孟加拉国吉大港市传统湿市零售生肉中多重耐药沙门氏菌的流行情况

《Veterinary Medicine and Science》：Occurrence of Multidrug-Resistant Salmonella spp. in Raw Meat Retailed in Wet Markets in Chattogram City, Bangladesh

　　

背景：食源性病原体的抗生素耐药性已成为全球公共卫生问题。沙门氏菌是全世界范围内最普遍的食源性病原体之一，导致食源性疾病相关的住院和死亡。沙门氏菌的多重耐药性使得食源性沙门菌病的治疗和控制具有挑战性。食源性沙门菌病通常发生在食用受污染的动物产品之后，这通常是由于在食品生产中使用受感染动物或胴体、可食用器官受到污染所致。因此，对生肉中的沙门氏菌进行多重耐药性筛查有助于识别通过食物接触抗生素耐药性的程度。本研究旨在确定分离株的流行率和分子鉴定结果，并筛查它们是否携带三种抗生素耐药基因：bla_TEM、sul1 和 sul2。

方法：从孟加拉国吉大港市的五个当地传统湿市共收集了200份生肉样本（牛肉，n = 50；山羊肉，n = 50；水牛肉，n = 50；鸡肉，n = 50）。沙门氏菌的表型检测遵循ISO-6579-1指南和生化测试。对于分子鉴定，使用沙门氏菌特异性配对引物（ST11和ST15）进行聚合酶链式反应。通过纸片扩散法确定PCR阳性沙门氏菌分离株的抗生素敏感性谱。还对这些分离株进行了三种抗生素耐药基因的筛查：bla_TEM、sul1 和 sul2。

结果：生肉中沙门氏菌的总体流行率为13.5%（95% CI 9.03–19.03），其中禽肉的检出率最高。所有27个表型阳性分离株在PCR分子筛选中均被确认为沙门氏菌。所有沙门氏菌分离株均被发现具有多重耐药性，对磺胺甲噁唑-甲氧苄啶（100%）、阿莫西林（92.6%）和氨苄西林（92.6%）的耐药性最高。最普遍的耐药基因型是bla_TEM（81.5%），而分别有11.1%和18.5%的沙门氏菌分离株携带sul1和sul2基因型。

结论：本研究揭示，来自生肉的沙门氏菌分离株中有相当一部分对多种抗生素表现出耐药性，这在孟加拉国吉大港市构成了潜在的公共卫生问题。需要采取“一体化健康”干预措施来减缓多重耐药沙门氏菌的传播。

**论文解读：孟加拉国吉大港市传统湿市零售生肉中多重耐药沙门氏菌的流行、耐药表型与基因型研究**

**研究背景与意义**
食源性疾病是全球性的重大公共卫生、经济和社会负担，每年导致约6亿人患病和42万人死亡。非伤寒沙门氏菌是最常报告的食源性细菌病原体之一。食源性沙门菌病通常源于食用受污染的动物产品，这种污染可能发生在养殖、屠宰、加工、运输、储存、分销乃至烹饪前的各个环节。集约化养殖、受污染的饲料、屠宰过程中的交叉污染以及动物运输压力等因素，都可能导致沙门氏菌在肉用动物中定植并污染胴体。沙门菌病给人类和动物带来显著的发病率和死亡率，并在全球范围内产生重大的社会经济影响。在孟加拉国，沙门菌病是一个普遍存在的问题，多种血清型存在于人类、动物及动物性食品中。抗生素的广泛使用导致了多重耐药性的发展，已达到可能构成公共卫生问题的水平。孟加拉国多个城市已有从动物及动物产品中分离的沙门氏菌高流行率和高抗生素耐药率的报道。然而，针对吉大港市城市传统湿市中不同肉类沙门氏菌血清型的流行率和抗生素耐药模式的多肉类比较研究尚未开展。因此，本研究旨在调查从吉大港市传统零售市场收集的生肉样本中沙门氏菌的流行率和抗生素耐药模式，以评估当地的食品安全风险及抗生素耐药性威胁。该研究发表于《Veterinary Medicine and Science》期刊。

**关键技术方法**
研究人员在孟加拉国吉大港市有售牛肉、山羊肉、水牛肉和禽肉的五个传统湿市，有目的地选择了五个市场进行采样。共收集了200份零售生肉拭子样本（牛肉、山羊肉、水牛肉和肉鸡各50份）。沙门氏菌的分离与表型鉴定严格遵循国际标准化组织ISO-6579-1:2017指南，使用木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂和沙门氏菌-志贺氏菌琼脂等选择性培养基进行培养，并通过一系列生化试验进行推定鉴定。分子鉴定则采用聚合酶链式反应，使用沙门氏菌特异性引物对（ST11和ST15）对所有表型阳性分离株进行确认。抗生素敏感性分析采用Kirby–Bauer纸片扩散法，参照临床和实验室标准协会指南，测试了九种常用抗生素。此外，研究人员使用PCR方法筛查了与β-内酰胺类抗生素耐药相关的bla_TEM基因，以及与磺胺类药物耐药相关的sul1和sul2基因。所有统计分析均使用GraphPad软件完成。

