两种市售抗呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus, RSV）?IgG及IgA酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）在临床相关人群中的诊断性能与可互换性评估

《Microbiology Spectrum》：Diagnostic performance and interchangeability of two commercial anti-RSV?IgG and IgA ELISAs across clinically relevant populations

　　

摘要：随着呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus, RSV）疫苗及长效单克隆抗体预防制剂的引入，对抗RSV特异性抗体的准确评估日益重要。然而，市售RSV?酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）的分析性能与可互换性尚缺乏明确定义，其在临床诊断实践中的可靠性仍存在不确定性。研究人员对广泛使用的Euroimmun?及Virotech?ELISA检测总抗RSV?IgG和IgA进行了头对头比较，共纳入462份血清，来自四个队列：健康成人（n = 100）、孕妇（n = 59）、儿童（n = 101）及接种过疫苗的移植受者（n = 101；基线及第30天）。研究人员定量了前融合F蛋白（prefusion-F, pre-F）特异性IgG以推断具功能相关性的抗体应答。评估了抗RSV?IgG检测的定性一致性、定量偏倚、相关性及年龄依赖性模式。两种试剂盒抗RSV?IgG检测的定性符合率为83.8%；然而Virotech?ELISA系统性地给出更高的IgG检出率及定量值（P < 0.001）。总抗RSV?IgG与各队列pre-F?IgG均显著相关，其中儿童（rs= 0.92）及接种后移植受者（rs= 0.79）相关性最强。抗RSV?IgA检出率低（6%–11%），试剂盒间符合率为79.4%。健康成人及孕妇中IgG?IgA相关性弱（rs< 0.25），儿童及接种后移植受者中为中度相关（rs≥ 0.40）。Euroimmun?与Virotech?ELISA在分析上不可互换，存在试剂盒依赖性系统差异。通过对不同临床相关人群中总抗RSV?IgG、pre-F?IgG及IgA的综合分析，强调需结合试剂盒类型及受试人群进行解释，以支持RSV血清学在血清流行病学研究及诊断实验室实践中的可靠应用。

本文解读基于发表于《Microbiology Spectrum》的论文《Diagnostic performance and interchangeability of two commercial anti-RSV?IgG and IgA ELISAs across clinically relevant populations》。

研究背景与目的

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus, RSV）是婴幼儿、老年人及免疫低下人群下呼吸道感染的重要病原。随着pre-F（prefusion F protein，前融合F蛋白）亚基RSV疫苗（Arexvy、Abrysvo）及长效单克隆抗体（nirsevimab）的临床应用，RSV血清学检测在疫苗免疫原性评价、上市后监测及人群血清流行率调查中的作用愈发重要。全病毒抗原ELISA检测总抗RSV免疫球蛋白反映既往累积暴露，而pre-F特异性IgG更接近中和保护性免疫，二者互为补充。但目前市售RSV ELISA的分析性能、定量可比性及跨人群适用性缺乏系统验证，不同厂家试剂盒因抗原制备、校准及信号判读差异可能导致结果不可比，影响多中心研究和纵向监测。为此，研究人员开展本研究，对同一批临床血清并行检测两种常用商业ELISA，并结合pre-F特异性IgG定量，明确其定性/定量一致性、偏倚及与功能性抗体的关联，为RSV血清学合理选择与结果解读提供依据。

主要技术方法与队列

研究人员采用单中心回顾性设计，收集瑞士巴塞尔大学医院四个临床来源的冷冻血清共462份——健康成人献血员（n=100，未接种疫苗）、早孕期孕妇（n=59，未接种疫苗）、儿童（n=101，未接受nirsevimab）、异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic cell transplant, HCT）受者（n=101，接种pre-F疫苗Arexvy后于基线及第30天各采一次得202份标本）。所有标本同步用Euroimmun抗RSV?IgG/IgA ELISA与Virotech抗RSV?IgG/IgA ELISA（DS2系统）检测，另取子集用ACROBiosystems pre-F特异性IgG免疫测定（Epoch分光光度计）定量。按厂商说明书计算cutoff判定阴/阳/灰区，统计学采用Wilcoxon配对检验、Spearman秩相关及Bland?Altman分析评估一致性及偏倚。

研究结果

Comparison of anti-RSV?IgG detection by two ELISAs across study cohorts（两种ELISA跨队列抗RSV?IgG检测的比较）

