用于猫传染性腹膜炎（Feline Infectious Peritonitis, FIP）体重调整治疗的口服GS-441524混悬液的开发及理化稳定性研究

《Veterinary Medicine and Science》：Development and Physicochemical Stability of an Oral GS-441524 Suspension for Weight-Adjusted Treatment of Feline Infectious Peritonitis

　　

GS-441524是治疗猫传染性腹膜炎（Feline Infectious Peritonitis, FIP）的关键抗病毒药物，但目前尚无获批的兽药产品上市。为提供一种质量有保障的非监管产品替代方案，研究人员开发了一种50 mg/mL的口服混悬液并评估了其理化稳定性。研究人员采用Syrspend SF pH 4.0和一种兽用矫味剂制备了三批独立样品。稳定性在5°C、25°C/60%相对湿度（RH）和40°C/75% RH（运输模拟）条件下评估12周。使用稳定性在反复取样后于28天内进行评估。稳定性定义为药物浓度维持在初始值（45–55 mg/mL）的90%–110%范围内，pH 3.5–4.5，相对密度1.02–1.04 g/mL。所有批次在所有条件下均保持在预设的可接受限度内。因此，该制剂可实现GS-441524的准确口服给药，用于体重调整治疗，并为无证产品提供了一种规范的替代方案。这些发现支持该制剂作为兽医监督下的临时调配制剂（extemporaneously compounded preparation）的适用性。药代动力学和临床疗效未在本研究中评估，应在未来研究中加以解决，以进一步证实其治疗用途。

猫传染性腹膜炎（Feline Infectious Peritonitis, FIP）是由猫冠状病毒（Feline Coronavirus, FCoV）突变引起的猫类最重要传染病之一，曾具有超过95%的极高死亡率。GS-441524作为一种核苷类似物，分子量小于900 Da，可直接干扰病毒复制的细胞过程，已成为治疗FIP的关键抗病毒药物。然而，由于该活性成分尚未获得兽药批准，感染FIP的猫主人往往只能通过黑市获取药物，而这些未经监管的产品存在浓度不准、pH不适等质量隐患，给治疗带来严重风险。在瑞士等允许临时调配制剂（extemporaneous compounding）的国家，当无授权药品可用且需保证质量时，可由兽医监督下进行制剂调配。在此背景下，研究人员开展了这项研究，旨在开发一种稳定的口服GS-441524混悬液，以实现按体重精确给药，并为FIP治疗提供规范化替代方案。该研究成果发表在《Veterinary Medicine and Science》上。

研究人员采用的主要关键技术方法如下：以Syrspend SF pH 4.0为混悬基质[index]基质，添加3% FlavorRx"Chicken Pot Pie"兽用矫味剂，制备50 mg/mL GS-441524口服混悬液；采用反相高效液相色谱法（Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography, RP-HPLC）配合二极管阵列检测器（Diode Array Detector, DAD）进行药物浓度测定，色谱柱为Zorbax SB C₁₈（5 μm, 150 mm × 4.6 mm），柱温35°C，检测波长241 nm，流动相为20 mM乙酸铵缓冲液（pH 4.5）与乙腈（Acetonitrile, ACN）梯度洗脱；使用电位法测定pH值，振荡U管法测定相对密度；设置三批独立样品，在5°C、25°C/60% RH及40°C/75% RH条件下进行为期12周的密封容器稳定性考察，并对开封后反复取样进行28天的使用稳定性评估。

研究结果部分如下：

简介（Introduction）：该部分系统阐述了FCoV的高流行率、FIP的发病机制及流行病学特征，指出拥挤饲养、共享猫砂盆等环境因素可促进病毒传播，纯种猫、未绝育雄性猫及年轻猫为FIP高发群体。研究回顾了GS-441524从抗埃博拉和冠状病毒研究中发展而来的历程，总结了Pedersen等（2019）、Taylor等（2023）及Zuzzi-Krebitz等（2024）的关键临床研究，证实胃肠外和口服GS-441524治疗FIP的有效性和安全性。该部分重点揭示了黑市GS-441524产品的质量隐患：87份胃肠外制剂中95%浓度高于标示量（平均高39%），pH值平均仅1.30；40份口服制剂中43%浓度偏高（平均高75%），58%浓度偏低（平均低39%）。在瑞士，仅有苏黎世和伯尔尼大学兽医院在临床研究中使用BOVA Specials生产的50 mg GS-441524片剂。由于缺乏授权产品，瑞士允许在特定条件下进行临时调配，本研究正是为了填补这一空白。