**研究结果分析**

**3.1 生肉中沙门氏菌的流行率**
在检测的200份肉类拭子样本中，有27份（13.5%，95% CI 9.03–19.03）基于选择性培养基上的培养生长被推定为沙门氏菌阳性。所有表型阳性分离株的沙门氏菌特异性PCR产物均为阳性。不同来源生肉的沙门氏菌检出率存在差异：鸡肉的流行率最高，为22%（11/50；95% CI: 12.59–35.41）；其次为山羊肉，流行率为14%（7/50；95% CI: 6.64–26.50）；牛肉流行率为10%（5/50；95% CI: 3.91–21.79）；水牛肉流行率最低，为8%（4/50；95% CI: 2.64–19.35）。不同肉类类型间的流行率差异无统计学意义（χ² = 4.92, p = 0.177）。

**3.2 沙门氏菌分离株的抗生素敏感性谱**
27株沙门氏菌分离株对九种抗生素表现出高度的耐药性。所有分离株（100%）均对磺胺甲噁唑-甲氧苄啶完全耐药。对阿莫西林和氨苄西林的耐药率均为92.6%，对萘啶酸的耐药率为88.8%。环丙沙星的耐药率为85.2%。对四环素和氯霉素的耐药率分别为74.1%和59.3%。对头孢氨苄的耐药率为59.3%。庆大霉素的耐药率最低，为37.0%。这些结果表明，分离株对大多数测试抗生素的敏感性有限，呈现出显著的多重耐药特征。

**3.3 携带耐药基因的沙门氏菌分离株比例**
在27株沙门氏菌分离株中，bla_TEM基因的检出率最高，为81.5%（22株）。具体而言，11株鸡肉源分离株中有10株携带该基因；7株山羊肉源分离株中有6株携带；4株水牛肉源分离株全部携带；5株牛肉源分离株中有2株携带。磺胺类耐药基因sul1的检出率为11.1%（3株），分别来自鸡肉（2株）和牛肉（1株）。sul2基因的检出率为18.5%（5株），分别来自牛肉（2株）、鸡肉（2株）和山羊肉（1株）。水牛肉分离株中未检出sul1或sul2基因。表型上对β-内酰胺类抗生素（阿莫西林和氨苄西林）的耐药性与bla_TEM基因的存在之间无统计学显著差异（p = 0.420）。然而，磺胺类耐药基因（sul1或sul2）与磺胺类耐药表型之间的差异具有统计学显著性（p = 0.007）。

**讨论与结论总结**
讨论部分指出，本研究结果揭示了吉大港市传统湿市生肉样本中多重耐药沙门氏菌令人担忧的流行情况，凸显了该地区食源性病原体相关的重大公共卫生风险。鸡肉中沙门氏菌的高流行率与全球趋势一致，可能归因于集约化养殖、生物安全措施不足以及屠宰加工过程中的交叉污染。反刍动物肉类的污染则常与环境暴露和不卫生的屠宰场操作有关。分离株对多种临床重要抗生素的高耐药率，特别是对磺胺甲噁唑-甲氧苄啶的普遍耐药（100%），以及阿莫西林/氨苄西林和萘啶酸的高耐药率，令人关切。高频率的bla_TEM基因检出（81.5%）表明β-内酰胺类耐药在该地区广泛传播，可能反映了这些生产系统中β-内酰胺类抗生素的大量使用所产生的选择压力。磺胺类耐药基因sul1和sul2的检出率较低，且基因型与表型结果之间存在显著差异，这可能归因于其他耐药基因（如sul3、sul4）的存在、外排泵系统等非酶机制，或鉴定方法间的差异。bla_TEM与sul1或sul2在某些分离株中共存，引发了人们对多重耐药的担忧，因为这些基因通常由可移动遗传元件（如质粒）携带，促进了它们在细菌种群间的传播。

研究也指出了若干局限性，包括未考虑季节变化或摊贩卫生习惯、仅筛查了三种耐药基因、未评估基因表达水平或具体bla_TEM变异体、未进行全基因组测序分析，以及样本量较小（特别是水牛和牛肉分离株），可能限制了研究结果的普适性。未来研究应纳入更大的样本量并进行全基因组测序，以探索这些耐药基因的遗传背景。

**研究结论**：本研究表明，来自生肉的沙门氏菌分离株中有相当一部分对多种抗生素表现出耐药性，这在孟加拉国吉大港市构成了潜在的公共卫生问题。需要采取“一体化健康”干预措施来减缓多重耐药沙门氏菌的传播。