错配修复缺陷/微卫星高度不稳定（dMMR/MSI-H）局部进展期结直肠癌的免疫逃逸：T细胞浸润减少与上皮细胞IDO1（indoleamine 2,3-dioxygenase 1）表达上调

《OncoImmunology》：Immune evasion in locally advanced mismatch repair-deficient microsatellite instability-high colorectal cancer: Reduced T-cell infiltration and upregulation of epithelial IDO1 expression

　　

摘要：早期经确认的微卫星不稳定（microsatellite instability, MSI）结直肠癌（colorectal cancer, CRC）通常因明显的免疫浸润而预后较好，然而部分患者仍发生转移，其潜在机制——尤其是与肿瘤免疫微环境（tumor immune microenvironment, TIME）相关的机制——尚不完全清楚。本研究纳入217例dMMR/MSI-H CRC组织标本，含89例Ⅲ/Ⅳ期及128例Ⅰ/Ⅱ期病例，对所有标本行组织芯片（tissue microarray, TMA）构建及免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）检测，评估上皮和间质区室中识别T细胞、B细胞、树突状细胞、自然杀伤（natural killer, NK）细胞、巨噬细胞、抑制性标记及免疫检查点靶点的免疫标记物，并额外计算队列来源的免疫浸润评分（immune infiltration score, IIS）。采用生存分析评估按肿瘤分期分层的免疫标记物预后影响。结果显示，Ⅰ/Ⅱ期dMMR/MSI-H CRC中CD3+T细胞及NK细胞水平显著更高，各区域IIS指标更高，间质中CD4+T辅助细胞水平更高；Ⅲ/Ⅳ期病例则表现为上皮细胞吲哚胺2,3-双加氧酶1（indoleamine 2,3-dioxygenase 1, IDO1）表达增加。鉴于Ⅳ期患者数有限，额外比较Ⅲ期与Ⅰ/Ⅱ期，发现上述免疫差异在淋巴结进展阶段即已显现。此外，CD3+、CD4+和CD8+T细胞及IIS在不同肿瘤分期中显示出各异的预后关联。研究表明，dMMR/MSI-H CRC的整体免疫原性及免疫标记物的预后相关性依赖于肿瘤分期，免疫谱分析可用于早期患者分层，并提示早期免疫干预治疗的潜在获益。

本文解读基于发表于《OncoImmunology》的研究论文，探讨错配修复缺陷/微卫星高度不稳定（mismatch repair-deficient/microsatellite instability-high, dMMR/MSI-H）结直肠癌（colorectal cancer, CRC）从早期向局部进展/转移演进过程中的肿瘤免疫微环境（tumor immune microenvironment, TIME）改变及免疫逃逸机制。

研究背景与立题依据

dMMR/MSI-H CRC因高频突变负荷（tumor mutational burden, TMB）产生大量新抗原，通常伴有丰富的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes, TILs）及较好早期预后，且对免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibition, ICI）敏感。然而仍有部分dMMR/MSI-H CRC患者出现淋巴结或远处转移，且Ⅲ期dMMR/MSI-H CRC发生率低于Ⅰ/Ⅱ期，常规化疗反应有限。这提示即便在高免疫原性背景下，肿瘤仍可通过免疫编辑实现免疫逃逸并促进进展，但相关TIME重塑机制不明。研究人员假设局部进展或转移性（Ⅲ/Ⅳ期）dMMR/MSI-H CRC原发灶免疫原性低于早期（Ⅰ/Ⅱ期），从而介导免疫逃逸与转移，为此开展分期分层免疫谱分析。

研究队列与主要技术方法

研究人员回顾性收集德国夏里特（Charité—Universit?tsmedizin Berlin）等多中心2009–2021年经病理确诊、未接受新辅助治疗、dMMR（IHC证实）或MSI-H（PCR证实）的CRC石蜡包埋（formalin-fixed paraffin-embedded, FFPE）标本，最终纳入217例（Ⅲ/Ⅳ期89例，Ⅰ/Ⅱ期128例）。主要关键技术方法包括：（1）组织芯片（tissue microarray, TMA）构建——每例肿瘤取浸润前沿（invasive margin, IM）和肿瘤中心（tumor center, TC）各3针（直径1.5 mm），分别标注上皮与间质区室；（2）多重免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）染色检测CD3、CD4、CD8、CD11c、CD20、CD56、CD68、CD163、FoxP3、IDO1、PD-1（programmed cell death protein 1）、PD-L1（programmed death-ligand 1）共12种标记物，IDO1采用H-score评估，PD-L1采用TAP（Tumor Area Positivity）、TPS（Tumor Proportion Score）、IC（Immune Cell score）、CPS（Combined Positive Score）评估；（3）全切片数字化与QuPath开源软件进行上皮/间质分区手动标注及阳性细胞自动计数，计算各标记物阳性细胞百分比，并基于上皮内CD3⁺和CD8⁺T细胞百分位数均值构建队列来源免疫浸润评分（immune infiltration score, IIS）；（4）Wilcoxon秩和检验（Benjamini–Hochberg校正）比较分期组间差异，Kaplan–Meier法与Cox比例风险模型评估免疫标记物预后价值（调整年龄、性别、BRAF状态、辅助治疗及分期×标记物交互项）。

