《Journal of Extracellular Biology》：Salivary Extracellular Vesicles: Paradigm Shift in Liquid Biopsy Diagnostics
细胞外囊泡（EVs）是由几乎所有细胞释放的脂质双层纳米颗粒，作为细胞间通讯的重要信使。鉴于其参与多种病理生理过程，EVs近期作为多种疾病潜在的诊断和预后生物标志物受到广泛关注。EVs在所有体液中的广泛分布使其成为采用液体活检方法进行疾病进展监测的理想微创生物标志物。在各类体液中，唾液具有独特的可及性且可溶性蛋白含量低，使其EV群体成为极具前景的诊断生物标志物来源。唾液EVs在诊断局部和全身疾病方面的潜力已被广泛研究，包括癌症、自身免疫病和神经精神疾病。在本综述中，研究人员概述了当前唾液EVs的研究现状，重点阐述了这些囊泡的独特特性和潜力、其应用相关的技术挑战，以及其作为强大诊断工具用于临床转化的未来前景。
## 1 引言
细胞外囊泡（EVs）通常直径为30-1000 nm，现已被确认为细胞间通讯的关键介质，可运输包括核酸、蛋白质和脂质在内的多种生物活性货物。这一认识源于数十年间在不同生物学背景下的渐进式发现。最早可回溯性纳入EV领域的观察来自血液学。1946年，Chargaff和West鉴定了具有促凝活性的血小板衍生颗粒；二十年后，Wolf（1967）描述了这些微小颗粒组分的囊泡超微结构， termed"血小板尘埃"，并确认其凝血活性，共同表明这些膜颗粒具有生物学功能。Anderson（1969）将这一概念扩展至血液之外，在胫骨骺板软骨基质中发现了来自软骨细胞的膜结合"基质囊泡"，并提出这些结构在组织矿化中的作用，确立了囊泡介导的生物学活性并非局限于循环系统。Ronquist等（1978）描述了前列腺和精液中的圆形至椭圆形膜结合囊泡（后称为prostasomes）；Brody等（1983）随后证明了它们的前列腺细胞起源，为这些结构赋予了结构和生物学可信度。
1980年代早期，EV亚群内体起源的概念转变开始出现。Nunez等（1974）此前已在蝙蝠甲状腺腺体的分泌细胞中注意到多泡体（MVBs），并暗示MVB与顶端质膜融合时腔内囊泡的分泌，预示了后来成为确定性生物发生途径的特征。在此基础上，Pan和Johnstone（1983）证明网织红细胞在成熟过程中通过小膜囊泡选择性外化转铁蛋白受体；Harding等（1983）进一步表征了这一过程的内体途径。Johnstone等（1987）随后 coined"exosome"一词，专指这些内体起源的囊泡，为该领域提供了首个正式的命名，即现在公认的一种独特EV亚型。与此同时，Trams等（1981）独立引入了"exosome"一词来描述细胞培养上清液中表达胞外5'-核苷酸酶的微囊泡，这反映了早期EV发现过程中不同实验系统间的趋同性。
这些研究为1990年代EV生物学的整合奠定了基础。Raposo等（1996）证明了EVs参与抗原呈递，将其从单纯的细胞碎片重新定位为功能性免疫介质，贡献尤为突出。2000年代早期，EVs作为生理和病理过程积极参与者的认识激发了更广泛的领域兴趣，最终于2012年成立了国际细胞外囊泡学会（ISEV）。该学会随后于2014年发布了首个细胞外囊泡研究最小信息（MISEV）指南，并于2018年和2023年修订，提供了动态的、社区驱动的框架，用于标准化命名、分离方法和报告要求，以提高EV研究的严谨性和可重复性。
EVs作为细胞间通讯介质的功能多样性与其生物发生途径的多样性以及与受体细胞相互作用的机制范围相关。EVs通过多种不同机制产生，每种机制产生的群体具有特征性的尺寸范围、表面组成和货物特征。最经典的途径产生外泌体，其通过晚期内体膜向内内陷形成MVBs中的腔内囊泡；这些囊泡在MVB与质膜融合后释放到细胞外空间。平行且已确立的另一条途径通过质膜直接向外出芽和断裂产生 ectosomes（微囊泡）。凋亡小体代表第三种EV群体，作为程序性细胞死亡的后果释放，通常大于其他EV亚型。除这些已确立的类别外，该领域日益认识到更广泛的细胞外颗粒谱系。分泌性自噬体（自噬性细胞外囊泡）被认为起源于自噬体与MVBs融合形成的 amphisomes，将自噬定位为EV产出的贡献因素。迁移体，即在迁移细胞后端的收缩纤维处形成的囊泡结构，也有报道，尽管其在EV分类学中的分类仍存在争议。进一步扩展这一谱系，exomeres和supermeres已被鉴定为非囊泡纳米颗粒，其生物学功能尚待充分表征。总体而言，这一不断扩展的分类学反映了该领域正从简单的双途径模型转向细胞利用多种途径包装和释放细胞外材料的认识。
