死还是活？一种用于检测生殖支原体与淋病奈瑟菌存活状况的新型流式细胞术方法

《Journal of Microbiological Methods》：Dead or alive? A novel flow cytometric method to determine microbial viability in Mycoplasma genitalium and Neisseria gonorrhoeae

　　

Ella O. Herring|Toby I. Maidment|Taylah K. Anderson|Katelyn L. Gough|Gerald L. Murray|Jorgen S. Jensen|Jacob A.D. Tickner|David M. Whiley|Emma L. Sweeney|Emily R. Bryan

澳大利亚布里斯班4006，昆士兰大学，昆士兰大学临床研究中心

摘要

淋病奈瑟菌和生殖支原体每年都会感染超过1.5亿人，而且这两种病原体正迅速对所有现有治疗手段产生抗菌药物耐药性。用于诊断和治愈检测的PCR技术会无论微生物是否存活都扩增其核酸，从而导致假阳性结果，进而造成抗生素的过度使用。为了改进诊断方法，需要能够准确评估微生物在接触抗生素及其他刺激因素后的存活状况和复制情况的检测方法。在本研究中，我们提出了一种流式细胞术方法，用于定量评估淋病奈瑟菌和生殖支原体的存活状况和复制情况。我们使用了膜排斥染料（固定型存活染色剂700）来区分活细胞和死细胞，同时使用细胞追踪染料（CellTrace Violet）来追踪细胞的复制情况。该流式细胞术检测在有无营养匮乏条件以及经过灭活处理（通透化处理或紫外线照射）的情况下都进行了测试，以此验证该检测方法能否区分处于复制状态、未复制状态以及无存活能力的细菌群体。我们将流式细胞术的结果与qPCR检测以及培养法的结果进行了比较。结果显示，qPCR会高估存活细胞的数量（高估两到四倍），且无法区分存活细胞和死细胞（p?>?0.05），而流式细胞术则能够可靠地区分这些细胞群体，以及处于复制状态和未复制状态的亚群。这种新的流式细胞术方法可以用来改进现有的体外实验技术，比如抗菌药物敏感性测试，还可用于细胞分选，从而在单细胞和群体层面开展进一步分析，为寻找用于诊断工具的存活能力相关靶标提供依据。