研究结果

Lymphoid infiltration is increased in early-stage dMMR/MSI-H CRC, while immunosuppressive markers are enriched in the epithelial compartment of locally advanced dMMR/MSI-H CRC（早期dMMR/MSI-H CRC淋巴样浸润增加，而局部进展期dMMR/MSI-H CRC免疫抑制标记物富集于上皮细胞区室）

研究人员对IM和TC四个亚区（上皮ETIM、ETTC；间质STIM、STTC）定量比较发现：Ⅰ/Ⅱ期肿瘤各区域CD3⁺T细胞及CD56⁺NK细胞比例显著更高（p<0.01及p<0.001），间质STIM和STTC中CD4⁺T辅助细胞显著升高（p=0.0098及p<0.001），IIS亦显著高于Ⅲ/Ⅳ期（p=0.001）；CD8⁺T细胞各区间无统计学差异但ETTC呈早期偏高趋势（p=0.08）。相反，Ⅲ/Ⅳ期肿瘤上皮细胞CD11c⁺树突状细胞（ETIM p=0.002，ETTC p<0.001）及上皮细胞IDO1 H-score（ETIM、ETTC均p=0.003）显著升高，而间质IDO1在Ⅰ/Ⅱ期更高（STIM p=0.001，STTC p=0.002）；PD-L1仅TC区TPS在Ⅲ/Ⅳ期略高（p=0.023）。分期Ⅲ vs Ⅰ/Ⅱ比较重现上述全部差异，Ⅳ vs Ⅰ/Ⅱ未达显著性。结论：早期dMMR/MSI-H CRC具更强T细胞/NK细胞浸润及更高IIS，局部进展期则出现上皮区室免疫抑制分子（IDO1、PD-L1）上调，提示免疫重塑在淋巴结进展阶段已发生。

T-cell infiltration shows a stage-dependent prognostic effect in dMMR/MSI-H CRCs（dMMR/MSI-H CRC中T细胞浸润显示分期依赖性预后效应）

Kaplan–Meier分析示Ⅲ/Ⅳ期PFS显著差于Ⅰ/Ⅱ期（p<0.001），OS差异未达显著（p=0.12）。单因素Cox提示上皮PD-1⁺细胞及高IIS与较好OS相关、间质TC区IDO1 H-score与较差OS相关（均未通过多重校正）；PFS中上皮及间质TC区IDO1 H-score、IM及TC区PD-L1 TPS负向关联且通过BH校正。多因素Cox含分期×标记物交互项显示：上皮IM区CD3⁺T细胞、间质IM区CD4⁺T细胞、上皮IM及TC区CD8⁺T细胞及IIS的保护性预后效应在Ⅲ/Ⅳ期强于Ⅰ/Ⅱ期；间质IM区IDO1预后关联亦具分期差异。表明T细胞相关标记物及IIS的预后价值具分期特异性，免疫抑制标记物IDO1、PD-L1与不良结局相关。

讨论与结论总结

研究人员指出，本研究首次在dMMR/MSI-H CRC中证实免疫图谱具分期异质性——Ⅰ/Ⅱ期以强T细胞/NK细胞浸润和高IIS为特征，Ⅲ期则出现T细胞（尤其上皮内总体CD3⁺T细胞群，含CD4⁺T辅助等亚群）减少伴上皮细胞IDO1上调为代表的免疫抑制微环境，且该差异在淋巴结进展时已显现。IDO1呈区室特异性：早期高间质IDO1可能源于免疫调节性细胞对活跃局部免疫的反应，晚期高上皮IDO1则可能由肿瘤细胞内在信号或髓系来源抑制细胞诱导，参与免疫逃逸。CD3与IIS的分期差异不完全由CD8⁺CTL驱动，提示涉及更广T细胞亚群重塑。PD-L1分期差异有限但不排除功能意义。T细胞标记物在Ⅲ/Ⅳ期显示更强保护预后关联，支持局部进展期残存免疫浸润仍具临床意义。研究局限含单标记IHC无法共标、TMA可能低估空间异质性、PFS数据不全及直肠病例极少。综上，dMMR/MSI-H CRC的免疫原性及免疫标记物预后意义依赖肿瘤分期；局部进展期出现T细胞浸润减少与上皮免疫抑制分子上调的免疫重塑，支持对早期dMMR/MSI-H CRC开展免疫谱分层及新辅助/早期ICI干预探索，并为未来整合空间转录组、多重成像及新抗原/B2M突变分析以阐明耐药机制提供方向。