释放后，EVs必须与受体细胞相互作用和/或被其摄取，这一过程同样具有异质性且依赖于上下文。已提出多种机制，包括 clathrin介导的内吞、caveolin依赖性内吞、巨胞饮、脂筏介导的内化以及吞噬作用。现也已认识到EV表面的受体-配体相互作用可促进细胞摄取。每种途径的相对贡献似乎因细胞类型、EV表面组成及相互作用的生理背景而异；尚未确立单一机制具有普遍主导地位。这种情境依赖性在生物学上具有重要意义，因为它表明摄取选择性本身可能就是EV介导信号传导的受调控特征，而非囊泡与靶细胞相遇的被动后果。生物发生和摄取机制的多样性共同使EVs成为令人着迷且适应性强的细胞间通讯系统，其复杂性仍在不断界定中。
与许多体液中的分析物不同，EV货物受到囊泡脂质双层的保护而免于酶促降解，同时保留诱导受体细胞表型和遗传变化的能力。这种保护性封装，加上EVs能够反映其来源细胞分子状态的特性，奠定了它们作为多种疾病生物标志物的吸引力。EVs通过淋巴和循环系统循环，通过多种机制进入多种体液，并据报道能穿越血脑屏障，将其影响范围扩展到传统上被认为其他循环因子无法到达的腔室。
## 2 唾液细胞外囊泡的特征
唾液EVs是否从根本上与其他体液中的EVs不同，或它们仅代表在保守囊泡支架上负载来源特异性货物的可变大分子复合体，是该领域尚未最终回答的问题。尽管如此，现有证据似乎支持后者，即唾液EVs与其他体液中的EVs建立在相同的结构基础上，其区别性特征（如果存在）反映口腔腔独特的生理和免疫学身份，而非新型囊泡类别。
结构上，唾液EVs与其他体液来源的EVs高度一致。透射电子显微镜（TEM）图像显示唾液EVs为杯状、圆形颗粒，与血浆、尿液和脑脊液EVs的形态一致。原子力显微镜三维成像证实了这些发现，测得唾液EVs直径为40-65 nm，完全处于各体液报道的30-150 nm范围内。经典EV表面标志物包括CD63、CD81和flotillin-1，同样与其他来源的EVs共享。
更具诊断意义的问题涉及分子货物。Ogawa等（2008）首次通过电子显微镜表征唾液EVs，鉴定了30-130 nm的囊泡，含DPP IV、galectin-3、IgA、pIgR和actin等多种蛋白质。由于全唾液是复合分泌物，其货物与口腔腔细胞间接相关。例如，唾液腺导管上皮细胞同时表达galectin-3和DPP IV，而pIgR由黏膜上皮细胞表达。这些归属在缺乏细胞类型特异性EV分离或谱系追踪的情况下仍属推测，且其在大规模研究中的验证仍有待进行。
Gonzalez-Begne等（2009）随后在腮腺来源的唾液EVs中鉴定了491种蛋白质，其中29%与腮腺导管唾液重叠。ALIX、VPS4A、热休克蛋白、ANXA4和Rab蛋白的检出反映了所有细胞类型共享的保守MVB介导的生物发生机制，而AQP5和细胞角蛋白的检测则提示了组织特异性层面。其中72种蛋白质与尿液EV蛋白质重叠，进一步凸显了跨体液EV蛋白质组的保守性。Sun等（2017）通过无标记定量系统比较唾液与血清外泌体蛋白质组，在唾液中鉴定了319种、血清中994种蛋白质，约80%的唾液外泌体蛋白质组与血清外泌体共享。这对唾液EVs根本独特性问题的解答至关重要，因为这些发现表明唾液EV蛋白质组并非唾液所独有。
