伊朗北部山羊外周血中嗜血支原体（Hemotropic Mycoplasmas）和无形体（Anaplasma spp.）的分子诊断、系统发育分析及其血液生化指标变化

《Veterinary Medicine International》：Molecular Diagnosis and Phylogenetic Analysis of Hemotropic Mycoplasmas and Anaplasma spp. in Peripheral Blood of Goats in Northern Iran and Their Hematobiochemical Alterations

　　

无形体（Anaplasma）和嗜血支原体（hemoplasma）是感染多种动物宿主红细胞并引起重大兽医健康问题的嗜血细菌。本研究旨在确定伊朗北部马赞德兰省山羊中无形体属和嗜血支原体属的流行率。研究人员在春季从不同年龄和性别的山羊中采集了149份血液样本。样本采用聚合酶链式反应（PCR）进行分析以鉴定无形体属和支原体属。为鉴定细菌种类，对4份支原体属和6份无形体属的代表性扩增子进行了测序。PCR检测结果显示，无形体属的阳性率为19.4%，嗜血支原体的阳性率为28.1%。血液参数的统计学分析表明，无形体阳性组与阴性组之间存在显著差异，红细胞（RBC）计数和红细胞压积（HCT）水平显著降低，而碱性磷酸酶（ALP）和甘油三酯（TG）水平显著升高。相比之下，支原体阳性组的血液学和生化参数未见显著差异。分子和系统发育分析证实伊朗山羊中存在绵羊支原体（M. ovis，PQ793282）、山羊无形体（Anaplasma capra，PV176424）、绵羊无形体（A. ovis，PV185329）和嗜吞噬细胞无形体（A. phagocytophilum，PV175399）。本研究首次报道了伊朗绵羊支原体和山羊无形体的存在，并强调了对家畜中无形体和支原体感染加强分子监测的必要性。因此，这些病原体——特别是那些与人类病原体具有密切遗传关系的病原体——对家畜和人类健康均构成重大威胁。这凸显了加强监测、认识潜在人畜共患风险、实施媒介控制策略和疫苗接种措施的必要性。

本研究发表于《Veterinary Medicine International》，聚焦于伊朗北部马赞德兰省山羊群体中嗜血支原体（hemoplasma）和无形体（Anaplasma）感染的分子流行病学调查。研究背景方面，食品安全是各国政府项目的重点，伊朗每年因各种原因损失大量畜牧产品，其中传染病尤其是嗜血细菌引起的疾病是最重要因素之一。无形体属属于无形体科（Anaplasmataceae），为革兰氏阴性胞内菌，感染哺乳动物血细胞，包括边缘无形体（A. marginale）、牛无形体（A. bovis）、绵羊无形体（A. ovis）、中心无形体（A. centrale）、扁平无形体（A. platys）和嗜吞噬细胞无形体（A. phagocytophilum）等多种，通过蜱虫等节肢动物媒介传播。嗜血支原体原名Eperythrozoon ovis，现称绵羊支原体（Mycoplasma ovis），呈多形性，附着于红细胞表面，引起溶血性贫血，表现为循环红细胞减少、血红蛋白和红细胞压积（HCT）降低，以及组织含铁血黄素沉积。绵羊对绵羊支原体感染表现明显溶血性贫血，而山羊可能作为潜伏携带者。该病原体具有人畜共患性，可感染人类、鹿和驯鹿，导致产奶量下降、羔羊死亡率升高和增重不良。PCR方法因较传统诊断技术具有更高特异性和敏感性，被推荐用于诊断无形体病和支原体病。鉴于山羊生产在伊朗的经济重要性，准确了解地方性流行区无形体和嗜血支原体的流行率和遗传多样性至关重要。然而，伊朗目前极度缺乏关于山羊嗜血支原体感染和无形体病具体病原体的数据。嗜吞噬细胞无形体的近期人畜共患意义已被揭示，引起广泛关注；中国新近发现的一种可能的新型蜱传无形体已被确认为人类疾病来源，暂命名为"山羊无形体"（Anaplasma capra），提示其可能构成重大公共卫生威胁。本研究的主要目的是利用PCR技术联合系统发育分析，查明伊朗北部马赞德兰省山羊群体中无形体属和支原体属感染的流行率，并评估感染山羊的血液学和生化改变，以认识这些感染的重要健康影响。

