一种新型环保HPTLC方法同时测定厄多司坦、布洛芬和伪麻黄碱药物组合

《Scientific Reports》：A novel eco-friendly HPTLC approach for the simultaneous determination of erdosteine, ibuprofen and pseudoephedrine pharmaceutical combination

　　

本文介绍了第一个经过验证且环保的高效薄层色谱（HPTLC）方法，用于同时测定厄多司坦（ERD）、布洛芬（IBU）和伪麻黄碱（PSE）药物组合。该药物组合通过在同一治疗方案中提供黏液溶解、镇痛、抗炎和减充血作用，有助于治疗与上呼吸道感染（URTIs）相关的症状。色谱分离在硅胶60F₂₅₄板上有效实现，使用由乙酸乙酯：甲醇：氨水（7:1.4:0.5，v/v）组成的流动相，并在210 nm进行紫外检测。分析物得到良好分离，ERD、IBU和PSE的阻滞因子（R_f）分别为0.06、0.23和0.35。该方法显示出高准确度，回收率范围为98.4%至101.2%，并且精密度优异，%RSD值低于2%。该方法还显示出高灵敏度，ERD、IBU和PSE的检测限分别为0.014 μg/点、0.002 μg/点和0.150 μg/点。使用Analytical EcoScale、Analytical GREEnness（AGREE）计算器和绿色分析程序指数（GAPI）确认了该方法的环境可持续性。此外，使用红-绿-蓝（RGB12）模型方法评估了其整体白度特征，突出了其分析效率和环保设计。

**研究背景与问题**
上呼吸道感染（URTIs）是常见疾病，常伴随鼻塞、咳嗽、炎症等多种症状。临床上采用厄多司坦（ERD，黏液溶解剂）、布洛芬（IBU，非甾体抗炎药）和伪麻黄碱（PSE，减充血剂）的联合用药方案，可同时发挥黏液调节、镇痛抗炎和减充血作用，提高患者依从性。然而，现有分析方法存在局限：文献中虽有HPLC、分光光度法、电化学法等单独或二元组合的测定报道，但针对该三元混合物的同时分析方法仅有一篇HPLC研究（Ozakar等，2020），该方法运行时间长达18分钟，使用梯度洗脱和较高有机溶剂消耗，环境负担较大。高效薄层色谱（HPTLC）相比HPLC具有溶剂用量少、成本低、通量高、操作简便等优势，且更符合绿色分析化学理念。因此，研究人员旨在开发一种首例经过验证的、环保型HPTLC方法，用于同时测定ERD、IBU和PSE，并系统评估其绿色性和白度。

**研究内容与结论**
研究人员成功开发并验证了一种HPTLC方法，采用硅胶60F₂₅₄板，以乙酸乙酯:甲醇:氨水（7:1.4:0.5，v/v）为流动相，在210 nm进行紫外检测。该方法实现了ERD、IBU和PSE的良好分离，R_f值分别为0.06、0.23和0.35。验证结果表明：方法线性良好（r≥0.999），回收率98.4%~101.2%，精密度（%RSD<2%），检测限（LOD）低至0.014 μg/点（ERD）、0.002 μg/点（IBU）和0.150 μg/点（PSE）。方法选择性、稳健性均符合ICH Q2(R1)指南。将该方法应用于实验室制备的模拟混合物（浓度参考市售单方制剂），回收率满意。进一步使用Analytical EcoScale、AGREE和GAPI三种工具评估绿色性，该HPTLC方法均获得最优评分（Eco-Score最高、AGREE得分0.69、GAPI图示最绿），显著优于已报道的HPLC及其他HPTLC方法。RGB12模型白度评估显示，该方法在红（分析性能97.5%）、绿（环境可持续性93.8%）、蓝（经济性93.3%）三方面均衡优异，总体白度评分94.9%，被认定为“白色”方法。该研究首次报道了三元混合物ERD-IBU-PSE的HPTLC同时测定方法，为制药行业中可持续、高通量的质量控制提供了新工具，尤其在资源受限和环境法规严格的场景下具有重要应用价值。论文发表在《Scientific Reports》。

