机制上有重叠，其交互作用可能涉及血红素加氧酶-1（HO-1）/一氧化碳（CO）通路，该通路具有抗氧化与神经元调制作用。已有研究显示HO-1诱导剂、CO供体与阿片及大麻素受体存在镇痛交互，但FAAH抑制剂的镇痛效应是否依赖阿片受体与HO-1通路在持续性痛中尚不清楚。因此研究人员假设FAAH抑制可调制持续性炎性痛的感觉与情感成分，且该效应依赖于MOR和DOR，并由HO-1活性介导；为此开展研究以明确PF3845能否降低CFA模型小鼠的伤害感受与痛厌恶，这些效应是否被HO-1抑制剂及MOR、DOR拮抗剂阻断，并探讨脊髓上脑区及小胶质细胞招募在PF3845效应中的作用。
研究人员主要采用以下关键技术方法：实验动物为雄性BALB/c小鼠（Mus musculus），分为无菌生理盐水（SS）对照组与CFA诱导的持续性炎性痛组；药理干预采用腹腔注射HO-1诱导剂CoPP、FAAH抑制剂PF3845、溶剂对照，以及HO-1抑制剂SnPP、选择性DOR拮抗剂纳曲吲哚、选择性MOR拮抗剂CTAP；行为检测包括评估机械性异常性疼痛的von Frey纤毛测试、评估热性痛觉过敏的热板测试、评估痛厌恶情感成分的place-escape/avoidance paradigm（PEAP）；干预后取材进行蛋白质水平检测的Western blot分析，靶脑区包括杏仁核、导水管周围灰质（PAG）、背侧海马，检测FAAH、大麻素受体1（CB1）、HO-1、MOR、DOR相对表达；第二批独立实验增加高架十字迷宫（EPM）评估焦虑样行为；免疫荧光法检测杏仁核核团（基底外侧杏仁核BLA、中央杏仁核CeA）小胶质细胞标记物IBA1表达；统计学采用重复测量双因素ANOVA、单因素ANOVA及Tukey事后检验。
研究结果如下：
3.1. CFA induces persistent inflammatory pain：CFA注射后右爪足底温度差升高，体重增长受抑，右爪机械阈值降低（机械性异常性疼痛），热阈值降低（热性痛觉过敏），左非注射爪机械阈值无显著变化；PEAP中CFA车辆组小鼠在亮舱时间延长（痛厌恶），证实模型成功建立持续性炎性痛。
3.2. FAAH inhibition reduces pain depending on HO-1, DOR, and MOR activities：PF3845与CoPP均提高CFA小鼠右爪归一化机械阈值与热阈值，并减少PEAP亮舱时间（降低痛厌恶）；这些镇痛与抗厌恶效应均被SnPP、纳曲吲哚、CTAP阻断，说明PF3845的感官与情感镇痛依赖于HO-1、DOR、MOR活性。SS对照组各处理间无显著差异。
3.3. FAAH inhibition increases HO-1 levels in the amygdala：Western blot显示，背侧海马与PAG中各蛋白（FAAH、CB1、HO-1、MOR、DOR）在条件与处理间无显著变化；杏仁核中，CFA组DOR水平边际显著高于SS组，处理效应上PF3845降低FAAH水平并提高HO-1水平，CoPP有提高HO-1趋势但无统计学意义；MOR、CB1在杏仁核无显著处理效应。
3.4. FAAH inhibition decreases anxiety-related behavior in saline mice：第二批实验中，SS小鼠给予PF3845后EPM开放臂停留时间与进入次数增加（焦虑相关行为减少），VEHI处理的SS与CFA组间开放臂时间无统计差异但有均值趋势；CFA组内PF3845与VEHI无显著差异，提示炎性痛本身与PEAP测试可能已改变焦虑基线，掩盖PF3845在CFA组的抗焦虑效应。
3.5. FAAH inhibition prevents an increase in microglia in the basolateral amygdala of CFA mice：免疫荧光定量显示，左侧BLA中CFA+VEHI组IBA1强度高于SS+VEHI，而CFA+PF3845组低于CFA+VEHI（交互效应显著）；右侧BLA呈相似趋势但交互无统计显著性；CeA双侧均无显著交互效应。表明PF3845阻止了CFA诱导的BLA小胶质细胞激活上调。
讨论部分总结：PF3845通过提高脑内AEA（未直接检测）发挥镇痛与抗痛厌恶，效应依赖HO-1、MOR、DOR活性。HO-1抑制剂与MOR、DOR拮抗剂均能阻断PF3845与CoPP的镇痛及抗痛厌恶作用，提示HO-1可能是FAAH抑制与阿片受体激活之间的必要中介；既往细胞实验显示AEA可通过Nrf2上调HO-1且不依赖CB1/CB2，本研究发现PF3845在杏仁核提升HO-1并降低FAAH，杏仁核BLA的PF3845阻止小胶质激活，BLA富含CB1与DOR，可能参与情感/动机成分调制。DOR拮抗剂单独在PEAP增加暗舱时间可能与诱导焦虑样行为有关，在独立EPM实验中得到部分支持。各脑区中受体蛋白水平变化有限，可能与品系（BALB/c）、痛模型时长（7天）有关；杏仁核而非海马、PAG显示出FAAH与HO-1变化，提示脊髓上环路特别是杏仁核核团在FAAH抑制剂情感镇痛中值得深究。研究局限包括仅用雄性小鼠、未直接测AEA水平、未做脑区特异性干预因果验证。结论为：FAAH抑制剂PF3845减轻小鼠持续性炎性痛的感觉与情感成分，该效应依赖于HO-1、MOR、DOR活性；PF3845在杏仁核提高HO-1表达并阻止BLA小胶质激活上调；脊髓上回路尤其杏仁核可能参与FAAH抑制剂的痛厌恶调制，未来需用更精确脑区手段及其他FAAH化合物验证，并拓展到雌性及其他痛模型，临床评估FAAH抑制剂潜在风险。
