用于法医外周血鉴定的高效14重cSNP SNaPshot检测方法

《BMC Genomics》：High-efficiency 14-plex cSNP SNaPshot assay for forensic peripheral blood identification

　　

摘要

分析犯罪现场发现的体液痕迹时，不仅需要DNA谱型，还需要确定这些痕迹的成分，尤其是在混合痕迹中。先前的研究已经表明，可以通过mRNA生物标志物来区分法医体液。在本研究中，我们筛选了位于四种外周血mRNA生物标志物（CD3G、ANK1、SPTB和GYPA）上的14个cSNP，并利用SNaPshot方法开发了一种用于法医血液鉴定的多重检测方法。具体而言，采用一步式多重逆转录PCR（RT-PCR）策略，通过逆转录从相应的mRNA中生成cDNA扩增子。我们对这种多重SNaPshot检测方法在血液鉴定方面的灵敏度、特异性及能力进行了系统评估。结果表明，这14个cSNP组合能够成功识别外周血，包括单一来源的体液以及混合样本。不过，有几种外周血cSNP标记在月经血和阴道分泌物中的表达水平较低。该多重检测方法的检测灵敏度可达1纳克的总RNA输入量。此外，我们对19份外周血样本的14个cSNP位点进行了基因分型，DNA和RNA衍生的谱型之间具有100%的一致性。根据中国北方100名无亲缘关系的汉族个体的14个cSNP位点的等位基因频率，计算出这14个cSNP的累积鉴别力为0.98303。