摘要
灰葡萄孢是一种重要的植物病原真菌，会给园艺作物带来巨大经济损失，因此亟需寻找可持续的替代品来取代合成杀菌剂。本研究探讨了物理、化学和生物培养参数对哈茨木霉 BOL-12QD所产生的培养滤液抗真菌活性的影响。通过逐步优化光照条件、碳源和氮源组成、马铃薯品种选择、与灰葡萄孢共培养以及挥发性物质介导的相互作用等培养条件，评估了其抗真菌活性。抗真菌活性是通过检测该培养滤液对灰葡萄孢菌丝生长的抑制作用来确定的。在各项因素中，紫光照射、含有5 g L-1葡萄糖和250 g L-1马铃薯提取物的培养基、Leke Pek’e马铃薯品种、以硝酸铵作为氮源，以及以104分生孢子 mL-1的浓度与灰葡萄孢共培养，这些条件能产生最强的抑制效果。将上述最优条件整合应用后，抗真菌活性得到进一步提升，抑制率可达62%。在所测试的条件下，哈茨木霉 BOL-12QD产生的挥发性有机化合物几乎不具备抗真菌活性，这说明在该体系中挥发性物质介导的拮抗作用作用有限。相比之下，通过1H NMR指纹技术对比分析发现，培养条件会改变细胞外代谢物的谱图特征，最优处理条件下的代谢特征与其他条件有明显差异。在小鼠腹膜巨噬细胞中的细胞毒性试验显示，浓度高达200 μg mL-1时细胞存活率并未出现显著下降。以最优条件配制的培养滤液以250 mg kg-1 d-1的剂量连续给予10天后，虽然会出现暂时性的治疗相关症状，但并未导致动物死亡，这表明还需要进一步开展详细的毒理学研究。总体而言，这些研究结果表明哈茨木霉 BOL-12QD的抗真菌活性会受到环境、营养和生物培养参数的共同调控。这些结果不仅证明了经优化处理的培养滤液可作为生物活性代谢物的来源，用于生物防治领域，同时也凸显了进行综合生化和毒理学评估的重要性。
