RNF149/RBM25/MYC/PD-L1轴在透明细胞肾癌微环境中促进CD8+ T细胞功能异常

《Cellular Oncology》：RNF149/RBM25/MYC/PD-L1 axis promotes CD8+ T cell dysfunction in microenvironment of clear cell renal cell carcinoma

　　

摘要

背景

肾细胞癌是一种常见的肾脏癌症，其中透明细胞肾细胞癌是最为常见的病理类型。CD8⁺ T细胞是肿瘤微环境中最主要的杀伤细胞。环指蛋白149在多种肿瘤中具有促进肿瘤生长的作用，其在透明细胞肾细胞癌中的作用尚不明确。本研究旨在探讨RNF149在透明细胞肾细胞癌中的功能。

方法

通过西方印迹法和免疫组化染色检测临床透明细胞肾细胞癌标本中RNF149的表达情况，利用慢病毒感染实现透明细胞肾细胞癌细胞中RNF149的过表达或敲低。将CD8⁺ T细胞与肿瘤细胞共培养，并通过ELISA和流式细胞术检测与细胞耗竭相关的标志物。在野生型小鼠和裸鼠中开展移植实验，以评估肿瘤中CD8⁺ T细胞的浸润情况。

结果

与癌旁正常肾脏组织相比，透明细胞肾细胞癌标本中RNF149的表达水平更高，且其表达与肿瘤大小及TNM分期相关。功能获得和功能丧失实验表明，在与CD8⁺ T细胞共培养的情况下，RNF149能够促进透明细胞肾细胞癌细胞的集落形成，并抑制其凋亡。RNF149过表达的透明细胞肾细胞癌会诱导CD8⁺ T细胞出现细胞耗竭相关表型，表现为干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α、颗粒酶B和穿孔素-1的产生减少，同时PD-1、淋巴细胞激活3（LAG3）、T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域3（TIM3）以及具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体（TIGIT）的表达增加。移植实验显示，敲低RNF149可延缓野生型小鼠中透明细胞肾细胞癌的肿瘤发生，同时加速肿瘤中CD8⁺ T细胞的浸润。作为E3连接酶，RNF149可与RNA结合模体蛋白25结合，介导其对靶蛋白的泛素化及其降解过程。此外，RNF149通过破坏RBM25的稳定性并激活MYC的转录活性，促进程序性细胞死亡1配体1（PD-L1）的表达。

结论

RNF149在体内和体外均能促进透明细胞肾细胞癌的生长，同时通过催化RBM25的泛素化并激活PD-L1的转录，诱导肿瘤微环境中的CD8⁺ T细胞出现细胞耗竭相关表型。这些研究结果可为透明细胞肾细胞癌的临床免疫治疗提供新的思路。