更有说服力的生物学来源特异性证据出现在唾液EV亚群的蛋白质组成以口腔黏膜免疫学为背景进行考察时。Ogawa等（2011）鉴定了两种EV亚群EV-I和EV-II，共享68种蛋白质包括ALIX、TSG101、CD63、Hsp70、IgA和pIgR，但在大小和货物上存在差异。EV-I直径30-250 nm，富集黏蛋白（MUC5B）、 ezrin、moesin、radixin、α-烯醇酶、GNB1、annexins和Rab GDP解离抑制剂β；EV-II（20-80 nm）携带更高水平的碳酸酐酶6、半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白、DPP IV、IgG Fc结合蛋白和galectin。后续研究（Ogawa等，2024）将EV-I重新表征为氨基肽酶N/黏蛋白1（APN/MUC1）富集的中等至大囊泡，EV-II为DPP IV/CD9富集的小囊泡。两个独立研究中IgA和pIgR在两个群体中的一致鉴定值得注意，因为这些不仅是与其他体液共享的标志物，而是黏膜免疫系统的标志物。分泌性IgA（SIgA）是分泌黏膜的优势免疫球蛋白，在血浆中基本不存在，其中IgG占主导；腮腺IgA与IgG浓度比约为血清的500倍，这是pIgR介导的转胞吞机制选择性地在黏膜表面浓缩二聚体IgA的直接结果。唾液EV两个亚群富集IgA和pIgR并非偶然，而很可能反映了这些囊泡来源细胞的免疫学身份。这种货物特征是否足以构成有意义的生物学独特性，以及是否在受体细胞中具有功能后果，是以往文献无法回答的问题，主要因为迄今的研究规模小、主要为描述性，且未设计用于跨体液比较。
唾液EVs还携带RNA货物，其与其他体液EVs的关系仍 poorly characterized。Ogawa等（2013）使用基于新一代测序（NGS）的小RNA分析，从单个健康供体中鉴定了EV-I、EV-II和全唾液中的miRNAs、piRNAs和snoRNAs，miRNAs分别占各区室总映射读数的33%、51%和58%。在最丰富的40种miRNA中，hsa-mir-182仅在EV-I中检出，hsa-mir-10b、hsa-mir-181a-1、hsa-mir-181a-2和hsa-mir-191在EV-II中，hsa-mir-92a-2仅存在于全唾液中。这些发现似乎与Gallo等（2012）的研究形成对比，后者证明唾液miRNAs主要集中于EVs而非EV耗尽上清液中。然而，这种差异最可能反映分析范围的不同，而非方法学选择本身是该RNA数据解读的关键限制因素，还源于Ogawa RNA研究的单供体设计，在缺乏生物学重复的情况下，统计学推断不可能进行。
唾液特有的一个复杂因素是口腔微生物组的贡献。这要求唾液EV研究中采用严格的分析框架，以准确区分潜在微生物来源的EVs与宿主细胞来源的EVs。Tong等（2023）报道了唾液EV组分中丰富的微生物组衍生RNA，在微囊泡中代表性更高，且Firmicutes和Bacteroidetes序列富集。Fan等（2023）证明牙龈卟啉单胞菌外膜囊泡（OMVs）可通过microRNA大小的小RNA（msRNAs），特别是sRNA45033，靶向宿主CBX5以触发p53基因的促凋亡表观遗传重塑。Uemura等（2022）鉴定了P. gingivalis OMVs通过将病原体衍生DNA递送至宿主细胞质激活STING通路，从而驱动慢性炎症。这些报告共同暗示唾液中存在的外来物种EVs在牙周炎发病机制中的作用，并提示口腔微生物组衍生EVs在口腔腔稳态中的作用。
从唾液这种非无菌生物液的密集背景噪音中解析此类高影响的跨王国调控信号仍然是一项艰巨挑战。Ascensión等（2025）提出了一个稳健的流程，涉及针对GRCh38和随后CHM13端粒到端粒组装的顺序宿主映射，以有效清除宿主衍生读数。通过利用多个分析器的共识并应用 knee-point detection算法对排序读数进行分类阈值检测，该框架抑制了由测序伪影或试剂污染引起的低丰度假阳性。这种综合方法对于将唾液EVs从探索性发现成功转化为诊断可操作的液体活检因素是不可或缺的。
