关于circTEAD1在肝脏缺血-再灌注损伤中调节miR-92b-3p/TLR4轴的机制研究

《European Journal of Medical Research》：Mechanistic insights into circTEAD1-mediated modulation of miR-92b-3p/TLR4 axis in liver ischemia–reperfusion injury

　　

摘要

研究目的

本研究旨在探讨circRNA TEAD1（circTEAD1）调控自噬的潜在机制，以及其在肝脏缺血再灌注损伤（LI/RI）中的作用。

研究方法

利用经过缺氧/复氧处理（H/R）的AML12细胞建立体外LI/RI模型。将这些细胞转染携带circTEAD1、miR-92b-3p或TLR4表达载体的质粒。通过MTT检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测与细胞凋亡和自噬相关的蛋白水平。利用starBase数据库筛选出可能靶向circTEAD1的miRNAs，然后对排名前10的候选miRNAs进行RT?qPCR验证。此外还通过双荧光素酶报告基因实验确认miR-92b-3p与circTEAD1或TLR4之间的靶向关系。在LI/RI小鼠的尾静脉中注射能够调节circTEAD1、miR-92b-3p或TLR4功能的重组慢病毒载体，以此评估其对于肝脏组织损伤、细胞凋亡及自噬的影响。

研究结果

在经过H/R处理的AML12细胞中，circTEAD1和TLR4的表达显著升高，而miR-92b-3p的表达则下降。敲低circTEAD1可提高细胞存活率，同时减少细胞凋亡和自噬现象；不过，抑制miR-92b-3p会逆转这些效应。同样地，过表达miR-92b-3p也能提升细胞存活率，抑制细胞凋亡和自噬，而TLR4的过表达则会抵消这些作用。circTEAD1可直接与miR-92b-3p结合，而miR-92b-3p又能直接靶向TLR4。在体内实验中，抑制circTEAD1可通过miR-92b-3p/TLR4通路减轻LI/RI小鼠的肝脏损伤、细胞凋亡及自噬现象。

结论

通过miR-92b-3p/TLR4通路抑制自噬，可降低circTEAD1的表达，进而减轻肝脏缺血再灌注损伤。