《Preventive Veterinary Medicine》：The “piroplasmosis-like” syndrome in cattle on Réunion Island: Spatial and temporal distribution of cases and clinical impact of co-infections
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本研究报告了对留尼汪岛（Réunion Island）牛临床"类梨形虫病综合征（piroplasmosis-like syndrome, PLS）"病例的调查结果，PLS涵盖血液寄生虫病（haemoparasitoses）——包括牛无形体病（由边缘无浆体 An
本研究报告了对留尼汪岛（Réunion Island）牛临床"类梨形虫病综合征（piroplasmosis-like syndrome, PLS）"病例的调查结果，PLS涵盖血液寄生虫病（haemoparasitoses）——包括牛无形体病（由边缘无浆体 Anaplasma marginale 引起）和巴贝斯虫病（由牛巴贝西虫 Babesia bovis、B. bigemina 引起），以及环状病毒病（orbiviroses），主要为流行性出血病（epizootic haemorrhagic disease, EHD）和蓝舌病（bluetongue, BT）。2024年2月至2025年8月期间，共采集170头出现PLS症状的牛血样，采用实时荧光定量PCR（RT?qPCR）检测多种病原体。混合感染常见，影响67%的牛只。尤其 A. marginale 与 B. bovis 混合感染较单独 A. marginale 感染临床表现更严重，死亡率为50%，而全体采样牛只死亡率为33%。空间分布显示PLS临床病例仅分布于岛屿西部和南部。不同气候养殖带感染率差异显著，中央高原（Central high?altitude plain）发病率最高（12.8例/1000头牛）。时间变化呈明显季节性，多数病例发生于南半球夏季（11月至次年4月）。研究期间偶检测到环状病毒（Orbivirus）感染病例。
留尼汪岛牛"类梨形虫病综合征(PLS)"的空间分布、季节流行特征及混合感染临床影响——论文解读
留尼汪岛（法国海外省，印度洋）牛养殖业长期受"类梨形虫病综合征（piroplasmosis-like syndrome, PLS）"困扰逾40年。PLS在当地指由蜱虫传播的血寄生物（边缘无浆体 Anaplasma marginale 致牛无形体症 anaplasmosis；牛巴贝西虫 Babesia bovis、B. bigemina 致牛巴贝斯虫病 babesiosis）以及库蠓（Culicoides spp.）传播的 Orbivirus 属病毒（主要是流行性出血病病毒 EHDV 和蓝舌病病毒 BTV，俗称"bavites"）引起的具有相似非特异发热、贫血、黄疸或黏膜充血/溃疡等症状的疾病群。血寄生物为地方流行性疾病，是牛感染相关死亡的首要原因（2016–2024年年死亡率约3–10%）；Orbivirus 则呈周期性流行。既往缺乏系统的病原鉴别诊断及PLS时空分布与混合感染临床影响的量化研究，且临床病例未全面记录、确诊率低，制约了防控策略制定。为此，研究人员联合留尼汪岛动物卫生防御协会（GDS Réunion）开展本项前瞻性临床病例调查与实验室分子诊断研究，旨在明确PLS病原体构成、时空流行规律及不同感染模式对临床严重程度的影响，成果发表于《Preventive Veterinary Medicine》。
主要研究方法概述：
研究时间为2024年2月至2025年8月，通过农民和兽医上报疑似PLS牛只（发热、贫血、黄疸、血红蛋白尿、口鼻溃疡等），由执业兽医采集尾静脉EDTA抗凝血及普通血清管血样（死亡病例取肾、脾、肝组织），共计170份临床样本。核酸提取采用 NucleoSpin RNA Virus 试剂盒同步提取DNA与RNA。靶病原体检测分别为：A. marginale——基于 msp1β 基因的双重 TaqMan qPCR（内参基因为牛 β?actin ACTB）；B. bovis 与 B. bigemina——基于线粒体细胞色素 b 基因的 SYBR Green qPCR 通过熔解曲线区分（B. bigemina Tm≈74℃，B. bovis Tm≈76℃）；BTV 与 EHDV——ID.VET 三重 RT?qPCR 试剂盒。地理信息按留尼汪岛五大气候养殖带（中央高原—罗望子林、南部高地—山地雨林、南部低地—半干旱林及稀树草原、西部高地—山地雨林、西部低地—半干林及稀树草原）分区，利用QGIS与R进行空间分析及发病率计算。临床严重程度采用加权临床体征评分法（各体征赋严重程度系数1–75，总分归一化为0–100分），统计学方法含 Kruskal–Wallis 检验、卡方检验、广义线性模型（GLM）评估单一与混合感染对评分的影响。
研究结果
4.1. 采样PLS疑似牛群特征（Characteristics of the sampled PLS?suspected cattle population）： 170头疑似PLS牛平均月龄51±42月，87%大于9月龄；87%为母牛，62.5%为肉牛（肉用繁殖或育肥牛）。表明发病以成年泌乳或繁殖母牛为主，符合地方性血寄生物初次显性感染多见于成年引进或免疫缺失个体的特征。