研究人员开展的研究及主要结论包括：本研究为横断面调查，2024年4月在伊朗马赞德兰省进行，该地区为夏热型地中海气候，年均温17°C，年降水量超1000毫米。从149只临床健康山羊的颈静脉采集血液样本，分别置于EDTA抗凝管和无抗凝剂管中。检测结果显示，29份样本（5只公羊、24只母羊）无形体属阳性，42份样本（5只公羊、37只母羊）嗜血支原体阳性，13份样本（2只公羊、11只母羊）为两者混合感染。羊群中无形体感染阳性率为19.4%，嗜血支原体感染阳性率为28.1%。统计学分析揭示，无形体阳性组与阴性组在红细胞计数（p=0.042）和红细胞压积（p=0.026）等血液学参数，以及甘油三酯（p=0.047）和碱性磷酸酶（p=0.01）等生化参数上存在显著差异；而支原体阳性组与阴性组之间未见显著差异。无形体感染与山羊年龄或性别无显著相关性，支原体感染亦然。对来源于不同阳性羊场代表扩增子随机测序，4份Mycoplasma样本均为绵羊支原体且100%相似，6份Anaplasma样本中4份为绵羊无形体（相互100%相似）、1份为嗜吞噬细胞无形体、1份为山羊无形体。系统发育树显示，伊朗绵羊支原体与伊朗马株有很近遗传亲缘关系，与中国、土耳其、匈牙利和美国的人畜共株也有很近的亲缘关系。伊朗绵羊支原体与伊朗绵羊（MH615089）和山羊（GU230143）支原体序列共同形成独立分支，提示共同祖先和可能的种间传播。Iranian A. capra与日本、土耳其、中国等多地各宿主来源的A. capra遗传关系密切，bootstrap支持值为65-99。伊朗山羊无形体与日本株和中国株相似性最高，暗示跨境传播路径或共享进化祖先。山羊无形体与绵羊无形体遗传分化明显，形成独立分支。伊朗绵羊无形体与俄罗斯和南非株关系密切，暗示其分布广泛和可能的宿主或携带者迁移传播。

本研究的技术方法主要包括：样本队列来源为2024年4月伊朗马赞德兰省149只临床健康山羊的颈静脉血样；采用商用血液基因组DNA纯化试剂盒提取DNA；使用NanoDrop分光光度计检测DNA纯度和浓度；全自动兽用血液分析仪进行全血细胞计数；利用16S rDNA通用引物对嗜血支原体（16S_HAEMOforw/16S_HAEMOrev，约1000 bp）和无形体（8F/8R，约806 bp）进行PCR扩增；产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析；代表性阳性扩增子送Pishgam Biotech测序；Clustal W和MEGA 11软件进行序列比对和系统发育分析，采用Kimura 2-parameter距离估计和最大似然法构建进化树；SPSS 22进行统计学分析，采用独立样本t检验和Mann-Whitney检验。

研究结果部分按原文结构呈现如下。PCR检测结果：149只山羊中检测出无形体属阳性率19.4%，嗜血支原体阳性率28.1%，混合感染率为8.7%。差异分析显示，无形体阳性组红细胞计数和红细胞压积显著低于阴性组，碱性磷酸酶和甘油三酯显著高于阴性组。阐释了山羊在食品供应中的重要性以及嗜血细菌如嗜血支原体引起的经济损失；描述了绵羊支原体的病原特征、宿主范围和临床表现，指出山羊常呈潜伏感染。

本研究的重要意义在于：首次报道了伊朗绵羊支原体和山羊无形体的存在；揭示了这些嗜血病原体在伊朗山羊中的流行情况和遗传多样性；证实了无形体感染对山羊血液学和生化指标的具体影响；通过系统发育分析揭示了伊朗分离株与国际上其他株系的遗传联系，特别是与人类病原体的密切关系，强调了其人畜共患风险；为制定针对性的监测、控制和预防策略提供了基础数据。研究局限在于采样仅集中于春季，未能反映全年流行病学模式，且对All Anaplasma物种的详细信息了解不足。

研究结论部分翻译如下：本研究首次报道了伊朗绵羊支原体和山羊无形体的存在。各种嗜血细菌物种在山羊中的存在凸显了这些感染诊断和控制的挑战，因为感染动物可能作为无症状携带者，促进疾病传播至其他家畜及可能的人类。这些病原体的人畜共患潜力，特别是与动物有密切接触的人员中，尤为令人关注。研究结果凸显了加强监测和控制措施的迫切需要，包括开发改进的诊断工具、有效的人畜共患风险管理、媒介控制策略和预防性项目。