经462份血清定性判读，两试剂盒总体符合率83.8%，健康成人最高（92.0%）、孕妇最低（62.7%）。Virotech?ELISA将更多Euroimmun判为灰区/阴性的标本定为阳性，总体IgG阳性检出率更高。定量OD_450nm值Virotech系统性高于Euroimmun（P < 0.0001），Bland?Altman示Euroimmun存在负向偏倚（均值差?0.293至?0.474 OD单位），该趋势在HCT受者基线与接种后第30天均保持一致，证实两法不可定量互换。

Comparison of anti-RSV?IgA detection by two ELISAs across study cohorts（两种ELISA跨队列抗RSV?IgA检测的比较）

抗RSV?IgA总体定性符合率79.4%，各队列相近（76.2%–87.1%），绝大部分标本双阴性。Euroimmun?ELISA IgA检出率及定量OD值高于Virotech（P < 0.0001），Bland?Altman示Euroimmun正向偏倚（均值差0.054–0.179 OD单位），同样不具备定量可互换性。

Correlation between total anti-RSV?IgG and pre-F?IgG（总抗RSV?IgG与pre-F?IgG的相关性）

Euroimmun总IgG与pre-F?IgG显著相关：儿童最强（r_s= 0.92, P < 0.001），HCT受者接种后亦强（r_s= 0.79, P < 0.001；基线r_s= 0.80，第30天r_s= 0.78），健康成人中等偏弱（r_s= 0.36），孕妇中度（r_s= 0.61）。提示近期感染/疫苗接种使pre-F组分占total IgG比重增大，total IgG可近似反映保护性免疫；远期暴露成人因含较多post-F及G蛋白抗体致相关性减弱。儿童pre-F?IgG无单纯年龄线性相关，1–5岁离散大，≥11岁趋稳，符合累积暴露后抗体水平平台化。

Correlation between anti-RSV?IgG and IgA levels（抗RSV?IgG与IgA水平的相关性）

Euroimmun两指标仅HCT受者呈弱?中度相关（r_s= 0.34, P < 0.001），其余队列无显著相关；Virotech在儿童（r_s= 0.40）及HCT受者（r_s= 0.56）显著相关且HCT接种后相关系数升高（基线r_s= 0.52升至第30天r_s= 0.58）。说明血清IgA主要标志近期抗原刺激，非累积免疫的稳定替代物。

Age-stratified anti-RSV?IgG and IgA seroprevalence in children（儿童按年龄分层的抗RSV?IgG与IgA血清阳性率）

IgG阳性率随龄上升：1–4岁76.9%，5–9岁89.7%，≥10岁100%，符合儿童期累积暴露近普遍阳转。IgA阳性率低且无年龄递增趋势（1–4岁19.2%，5–9岁13.8%，≥10岁约≥20.0%），反映IgA为短暂反应，依赖近期/现症暴露。

讨论与结论总结

讨论指出虽两ELISA对IgG定性符合尚可，但因全病毒抗原制备（细胞系来源致G蛋白糖基化差异影响表位暴露）、微孔板包被、校准（Euroimmun用内标相对单位/mL，Virotech用cutoff比值）等不同产生系统定量偏差，在未引入WHO抗RSV血清国际标准前跨平台直接比较数值不当。Total IgG全病毒ELISA反映累积暴露历史，pre-F?IgG更贴近中和/疫苗相关免疫——近期暴露（儿童原发/再感染、接种后HCT）时二者强相关可用total IgG估保护水平，但无近期免疫激活的成人尤其孕妇因抗体谱复杂及血液稀释/胎盘转运等因素致关联减弱，孕妇total IgG不宜单独推定保护性。血清IgA为近期暴露/免疫增强 transient标记，健康成人及孕妇低检出且IgG?IgA不相关，儿童及近期接种者可有中度相关及较高检出，不支持单用血清IgA诊断急性RSV感染（首选核酸检测），且不经胎盘故儿童血清IgA代表自身体液应答。研究局限含单中心、缺详细临床/病毒学时序及活病毒中和实验、无黏膜配对标本。

结论（翻译）

本研究表明Euroimmun与Virotech两种市售RSV ELISA在分析上不可互换。尽管抗RSV?IgG定性判定一致性较高，但存在试剂盒依赖性系统定量差异，反映抗原组成、校准策略及信号解读之别。结果强调RSV血清学结果需按特定试剂盒解释，在无统一参比标准时不应跨平台直接比较定量值。通过系统表征多临床相关人群的试剂盒性能，本研究为临床诊断实践、血清流行病学监测及疫苗诱导免疫纵向监测中RSV ELISA的选择与结果解读提供了循证框架。