## 3 唾液EVs预处理和分离技术的考量
缺乏标准化的EV分离方案对将其验证为生物标志物构成重大挑战，需要基于产量、纯度和可行性对当前方法进行关键评估。基于密度的方法，特别是差速离心（DC），由于其成本效益和可重复性仍保持"金标准"地位，但该技术受劳动密集型、囊泡聚集、耗时和脂蛋白共分离等问题困扰。密度梯度离心（DGC）通过等密度分级提高纯度，但产量低且存在相似密度颗粒污染的风险。基于尺寸的分离策略如切向流过滤（TFF）和尺寸排阻色谱（SEC）在结构保留和可扩展性方面具有优势；然而，TFF存在污染物共过滤风险和因滤孔堵塞导致EV损失的低产量问题，而SEC常导致样品稀释和低产量。聚合物基沉淀和膜亲和柱便于快速处理小体积样品，但这些方法常通过非囊泡蛋白的共沉淀损害分离纯度。相反，免疫亲和技术通过靶向特定表面抗原实现更高的特异性，但受高成本和延长孵育需求限制，且仅富集特定EV亚群。
不同方法学途径用于唾液EV分离，利用一系列生物物理特征（如大小、密度、电荷和表面组成）。分离方法的选择构成重大挑战，因为技术显示出EV产量和纯度之间的明显权衡。例如，密度梯度法用于唾液EV分离据报道具有高纯度，而其他研究发现SEC提供最高纯度，尽管以显著较低的产量为代价。相反，基于沉淀的方案可能提供高唾液EV和蛋白回收率，但这常归因于非囊泡蛋白的共沉淀，导致较低纯度。
因此，标准化采集方案以减轻 circadian rhythms 引入的变异性至关重要，因其影响唾液流速、唾液成分和口腔微生物组。报告唾液刺激的使用并强制要求采集前至少一小时禁食禁水对于确保样本标准化至关重要。为防止降解和细菌生长，推荐冰上（4°C）采集。处理常包括样品稀释以降低黏度和提高分离效率。分离后，唾液EVs表现出显著的稳定性，在4°C下可保持完整长达20个月。此外，唾液EVs可从4°C储存长达28天的全唾液中分离，仍显示完整的膜结构。
超越采集层面控制，供体内在生物学变量也代表需要关注的分析前变异性来源。口腔健康状况可作为有意义的混杂因素出现，因为牙周炎和牙龈炎等状况改变口腔腔的细胞组成和局部炎症环境，可能对唾液EVs的浓度和分子货物产生下游影响。牙龈出血将红细胞和免疫细胞衍生EVs引入唾液，代表一种难以与疾病相关信号区分的污染。同样，影响唾液腺功能的药物（抗胆碱能药、降压药和抗抑郁药）可减少唾液流速和改变蛋白分泌，在未报告或控制用药情况的研究中引入系统混杂。
冻融循环对唾液EV完整性的影响构成另一关键但常被忽视的分析前变量。虽然单次冻融循环可能对EV浓度和直径产生不显著影响，但重复循环显著改变EV表面组成和膜完整性。因此，如需冷冻，冷冻和储存方案必须在比较研究中保持相同，以确保生物样本库输出的可靠性。这在多中心研究和基于生物样本库的调查中尤为重要，因为无法保证所有样本具有相同的冻融历史。
## 4 唾液细胞外囊泡在疾病诊断中的应用
### 4.1 神经精神及神经退行性疾病
新兴证据表明脑源性EVs可到达口腔腔，在唾液中可检测。这一观察支持不良应激源的暴露与可测量的神经生物学改变汇聚的工作理论，可通过唾液EVs等客观诊断工具捕获，从而为临床观察提供确证手段。
在此背景下，唾液EV内容物作为多种神经精神疾病有前景但仍属探索性的生物标志物来源出现。研究仍处于初期阶段：Monteleone等（2020）鉴定了唾液EV蛋白M6a（n=88），一种参与分化、棘形成和突触发生的神经元糖蛋白，作为抑郁和焦虑的潜在生物标志物。Cohn等（2022）提出唾液EV磷酸甘油酸激酶1（PGK1）和miR-3185作为情绪变化和疲劳广泛症状的标志物，在需要持续注意的职业中降低认知表现风险评估中具有潜在应用。Holliday等（2025）分析了唾液外泌体miRNAs以寻找高压力状况的客观指标，鉴定了高慢性压力和/或高不良童年经历（ACE）评分个体中差异表达的miRNAs，提示这些miRNAs可作为心理逆境的客观指标。
在神经退行性疾病方面，唾液EVs已被确认为有前景的诊断候选。Rani等（2021）报道了认知受损个体和阿尔茨海默病（AD）患者中唾液EV浓度升高以及寡聚淀粉样蛋白β（Aβ）和磷酸化tau（p-tau）蛋白表达增加。Ryu等（2023）随后证明AD患者表现唾液EV miR-485-3p浓度升高，与脑内Aβ沉积呈正相关（r=0.6083，p<0.0001），并对Aβ-PET阳性具有强预测价值（AUC=0.9217；敏感性86%，特异性89%）。
