基于SYBR Green I的用于检测马立克病病毒SC9-1疫苗株的qPCR检测方法的开发与评估

《Viruses》：The Development and Evaluation of an SYBR Green I-Based qPCR Assay for Detecting the Marek’s Disease Virus SC9-1 Vaccine Strain

　　

摘要

马立克病病毒野外毒株的毒力日益增强，甚至能够突破广泛使用的CVI988疫苗所赋予的免疫力，这凸显出需要更有效的替代疫苗。SC9-1疫苗毒株展现了更强的保护效果，目前在中国被越来越多地采用。重要的是，该毒株拥有独特的重组REV-LTR插入序列，而其他所有MDV毒株均无此特征。针对这一仅存在于该毒株中的基因位点，本研究建立了一种基于SYBR Green I的定量实时PCR检测方法，用于特异性检测和量化SC9-1病毒，以支持临床疫苗监测工作。我们设计了特定的引物，并系统优化了PCR反应条件。该检测方法具有高度的特异性，与其他MDV毒株或常见禽类病原体无交叉反应。其灵敏度可达1.0 × 10¹拷贝/μL，重复性优异，检测内和检测间的变异系数均低于1.0%。此外，该检测方法对市售SC9-1疫苗样本的最低可检测浓度为每200 μL样本1.22 PFU。总之，这种基于SYBR Green I的PCR检测方法是一种特异性强、灵敏度高且重复性良好的工具，可用于快速量化SC9-1疫苗病毒。它已通过充分验证，可用于常规疫苗质量控制，同时在MD疫苗接种计划中的后续监测工作中也展现出巨大潜力。