**关键技术方法**
研究人员采用CAMAG Linomat IV自动点样仪（瑞士）将样品以5 mm带宽、5 mm间距点样于硅胶60F₂₅₄ HPTLC铝板上，使用CAMAG双槽玻璃层析缸（15 cm×20 cm×30 cm）以乙酸乙酯:甲醇:氨水（7:1.4:0.5，v/v）为流动相进行上行展开（室温预饱和20分钟）。展开后以CAMAG TLC Scanner III（氘灯，210 nm）进行光密度扫描定量。方法验证依据ICH Q2(R1)指南。绿色性评估采用Analytical EcoScale、AGREE（v1.0）和GAPI工具；白度评估采用RGB12模型。无真实样本队列，仅使用实验室制备的模拟混合物（浓度参考市售Muctotec胶囊^?、Sinlerg片剂^?和Anti-flu胶囊^?中的单方剂量）。

**研究结果**
**方法开发与优化**：研究人员系统调整流动相组成，最终确定乙酸乙酯:甲醇:氨水（7:1.4:0.5，v/v）为最优体系，使ERD、IBU和PSE的R_f分别达0.06、0.23和0.35，分离度和拖尾因子均符合系统适用性要求。点样带宽和间距优化为5 mm，可在10×20 cm板上点样18个条带。检测波长经紫外扫描选定210 nm。

**方法验证**：（1）**线性与范围**：ERD、IBU、PSE在0.08–2、0.05–2、0.8–10 μg/点范围内线性良好，r≥0.999，斜率RSD<2%。（2）**准确度与精密度**：三个浓度水平（每水平3次）的日内和日间%RSD及%Er均<2%，表明方法准确且精密。（3）**检测限与定量限**：LOD分别为0.014、0.002、0.150 μg/点，LOQ分别为0.048、0.008、0.500 μg/点。（4）**选择性与特异性**：分析不同比例实验室混合物，回收率、%RSD和%Er均满意；峰纯度光谱证实无共洗脱。（5）**稳健性**：微小改变流动相比例（±0.1%）、体积（±0.5%）和检测波长（±1 nm）对峰面积和R_f无显著影响。

**应用：实验室混合物分析**：制备两种模拟混合物（分别含ERD 1.5/7.5 μg/点、IBU 2/10 μg/点、PSE 0.3/3 μg/点），色谱图显示分离良好，回收率%RSD<2%，%Er极小。

**绿色性评估**：与已报道的色谱方法（HPTLC单方/二元法、HPLC三元/二元法）比较，本方法在Analytical EcoScale得分最高（PPs最低）、AGREE得分0.69（最高）、GAPI图示显示最少红区，证明其为最环保的方法。

**白度评估**：RGB12模型显示，本方法红（分析性能）97.5%、绿（环境）93.8%、蓝（经济）93.3%，综合白度94.9%，优于所有比较方法，成为“白色”方法。

**与相关方法比较**：对比其他HPTLC方法（如使用甲苯、二氯甲烷、氯仿等有毒溶剂），本方法采用更安全的乙酸乙酯、甲醇和氨水，且首次实现三元同时测定。相比HPLC，HPTLC通量高、溶剂消耗低、成本低，更适合常规质控。

**讨论与结论**
**讨论**：研究人员在讨论部分指出，该方法可有效缓解溶剂使用和环境负担，且HPTLC允许完全蒸发溶剂后再检测，进一步降低危害。但存在局限性：因目前无市售三联制剂，仅适用于实验室混合物；非稳定性指示方法，无法分辨降解产物。未来可开展强制降解研究，扩展至其他辅助治疗URTIs的药物。
**结论（翻译）**：本研究介绍了一种经过验证且可持续的HPTLC方法，用于同时测定厄多司坦（ERD）、布洛芬（IBU）和伪麻黄碱（PSE），这是一种用于上呼吸道感染（URTIs）症状管理的三联药物组合。该方法表现出优异的分析性能，包括高灵敏度、精密度和准确度，同时在变化条件下保持稳健性。迄今为止，尚无HPTLC方法报道用于该混合物，因此本研究对上述化合物的药物分析做出了重要贡献。除分析优点外，该方法还因其环境和经济可持续性而突出。基于Analytical EcoScale、AGREE和GAPI方法的全面绿色性评估确认了其最小的生态足迹，而RGB12模型则突出了其在分析效率、环境可持续性和成本效益之间的平衡表现。与传统的HPLC、分光光度法和荧光分光光度法相比，该HPTLC方法提供了一种更可持续、高通量且成本效益高的替代方案，尤其适用于资源有限和环境受控环境中的常规质量控制。