《Aquaculture Reports》：Inhibitory effects of cells and culture filtrate of the epiphytic dinoflagellate Fukuyoa koreensis on the parasitic ciliate Miamiensis avidus
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摘要：本研究检测了13种微藻（microalgae）及其培养滤液对养殖大菱鲆（olive flounder，Paralichthys olivaceus）主要病原——盾纤目纤毛虫 Miamiensis avidus（嗜食迈阿密纤虫，scuticociliate
摘要：本研究检测了13种微藻（microalgae）及其培养滤液对养殖大菱鲆（olive flounder，Paralichthys olivaceus）主要病原——盾纤目纤毛虫 Miamiensis avidus（嗜食迈阿密纤虫，scuticociliate）的抑制效应。在受试种类中，附生甲藻 Fukuyoa koreensis（朝鲜福冈甲藻）表现出最强的抑制活性，能使 M. avidus 细胞密度降至接种初始浓度以下，且其稀释培养滤液仍具显著抑制作用；相比之下，同样产麻痹性贝毒（paralytic shellfish toxin，PST）的 Alexandrium catenella 与 Centrodinium punctatum 对 M. avidus 生长无抑制效果。以大菱鲆幼鱼进行毒性测试发现，F. koreensis 培养滤液处理后未见明显致死效应或行为异常，虽肝脏热休克蛋白70（heat shock protein 70，Hsp70）表达上调提示存在轻微生理应激。综上，F. koreensis 培养滤液可有效抑制 M. avidus 生长，且对大菱鲆幼鱼无急性毒性，表明其作为控制养殖系统中盾纤虫病（scuticociliatosis）的生物制剂具潜在应用价值，后续需鉴定活性化合物并阐明其作用机制。
论文解读：
《Aquaculture Reports》刊载的此项研究针对养殖大菱鲆（olive flounder，Paralichthys olivaceus）中由致病纤毛虫 Miamiensis avidus（嗜食迈阿密纤虫，一种scuticociliate——盾纤目纤毛虫）引发的高致死性盾纤虫病（scuticociliatosis，由自由生活单细胞盾纤纤毛虫引起的寄生虫性疾病），现行防控依赖抗生素（如阿莫西林、庆大霉素、土霉素等）及化学药物（如甲醛、过氧化氢），存在药物残留与生态安全隐患，亟需安全替代方案。已有研究表明产麻痹性贝毒（paralytic shellfish toxin，PST）的甲藻 Alexandrium andersonii 细胞及滤液可使盾纤虫裂解，提示微藻化感物质（allelochemicals，藻类释放的具有化学防御功能的次级代谢产物）可能作为生物防治剂。附生甲藻 Fukuyoa koreensis 与 Gambierdiscus 近缘并可产生雪卡毒素（ciguatoxin，CTX）与刺尾鱼毒素（maitotoxin，MTX），但其对原生生物的化感抑制效应尚未见报道。研究人员因此筛选13种甲藻/微藻及其滤液对 M. avidus 的抑制能力，锁定 F. koreensis 开展剂量—效应测试，并以大菱鲆幼鱼评估滤液安全性，探讨其作为盾纤虫病生物防控剂的可行性。
主要关键技术方法：研究人员从韩国微藻保藏中心（Korean Microalgae Culture Collection，KMCC）获取13种微藻株（含 F. koreensis KMCC?2399），以f/2?Si培养基培养至指数期；分离藻细胞（截留于3 μm滤膜）与培养滤液（filtrate），设原液（×1）与1/2稀释液分别与 M. avidus（分离自感染大菱鲆脑组织，异养培养于添加比目鱼粉的f/2?Si海水培养基）共培养，以初始接种密度1000 cells mL?1测定24 h与48 h相对细胞密度（relative cell density＝各时点细胞数/初始细胞数×100%）评价抑制效果，经初筛后对 F. koreensis 滤液增设×1/4、×1/8梯度做10 d动态监测；取大菱鲆幼鱼（约10周龄）暴露于 F. koreensis 滤液（×1/8稀释）48 h后常规换水饲养2周记录死亡率与体表异常，取肝脏组织提取总RNA反转录为cDNA，采用实时荧光定量PCR（quantitative real?time PCR，qPCR）以延伸因子1α（elongation factor?1α，Ef?1α）为内参，检测热休克蛋白70（heat shock protein 70，Hsp70）相对表达量（2?ΔΔCt法）。
