犬接受胫骨平台水平截骨术（Tibial Plateau Leveling Osteotomy, TPLO）时关节腔内注射同种异体犬脂肪来源干细胞（Adipose-Derived Stem Cell, ADSC）富集分泌组（Enriched Secretome, ADSC-Se）的前瞻性双盲随机试点试验

《Veterinary Research Communications》：Intra-articular injection of allogeneic canine adipose-derived stem cell enriched secretome in dogs undergoing tibial plateau leveling osteotomy: a prospective double-blind and randomized pilot trial

　　

本试点研究评估了犬接受胫骨平台水平截骨术（Tibial Plateau Leveling Osteotomy, TPLO）治疗前十字韧带疾病（Cranial Cruciate Ligament Disease, CCLD）并发骨关节炎（Osteoarthritis, OA）时，术中关节腔内注射同种异体犬脂肪来源干细胞（Adipose-Derived Stem Cell, ADSC）富集分泌组（Enriched Secretome, ADSC-Se）的短期及中期疗效，重点关注术后恢复及OA进展。20只客户所有犬被随机分配（每组n=10）至对照组（Control Group, CG，接受安慰剂）或治疗组（ADSC-Se组，TPLO结束时接受250 μg ADSC来源富集分泌组关节腔注射）。术后至150 d评估跛行、膝关节疼痛、加速度计活动量，以及影像学（X线）和关节超声评分评估的OA相关改变。ADSC-Se组跛行评分（中位数3降至1）和膝关节疼痛评分（中位数2降至0）在术后15 d降低，而CG组类似改善分别出现在术后60 d和90 d。加速度计结果无组间差异。影像学评估显示CG组中位OA评分进展（1升至2），而ADSC-Se组自术后15 d起OA评分下降（1降至0）并保持稳定。超声检查显示ADSC-Se组自术后30 d起中位关节积液评分降低（1降至0），软骨外观由变薄恢复至正常；CG组积液无改善且软骨恶化。术后30 d TPLO骨愈合评分ADSC-Se组更高（10分制均值差1.9，5分制均值差1）。关节腔内注射ADSC富集分泌组与更快的术后临床改善及减少的OA进展相关，提示其作为TPLO生物学辅助治疗（Biologic Ad adjunct）的潜力。

论文解读：同种异体犬脂肪来源干细胞富集分泌组辅助TPLO治疗犬前十字韧带疾病的试点临床研究

研究背景与目的

犬前十字韧带疾病（Cranial Cruciate Ligament Disease, CCLD）常继发退行性关节病（Degenerative Joint Disease, DJD）/骨关节炎（Osteoarthritis, OA），是犬骨盆肢跛行最常见原因。胫骨平台水平截骨术（Tibial Plateau Leveling Osteotomy, TPLO）是目前广泛使用的动态稳定术式，但无法阻止术后OA进展，且部分患者短期至中期临床恢复欠佳。现有辅助治疗如富血小板血浆（Platelet-Rich Plasma, PRP）、透明质酸（Hyaluronic Acid, HA）及营养补充剂在控制OA进展或促进恢复方面效果有限。脂肪来源干细胞（Adipose-Derived Stem Cell, ADSC）的分泌组（Secretome，含细胞外囊泡Extracellular Vesicles, EVs及可溶性蛋白）具有抗炎、抗氧化及软骨再生潜能，且较完整细胞规避了免疫排斥与致瘤风险。本研究假设关节腔内注射同种异体犬ADSC富集分泌组（ADSC-Enriched Secretome, ADSC-Se）可促进TPLO术后早期临床恢复并减缓中期OA进展，通过临床、影像学及超声参数验证其作为TPLO生物学辅剂的有效性。

主要技术方法概要

研究为前瞻性、双盲（主人及评估者）、安慰剂对照试点临床试验。样本为20例确诊单侧CCLD、符合纳入标准（1–7岁，10–45 kg，胫骨平台角TPA 15°–35°，无非其他关节DJD及全身性疾病）的客户所有犬，随机分为对照组（CG，n=10，关节腔注射0.7 mL乳酸林格氏液）与治疗组（ADSC-Se组，n=10，关节腔注射含250 μg蛋白的ADSC富集分泌组溶于0.7 mL乳酸林格氏氏液），均在TPLO术中关节切开术后注入。ADSC-Se由三家健康雌性犬供体ADSC无血清培养上清经超滤（100 kDa）富集并混合池化制备，蛋白定量采用Bradford法。术前及术后多个时间点（24 h、48 h、15±5 d、30±5 d、60±5 d、90±5 d、120–150 d）评估：(1)颈戴三轴加速度计（Accelerometry）记录24 h活动量；(2)5级跛行评分（Lameness Score, 0–4）；(3)5级膝关节疼痛评分（Stifle Pain Score, 0–4）；(4)X线6级OA评分（Osteophyte/Osteophytosis及积液评估）及术后30 d骨愈合评分（5分及10分制）；(5)关节超声评估关节积液（无/轻/中/重）及软骨厚度（正常/薄/厚肿）。统计学采用非参数检验（Mann–Whitney U、Friedman）及参数检验（t检验、ANOVA），P≤0.05为差异显著，计算基线变化值（Δ）进行组内时序与组间比较。