4.2. PLS疑似牛中病原体检出情况（Pathogen detection in PLS?suspected cattle）： 剔除无效结果后148头至少检出一种靶病原体。其中 A. marginale 阳性率82%（n=122），B. bovis 44%（n=65），EHDV 30%（n=44）；仅血寄生物感染占PCR阳性病例65.5%（n=97），至少感染一种 Orbivirus 者占34.5%（n=51，其中91.5%为EHDV）。总体67%（n=99）为混合感染（检出2–4种病原体），最常见组合为 A. marginale + B. bovis（n=28），共观察到19种病原体组合。
4.3. PLS确诊病例的时空分布（Spatial and temporal distribution of confirmed PLS cases）： 确诊PLS（有临床症状且PCR阳性至少一种病原体）涉及60个牧场。中央高原—罗望子林气候带确诊80例（12.8例/1000头牛，发病率约为西部高地的2.5倍，p<0.001），该区牛密度最高（181头/km2）。其他各区确诊数：南部高地28例（4.3/1000）、西部高地23例（5.1/1000）、南部低地14例（6/1000）、西部低地3例（4.4/1000）。时间上呈明显季节性：南半球夏季（11月–4月）病例增多，冬季（5月–10月）减少；2025年3月（Garance热带气旋后强降雨期）出现病例峰值，提示高温高湿及气候扰动利于媒介增殖与疾病发生。
4.4. 临床评分分布及各病原体组间比较（Clinical score distribution and comparison across pathogen groups）： 临床评分范围4–31（满分对应死亡），中位数12.9，均值17.9，1/3动物死亡（n=49达最高分）。不同感染组合的中位评分有差异趋势（如 A. marginale + B. bovis 及单纯 B. bigemina 感染组评分偏高），但组间 Kruskal–Wallis 检验无统计学意义（p=0.12）。
4.5. 混合感染对临床严重程度的影响（Impact of co?infections on clinical severity）： 按检出病原种类数分组（1种、2种、≥3种合并），各组临床评分无显著差异（p=0.3）；按轻中重三级分类的卡方检验亦无显著关联（p=0.078），标准化残差提示双病原混合感染中重症稍偏多（ASR=2.06），三/四病原混合感染中中度症状偏多（ASR=2.46）。
4.6. 与严重临床型相关的病原体（Pathogens associated with severe clinical forms）： GLM显示单纯 A. marginale 感染（预测评分14，95%CI 11.3–16.8）及 A. marginale 与 B. bovis 混合感染（预测评分21，95%CI 17.8–24.2）均为临床评分显著预测因子（p≤0.008）。混合感染组死亡率达50%（15/30），显著高于单纯 A. marginale 感染的19.4%（7/36）（p=0.02），证实 A. marginale 与 B. bovis 共感染加重临床严重性并提高致死率。
讨论与结论总结：
研究人员指出，临床发病牛中 A. marginale 检出率与既往健康牛群调查相近（82% vs 77.6%），提示 A. marginale 广泛携带且呈慢性感染，单独检出不能解释发病，发病常与再感染、应激或混合感染有关；B. bovis 与 B. bigemina 在临床牛中检出率高于健康牛（45.5% vs 32.4%；29% vs 12.4%），符合巴贝斯虫治愈或经治疗后清除的特性。Orbivirus 不形成持续病毒血症，短期病毒血症检出提示当时存在病毒循环，当地高地野生鹿可能为EHDV贮存宿主。PLS病例集中报告于西、南部系受兽医采样覆盖限制，北、东部虽牛密度较低也有死亡怀疑但未采样。中央高原高发病率归因于高密度饲养促进媒介—病原传播。季节性高峰符合蜱及库蠓夏秋活跃的生态学特征，气旋后骤增可能与降雨促库蠓增殖及动物应激免疫抑制相关。67%混合感染率高反映地方流行区多重病原共存常态，整体混合感染数未显著加重评分，但特定组合 A. marginale + B. bovis 明确加重疾病与死亡，与文献报道协同致病相符。研究局限含依赖临床上报致漏报可能、不同兽医记录标准不一、部分感染组合样本少无法逐一分析。
结论（ translated from Conclusions section ）：
本研究报道了留尼汪岛西部与南部地区牛PLS临床病例并通过PCR确诊。空间分布显示所覆盖气候带感染率存在显著差异，时间趋势呈明显季节性——病例集中于南半球夏季（11月至4月）。尽管总体上混合感染与临床严重度增加无统计学关联，但边缘无浆体（A. marginale）与牛巴贝西虫（B. bovis）混合感染较单独 A. marginale 感染临床表现更重。鉴于数据源于上报临床病例且样本量有限，尚不能对全岛PLS作完整流行病学评估，也未能完全阐明各单一病原对疾病严重度的影响。面对媒介抗药性上升与环境顾虑，未来控制策略应优先考虑牛群管理措施，包括在高风险时期（如牛只引种）进行基于PCR的筛查及预防性使用咪多卡（imidocarb），并将导入抗蜱及抗热带病品种（如瘤牛 Bos indicus）的杂交育种计划纳入。此外需进一步研究留尼汪岛蜱密集区犊牛早期免疫接种可行性，以为PLS控制提供可持续长期方案。