创伤性脑损伤（TBI）方面，Cheng等（2019）发现脑创伤患者EVs表现与神经斑块形成、淀粉样前体蛋白和凋亡相关基因的上调。Matuk等（2021）报道了MMA格斗者中急性脑震荡损伤后一小时内以及慢性TBI暴露个体中ALOX5、ITGB2、ADRB2和HRH1等基因的上调，这些基因作为细胞应激反应、炎症调节和信号转导的中介发挥作用。
帕金森病（PD）诊断中，Cao等（2019）证明PD患者唾液EVs中寡聚α-突触核蛋白（α-syn
olig）和α-syn
olig/α-syn
Total水平显著高于健康对照（分别为10.39 pg/ng vs. 1.37 pg/ng和1.70 pg/ng vs. 0.67 pg/ng）。虽然两个标志物均成功区分PD患者与对照，但未建立标志物水平与Hoehn and Yahr量表等临床参数的相关性。
### 4.2 癌症
#### 4.2.1 肺癌
Sun等（2017）检验了肺癌患者唾液和血清外泌体蛋白质组，发现高度重叠，两体液间80%蛋白质共享，证明唾液作为全身状况"镜子"的潜力。该研究中，唾液EV蛋白质组分析鉴定了29种与肺癌相关蛋白质，直接关联Akt/MAPK和RAS-MAPK通路。Sun等（2018）进一步分析了肺癌患者唾液EV蛋白质组，鉴定了六种高度失调蛋白质，其中CRNN、MUC5B、BPIFA1和IQGAP1经免疫印迹证实，且这些蛋白质在全唾液中无显著差异，凸显其诊断潜力特异于EV组分。
Wahid等（2022）采用Ti
4+固定化亲和色谱分析唾液EV磷酸化蛋白，鉴定了32种显著失调蛋白质，包括SPARC样蛋白1、EPS8相关蛋白2和anoctamin 1（ANO1）。Liu等（2023）鉴定了唾液EVs中三种显著上调的miRNA（miR-92b-5p、miR-135b-5p和miR-532-3p），该miRNA特征在区分癌症与健康对照中达到高诊断准确性（AUC 0.912；p<0.001）。机制研究还将唾液EVs与癌症转移联系起来：Dong等（2025）证明唾液EV蛋白通过α2,6-唾液酸化诱导的内质网应激增加血管通透性，使唾液腺腺样囊性癌细胞能够外渗至肺部。
#### 4.2.2 头颈部癌
口腔鳞状细胞癌（OSCC铺设
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我继续：
口腔鳞状细胞癌（OSCC）是头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中最常见的类型。Gai等（2018）报告了唾液EV miRNA特征与OSCC相关，包括miR-412-3p、miR-512-3p、miR-27a-3p、miR-373-3p和miR-494-3p的上调，以及miR-302b-3p和miR-517b-3p在OSCC衍生唾液EVs中的独特表达，其中mir-512-3p和mir-412-3p分别显示0.847和0.871的高AUC评分。Patel等（2023）则识别了三种miRNA特征——miR-140-5p、miR-143-5p和miR-145-5p——在OSCC唾液外泌体中显著下调，该特征达到高诊断准确性（AUC 0.99，p<0.0001，98%敏感性和99%特异性）。Faur等（2022）证明miR-486-5p的过表达可区分口咽癌与口腔癌，AUC分别为0.89 vs. 0.67。此外，Patel等（2022）提出唾液EV miR-1307-5p作为预后生物标志物，其高表达与不良预后、侵袭性疾病和治疗抵抗相关。Lin等（2019）报告唾液EV G-NchiRNA对检测食管鳞状细胞癌（ESCC）具有高敏感性（89%）和特异性（91%）。Li等（2022）多中心研究进一步鉴定了唾液外泌体tRNA双特征（tRNA-GlyGCC-5和sRESE），诊断敏感性90.5%，特异性94.2%。Kumar等（2025）最近研究了唾液EV mRNA谱用于OSCC检测，采用TNF-α和OAZ1双基因panel，AUC为0.89，敏感性80%，特异性90%。