材料与方法（Materials and Methods）：GS-441524原料药购自中国深圳Senova Technology Co. Ltd.，经独立欧洲GMP认证实验室检验确认质量。由于GS-441524水溶性差（0.105 mg/mL）且β-环糊精增溶尝试失败，研究人员选择制备口服混悬液。以Syrspend SF pH 4.0为基质，添加3%矫味剂，用磁力搅拌器600 rpm均质，分装于30 mL白色玻璃瓶中，配以防篡改的给药器适配器密封。稳定性研究设计包括：5°C（±3°C）和25°C/60% RH下于T0、1周、5周、12周取样；40°C/75% RH下于T0、3天、10天取样模拟运输应力；以及开封后5°C和25°C/60% RH下经13次和25次取样后的14天和28天使用稳定性考察。稳定性可接受标准为浓度45–55 mg/mL、pH 3.5–4.5、相对密度1.02–1.04 g/mL。样品经二甲基亚砜（Dimethyl Sulfoxide, DMSO）提取后，采用上述HPLC-DAD方法测定，每次运行以25 μg/mL标准品首尾进样验证方法稳定性，浓度以线性回归计算。各批次均进行双份测定，计算均值和标准差（Standard Deviation, SD），并采用线性回归分析浓度随时间的变化趋势。研究人员同时声明了本研究的局限性：未进行正式分析方法验证（包括回收率、精密度和准确度）、未评估潜在玻璃吸附、未进行防腐剂效力试验，且未采用人工智能工具生成或分析数据。

结果（Results）：HPLC方法在1–50 μg/mL范围内线性良好，相关系数R²为0.9995。所有时间点的色谱图均未出现额外峰。数据显示，三批样品在不同温度条件下的pH值、相对密度和GS-441524浓度均值均保持在可接受范围内。T0时三批均值pH为3.91，相对密度1.0335 g/mL，浓度50.82 mg/mL；5°C储存12周后pH 3.99，相对密度1.033 g/mL，浓度50.69 mg/mL；25°C/60% RH储存12周后pH 4.00，相对密度1.034 g/mL，浓度50.52 mg/mL；40°C/75% RH储存10天后pH 4.04，相对密度1.033 g/mL，浓度51.37 mg/mL。使用稳定性方面，5°C储存28天后浓度为51.29 mg/mL，25°C/60% RH储存28天后浓度为52.17 mg/mL，均符合标准。浓度随时间变化的图形显示稳定性良好，方法线性图和典型色谱图进一步证实了分析方法的可靠性。

讨论（Discussion）：研究结果表明，GS-441524口服混悬液在密封容器中室温下可稳定保存至少12周，且28天反复开封使用不影响浓度稳定性，该时长足以满足FIP治疗周期和瓶装 contents 的需求。40°C/75% RH条件下10天的数据未显示显著变化，考虑到瑞士境内运输时间较短，该观察期被视为充分，但温度波动的影响未予评估，不能替代正式运输稳定性研究。50 mg/mL的浓度设计便于临床按体重精确给药，按15 mg/kg每日一次方案，多数猫给药体积为0.8–1.5 mL，既实用又可减少因黑市产品质量波动导致的剂量不足或过量风险。5°C与25°C数据可比，提示室温 Allowonce 储存可行。 研究人员坦承本研究存在多重局限：未进行微生物稳定性测试，尽管Syrspend SF pH 4.0中的苯甲酸钠已有文献支持其防腐效果，但含药后的微生物稳定性仍需验证；未进行沉降速率、再分散性和黏度等物理稳定性测定；未评估玻璃吸附，虽观察到浓度稳定提示风险较低；未开展光稳定性研究，虽白色容器和标签可减少光照；HPLC方法未完全验证；12周稳定性数据尚不足以确定长期有效期；最重要的是缺乏猫的药代动力学和临床数据，理化稳定性不能替代临床有效性和安全性评价。

研究结论部分翻译如下：该研究证明，50 mg/mL口服GS-441524混悬液在所有评估的储存条件下至少保持12周的理化稳定性，并在反复取样后维持28天的使用稳定性。该制剂可实现FIP治疗的准确、可重复的口服给药，为无证产品提供了一种规范的替代方案。这些发现支持其作为兽医监督下临时调配制剂的应用。凭借现有数据，瑞士现已能够为FIP患猫提供一种合法、稳定的制剂。该制剂便于宠物主人给药，使猫在熟悉的环境中接受兽医指导下的治疗，前提是其临床状况允许。本研究未收集药代动力学和临床数据，仅凭稳定性数据无法得出临床结论。两个女儿应该包括：完整的分析方法验证、微生物稳定性测试、物理稳定性评估（包括沉降、黏度和再分散性）、光稳定性测试以及猫的药代动力学和临床评价，以进一步支持该制剂的循证治疗应用。