研究结果：
3.1. Growth responses of Miamiensis avidus exposed to microalgal cells and their filtered culture medium（M. avidus 暴露于微藻细胞及其过滤培养液后的生长响应）
研究人员将 M. avidus 分别与13种微藻细胞悬液及对应过滤培养液共培养，比较48 h相对细胞密度。结果显示多数产PST甲藻（Alexandrium catenella、Centrodinium punctatum）对 M. avidus 无抑制；而 F. koreensis 细胞处理组使 M. avidus 密度降至初始接种水平以下（负增长），抑制强度显著高于近缘附生甲藻 Gambierdiscus jejuensis 与 Ostreopsis sp.，且 F. koreensis 滤液组亦具同等抑制效果，表明抑制物质可分泌至胞外培养基，不依赖细胞物理接触。由此得出结论：F. koreensis 是13种受试微藻中对 M. avidus 抑制最强的种类，其抑制作用源于培养液中可溶性化感/毒性物质而非PST类毒素。
3.2. Growth responses of M. avidus at different dilution levels of the culture filtrates of Fukuyoa koreensis（不同稀释度 F. koreensis 培养滤液对 M. avidus 的生长响应）
研究人员用 F. koreensis 培养滤液设置×1（原液）、×1/2、×1/4、×1/8四个稀释度与 M. avidus 共培养10 d。对照组 M. avidus 于5 d内增殖至约初始6倍而后衰减；各处理组在5 d内均被抑制，其中×1与×1/2组于第2 d相对密度分别下降57%与35%，且抑制程度随滤液稀释而减弱但仍具剂量依赖性。由此得出结论：F. koreensis 培养滤液中存在热稳定或可溶性的抑制因子，其抑制效力与滤液浓度呈正相关，即使稀释至1/8仍可在短期内遏制 M. avidus 增殖。
3.3. Toxicity of culture filtrates of Fukuyoa koreensis to olive flounder juveniles（F. koreensis 培养滤液对大菱鲆幼鱼的毒性）
研究人员将大菱鲆幼鱼单次暴露于×1/8稀释 F. koreensis 滤液，观察2周。对照组与处理组各出现1尾死亡（第10 d），无行为异常或体表损伤；qPCR检测显示处理组肝脏 Hsp70 mRNA 相对表达量显著高于对照组（p＜0.05），提示轻度应激但无急性毒性。由此得出结论：试验所用浓度 F. koreensis 培养滤液对大菱鲆幼鱼无致死或致畸急性毒性，Hsp70上调反映低水平环境应激，整体符合水产应用安全初步要求。
讨论与结论翻译：
本研究首次报道附生甲藻 F. koreensis 的化感/毒性分泌物可抑制致病盾纤虫 M. avidus 生长，其培养滤液在有效抑制浓度下对大菱鲆幼鱼无急性毒性，具备作为养殖系统盾纤虫病生物防控剂的潜力。抑制活性并非源于麻痹性贝毒（PST），可能是 F. koreensis 分泌的雪卡毒素（CTX）类或新型化感化合物；细胞组与滤液组抑制效果相当，区别于浮游甲藻需靠物理接触的杀纤毛虫模式，符合附生甲藻低机动性的生物学特征。今后需鉴定活性成分、明确作用机理、评估成鱼毒性及活性物质在鱼体内的生物富集风险（因 F. koreensis 有产CTX/MTX潜能），并建立底栖甲藻大规模培养工艺以实现实际应用。
