凝血因子Ⅷ（FVIII)检测方法测定达莫可托凝血因子α聚乙二醇醇（Damoctocog Alfa Pegol）的准确性：一项比较分析

《Haemophilia》：Accuracy of Factor VIII Assays for Measuring Damoctocog Alfa Pegol: A Comparative Analysis

　　

凝血因子Ⅷ（FVIII)检测方法测定达莫可托凝血因子α聚乙二醇醇（Damoctocog Alfa Pegol，Jivi?，Bayer公司，美国加利福尼亚州伯克利市）的准确性比较分析

血友病A是一种遗传性出血性疾病，其特征为凝血因子Ⅷ（coagulation factor Ⅷ，FVIII）的定性或定量缺陷。FVIII替代疗法在过去数十年间一直是主要的治疗手段。近年来，随着生物技术的发展，重组FVIII产品的研发显著降低了血源传播性疾病的风险，并进一步通过聚乙二醇化（PEGylation）或白蛋白融合等分子修饰技术发展为延长半衰期（extended half-life，EHL）制剂，大幅减少了患者的注射频率，改善了生活质量。

达莫可托凝血因子α聚乙二醇醇（Damoctocog alfa pegol）是一种基于B域缺失型重组FVIII的聚乙二醇化EHL产品，于2018年获得欧洲药品管理局和美国食品药品监督管理局的批准上市。临床实践中，FVIII活性监测对于优化治疗效果至关重要，可采用一期法凝固试验（one-stage clotting assay）或显色法（chromogenic assay）进行测定。然而，由于不同实验室方法和试剂存在已知的性能变异性，准确监测改性FVIII产品仍具挑战性。国际指南要求实验室在测定达莫可托凝血因子α聚乙二醇醇活性前验证其检测程序的准确性，并推荐了部分适用及不适用的试剂。基于既往文献报道的变异性和实际临床需求，研究人员开展了一项多中心现场研究，旨在大规模实验室队列中评估各种一期法和显色法测定达莫可托凝血因子α聚乙二醇醇的准确性，为临床实验室的试剂选择提供循证依据。该研究发表于《Haemophilia》杂志。

该研究由ECAT基金会（External Quality Control for Assays and Tests）的外部质量评估网络在全球范围内的118家临床实验室开展，于2018年至2022年间进行。研究采用五种经冷冻干燥处理的血浆样本，其达莫可托凝血因子α聚乙二醇醇浓度分别为0.051、0.118、0.262、0.490、1.398 IU/mL（第一批）和0.044、0.120、0.243、0.458、1.222 IU/mL（第二批）。目标值通过TECHNOCHROM FVIII显色法在Ceveron alpha仪器上建立，使用与Bayer公司相同的校准品。各实验室采用其常规的一期法凝固试验和/或显色法测定FVIII活性，包括标准FVIII校准品，每种稀释度测定三次，取均值计算回收率。回收率在80%-120%范围内视为可接受。结果按试剂分组，采用GraphPad Prism软件进行可视化分析。

研究结果部分，首先介绍了参与实验室的基本情况。来自17个国家的118家实验室参与了研究，主要分布于欧洲（62%）、北美洲（29%）和南美洲（8%）。204次检测中，63%为一期法（128次），37%为显色法（76次）。一期法使用了12种不同商品化试剂，显色法使用了7种不同商品化试剂盒。参与者数量差异较大，从1人到54人不等。

在一期法试验结果中，研究人员发现不同试剂的准确性存在显著差异。以鞣花酸为激活剂的试剂中，Actin、Cephascreen、SynthaFax、Coagpia APTT FS及Actin FS均存在不同程度的高估现象，仅Actin FSL表现接近目标值。以硅胶为激活剂的试剂结果更为异质性：Triniclot S和STA PTT A在所有浓度下均出现低估；SynthasIL（n=54）和Pathromtin SL（n=20）的均值结果最为准确；APTT SP在大多数参与者中表现可接受，但个别实验室出现显著低估。以高岭土为激活剂的CK Prest略有高估但稳定性较好。值得注意的是，即使平均表现良好的试剂仍存在显著的实验室间变异，Pathromtin SL的个别实验室结果仍可能出现明显低估或高估，且这种变异不仅见于低浓度样本。

在显色法试验结果中，几乎所有试剂均呈现低浓度低估、高浓度逐渐恢复的趋势。Trinichrom是唯一在全浓度范围内回收率稳定的试剂，但持续低估约60%。Biophen（唯一含人凝血因子的试剂）结果最为可靠，0.12 IU/mL以上的临床相关浓度均在接受限内。Chromogenix作为使用最广泛的试剂（n=29），在中等浓度范围表现可接受，但低浓度低估、高浓度高估较明显。Elektrachrome呈现类似但更为明显的趋势。Siemens和Trinichrom一样持续低估且未达到接受标准。Precision Biologic因仅一家实验室使用，结果解释有限。与一期法类似，显色法同样存在显著的实验室间变异。

讨论部分，研究人员指出自多种FVIII替代产品问世以来，治疗监测日趋复杂。本研究作为大规模现场调查，补充了真实临床环境下不同平台、校准品和试剂组合可靠性的数据学会了，再次突显了临床实验室在未进行产品特异性验证时面临的挑战。研究人员强调，一期法的变异性主要取决于试剂而非激活剂类型；硅胶激活试剂结果更为异质性；即使文献和指南中描述为不适用的试剂在某些实验室可能产生可接受结果，反之亦然。这些差异可能源于仪器、校准品、缺乏血浆等方法的变异。尽管低浓度时的轻微不准确性对预防性治疗的临床决策影响可能有限，但在手术或急性出血等需要可靠量化FVIII浓度的情况下，许多试剂表现欠佳。研究人员还提及，使用产品特异性校准品（product-specific calibrator，PSC）可能克服试剂变异性，理想情况下应在FVIII新疗法的监管审批过程中开发。

研究结论部分，研究人员指出尽管本研究中的样本均采用实验室常规标准程序进行分析，但考虑到实验室间变异，使用达莫可托凝血因子α聚乙二醇醇特异性校准品而非通用FVIII校准品可能提高分析准确性和临床决策可靠性。然而，这在日常实践中实施更具挑战性，尤其在需要提供24/7服务的机构。此外，非替代性因子治疗与附加FVIII的联合使用（如突破性出血或手术管理）进一步增加了准确测量的难度。尽管如此，使用当前表现不佳的检测方法仍可能导致错误决策和剂量不足或过量，产生重大临床后果。研究人员强调，需要进一步的检测标准化和协调化以确保FVIII浓度测量的准确可靠，特别是随着重组FVIII底物的广泛使用。在实现这种协调化之前，每个实验室必须验证其选定方法能否可靠量化各种附加因子Ⅷ浓缩物，这一点至关重要。