研究结果

患者数据与手术结局（Patients' data & Surgical outcomes）

最终完成研究19例（CG 9例，ADSC-Se 10例），两组年龄体重无差异。ADSC-Se组肉眼DJD严重程度（P=0.0057）及半月板损伤比例（60% vs 33.33%）高于CG。两组各有轻微术中并发症（胫前动脉分支损伤、髌韧带轻微医源性损伤）及术后轻微并发症，无严重不良事件与治疗直接相关。

加速度计评估（Accelerometry assessment）

各组内各时间点总活动量、久坐/中等/剧烈活动时间无显著差异；两组间亦无统计学差异。虽未达显著性，ADSC-Se组在术后30 d及60 d剧烈活动持续时间略长于CG。两组剧烈活动在术后24 h均降低，30 d回升。

跛行评估（Lameness assessment）

CG跛行评分显著下降仅见于术后60 d；ADSC-Se组术后15 d即较术前显著下降（术前中位3–4，术后15 d中位1）。Δ跛行评分显示ADSC-Se组早期改善幅度更大（15 d中位Δ -1.5 vs CG -1；30 d -3 vs -2），虽未达显著性但呈明确加速恢复趋势。

膝关节疼痛评估（Stifle pain assessment）

CG疼痛评分显著下降见于术后90 d；ADSC-Se组术后15 d即较术前显著下降（术前中位2，术后15 d中位0）。Δ疼痛评分ADSC-Se组在15 d（中位Δ -2 vs CG -1，P=0.04）及30 d（中位Δ -2 vs -1，P=0.03）显著大于CG，证实更早镇痛效果。

影像学评估（Radiographic assessment）

完全骨愈合时间无组间差异（CG 86.7±18.0 d vs ADSC-Se 81.0±20.2 d，P>0.05），但术后30 d骨愈合评分ADSC-Se组显著更高（10分制及5分制均P<0.05）。OA评分：CG随时间进展（中位1→2），ADSC-Se组术后15 d起OA评分较术前降低（中位1→0）并维持稳定至终点。Δ OA评分CG在30 d中位+1，ADSC-Se组0（P=0.08），60 d类似趋势（P=0.07），提示分泌组抑制OA放射学进展。

超声评估（Ultrasonographic assessment）

关节积液：CG术后持续存在轻—中度积液无消退；ADSC-Se组术后30 d起积液基本消失（中位1→0），组间各时间点差异显著。软骨表现：CG术后持续肿胀至60 d；ADSC-Se组各术后时间点软骨厚度均呈正常，自30 d起与CG差异显著，提示软骨炎性水肿减轻及结构保护。

讨论与结论（Discussion & Conclusion）

研究人员指出，本研究首次在犬TPLO临床模型中证明同种异体ADSC富集分泌组关节腔注射可加速术后临床恢复（疼痛与跛行15 d内改善vs对照组60–90 d）并抑制影像学及超声下OA进展（放射学OA评分不升、积液消退、软骨厚度正常化），同时早期（30 d）促进截骨部位骨痂成熟。其机制归因于分泌组的抗炎（下调促炎细胞因子、上调IL-10）、免疫调节及潜在软骨基质合成刺激作用。研究局限性包括样本量小、组间DJD及半月板损伤基线不均、分泌组仅按蛋白定量未全面表征外泌体/细胞因子谱。未来需大样本、均质分组及分泌组成分标准化研究确认疗效。

研究结论翻译：

本研究发现，犬接受TPLO治疗时关节腔内注射同种异体ADSC富集分泌组是一种有前景的辅助疗法，该制剂可促进CCLD患犬更快的临床恢复，并减轻术后膝关节OA的临床及影像学进展参数。本文结果强化了ADSC富集分泌组在犬OA中的治疗潜力，支持其作为犬CCLD外科治疗的辅助用药，但仍需大规模临床试验验证。