Bozyk等（2023）报告了OSCC中几种差异表达蛋白质，包括AMER3、LOXL2、AL9A1和PSB7；三蛋白质panel（PSB7、AMER3和LOXL2）的AUC为0.96，敏感性100%，特异性75%。Tang等（2021）证明HPV驱动的口咽癌在唾液EVs中六种糖酵解酶（ALDOA、GAPDH、LDHA、LDHB、PGK1和PKM）水平升高，反映HPV在增强Warburg效应中的作用。Jiang等（2025）鉴定了HNSCC患者唾液外泌体中高度上调的circPRMT5，其通过IGF2BP3-SERPINE通路促进肿瘤进展。
#### 4.2.3 前列腺癌和胰腺癌
Luedemann等（2022）分析了74名男性参与者的唾液EVs中16种前列腺癌相关miRNA，其中hsa-mir-200b和hsa-mir-331-3p显示前列腺癌与非癌组之间的显著差异表达，阳性预测值71%，AUC分别为0.663和0.648。Machida等（2016）研究了唾液EV miRNAs作为胰胆道癌的生物标志物，鉴定了两种显著上调的miRNA（miR-1246和miR-4644），miR-1246达到AUC 0.814，miR-4644为0.763，联合后AUC改善至0.833。
### 4.3 唾液细胞外囊泡在舍格伦综合征中的应用
原发性舍格伦综合征（pSS）是一种慢性系统性风湿自身免疫病。Aqrawi等（2017）的唾液EV蛋白质组分析揭示了pSS患者APMAP、GNA13和WDR1的上调。Aqrawi等（2019）报告CD44和lipocalin-2（LCN2）在pSS患者全唾液和唾液EVs中持续上调。Cross等（2023）鉴定了pSS患者唾液EVs中tRNA-Ile-AAT-2-1的下调，提示其作为潜在生物标志物的效用。Xie等（2025）证明来源于唇腺间充质干细胞（MSCs）、转染let-7f-5p的EVs能够抑制促炎性Th17细胞活性并恢复Th17/Treg平衡。Habibi等（2025）的随机试验中，人Wharton胶MSCs来源的EVs配制成局部滴眼液在pSS患者干眼中显示显著获益。
### 4.4 唾液EVs与其他系统性疾病
Berckmans等（2011）证明了这些TF携带唾液EVs的促凝能力，显示伤口血凝时间从300±96显著缩短至186±24秒（p=0.03）。Yu等（2018）显示唾液EVs将TF和CD24共定位，通过结合和积累于活化血小板表面促进纤维蛋白生成。Hu等（2022）证明EV丰富组分而非EV耗尽对应物，在正常血浆（TF缺乏）和FVIIa缺乏血浆中有效促进FXa生成。Thaler等（2024）确认了血友病A患者唾液EVs中外源性 tenase 复合物的存在。Lau等（2013）使用原位同系胰腺癌小鼠模型，鉴定并验证了肿瘤小鼠唾液中七种显著上调的转录本（Apbb1ip、Aspn、Incenp、Daf2、Foxp1、BC031781和Gng2），其中五种在唾液来源EVs中富集。Zheng等（2017）通过鸟枪法质谱鉴定IBD患者唾液EVs中蛋白酶体亚基α型7（PSMA7）显著升高。Yang等（2024）证明活动期IBD患者唾液EVs诱导小鼠黏膜炎症和上皮损伤，其通过促进抑制性蛋白IκB-α降解激活NF-κB通路。Yang等（2025）后续研究鉴定了五种miRNA诊断特征（hsa-mir-1246、hsa-mir-142-3p、hsa-mir-16-5p、hsa-mir-301a-3p和hsa-mir-4516），独立队列验证的复合模型对IBD患者与健康对照的区分AUC为1.00，对活动期与缓解期的区分AUC为0.86。
## 5 结论
唾液EVs代表了生物标志物发现的引人注目的前沿领域，具有辅助复杂人类疾病诊断、预后和纵向监测的明确潜力。然而，从实验室到临床的转化受到方法学标准化持续缺乏的阻碍。未来研究必须优先严格遵循MISEV2023指南，开展大规模、多队列研究以验证唾液EV衍生生物标志物，并机制性阐明口腔微生物组对EV分泌和货物的影响，最终评估分离纯度同时兼顾经济可行性，建立可扩展的工作流程以常规诊断应用。
