突破梅毒螺旋体定量检测的瓶颈：一种用于快速、精准且经济高效检测的新型流式细胞术测定方法

《BMC Microbiology》：Overcoming the bottleneck in Treponema pallidum quantification: a novel flow cytometric assay for rapid, precise, and cost-effective detection

　　

摘要

准确量化梅毒的致病菌——苍白螺旋体，对于推进其发病机制、治疗反应及疫苗研发的研究至关重要。然而，现有方法存在一定局限。暗视野显微镜灵敏度低、重复性差且受操作者影响较大，而定量PCR虽然精度高，但耗时较长、技术要求高，还需依赖高质量且稳定的商业试剂。这一方法上的瓶颈凸显出迫切需要一种既能具备直接检测的速度与简便性，又能拥有自动化检测的精确性、客观性及高通量优势的技术。为此，我们提出了一种利用新型荧光基流式细胞术检测法，在自动尿液分析仪（Sysmex UF-5000分析仪）上实现苍白螺旋体的快速高通量定量分析。该检测法的检出限为7.02×103个苍白螺旋体/毫升，且精度极高（所有变异系数均低于20%）。在较宽的浓度范围内（4.98×103至2.10×10?个苍白螺旋体/毫升），其检测结果与定量PCR高度一致，相关系数达0.9967，且不存在显著的比例或常数偏差（Passing-Bablok斜率为1.003）。Bland-Altman分析也显示两者结果非常接近（平均差异为-1.14×10?个苍白螺旋体/毫升）。相比之下，暗视野显微镜的变异率要高得多（变异系数为15.19%至83.52%），且无法检测低浓度样本。从操作效率来看，该流式细胞术检测法每份样本可在30秒内得出结果，试剂成本较低（每次检测约0.35美元），在客观性和通量方面优于暗视野显微镜，在速度和成本效益方面则优于定量PCR。总之，这种新型流式细胞术检测法有效解决了长期以来苍白螺旋体定量分析所面临的难题。作为一种自动化、精准且快速的检测方法，它将直接检测的简便性与分子定量的准确性相结合，为梅毒微生物学、药理学及免疫学研究提供了标准化且实用的工具，有助于实现更具重复性和可转化性的科学发现。