某大学医院急性呼吸道感染病例中鼻病毒的分子分型

《Journal of Medical Virology》：Molecular Types of Rhinovirus Among Cases of Acute Respiratory Infections in a University Hospital

　　

鼻病毒（Rhinovirus, RV）属于小核糖核酸病毒科（Picornaviridae）肠道病毒属（Enterovirus），包含三个种：RV-A、RV-B和RV-C，共有超过170个RV亚型。本研究旨在对送往布尔萨乌鲁达大学医院聚合酶链反应实验室的鼻咽拭子样本中检测到的RV进行分子分型，并确定其季节分布以及与年龄和性别分类的关系。研究人员使用PureLink? Viral RNA/DNA Mini Kit（ThermoFisher Scientific，美国）从80份年龄0–90岁患者的样本中提取病毒RNA。采用OneStep RT-PCR Kit（Qiagen，德国）以及靶向5'非翻译区保守区域的RV通用引物进行核酸扩增。通过Sanger测序方法进行DNA测序分析，并使用MEGA 11程序分析所得序列。RV全年循环，秋季达到高峰。在80份样本中，RV-A、RV-B和RV-C分别检出31份（38.75%）、8份（10%）和33份（41.25%）。三份样本（3.75%）被分型为肠道病毒-D68（Enterovirus-D68），而五份样本（6.25%）无法分型。RV-A在所有季节均有检出，RV-C在秋季常见（p < 0.05），RV-B仅在春季和秋季检出。研究人员发现RV-A感染见于更早年龄（p < 0.05），RV-C感染见于更晚年龄（p < 0.05）。RV类型及其分布与COVID-19大流行前在我国进行的研究相似，且类型未受大流行影响。

**论文解读：某大学医院急性呼吸道感染病例中鼻病毒的分子分型研究**

**研究背景与问题**

鼻病毒（Rhinovirus, RV）是无包膜、单股正链核糖核酸（RNA）病毒，属于小核糖核酸病毒科（Picornaviridae）肠道病毒属（Enterovirus）。自1956年发现以来，RV被分为三个种——RV-A、RV-B和RV-C，目前已确认超过170种亚型，包括83种RV-A、32种RV-B和57种RV-C。RV基因组约7200个碱基对，编码11种蛋白。由于核糖核酸聚合酶缺乏校对活性，RV遗传多样性丰富，突变率高，导致病毒间缺乏共同抗原，限制了血清学诊断方法的常规应用。RV通过呼吸道飞沫和污染表面传播，儿童感染更为频繁。尽管RV常与上呼吸道感染相关，但越来越多的研究表明，RV也可导致下呼吸道感染，包括免疫功能低下者和老年人的肺炎、儿童的重症毛细支气管炎及慢性肺病急性加重，造成全球社会经济负担。然而，在土耳其COVID-19大流行后，暂无RV分型研究。本研究旨在对送往布尔萨乌鲁达大学医院聚合酶链反应实验室的鼻咽拭子样本中检测到的RV进行分子分型，并确定其季节分布及与年龄和性别分类的关系，为流行病学监测提供依据。

**研究设计与主要技术方法**

研究人员于2021年10月至2022年12月期间，从有呼吸道感染症状（包括至少一种：咽痛、流涕、鼻塞、打喷嚏、咳嗽、发热、头痛、疲劳、肌痛）的0–90岁患者中收集鼻咽拭子样本。共检测1888份呼吸道样本，使用多重聚合酶链反应试剂盒进行初步筛查，仅保留RV/肠道病毒（Enterovirus, EV）阳性且无混合感染的样本。随机选取80份样本进行后续研究。关键技术方法包括：使用PureLink? Viral RNA/DNA Mini Kit提取病毒RNA；采用OneStep RT-PCR Kit进行逆转录聚合酶链反应，并使用Kiang等设计的靶向5'非翻译区（5'UTR）的通用引物；通过Sanger双脱氧链终止法进行DNA测序；利用MEGA X v11程序进行序列比对（MUSCLE算法）和系统发育树构建（邻接法，Bootstrap值1000，Kimura 2参数模型）；统计学分析采用卡方检验和独立t检验（IBM SPSS Statistics v22），p < 0.05认为有统计学意义。

**研究结果**

**3.1 分子分型结果**
在80份测序样本中，33份（41.25%）鉴定为RV-A，8份（10%）为RV-B，31份（38.75%）为RV-C，3份（3.75%）为肠道病毒D68（EV-D68），5份（6.25%）无法分型。RV-A和RV-C比RV-B更常见（卡方检验，p < 0.001），但RV-A与RV-C的流行率无显著差异。RV-A亚型包括：A9（4份）、A15、A22、A40各1份、A41（2份）、A45（3份）、A55、A56、A58、A61、A67各1份、A68（3份）、A76（1份）、A80（2份）、A81（2份）及2份未分型A。RV-B亚型包括：B48（2份）、B84（3份）、B92（3份）。RV-C亚型包括：C3（4份）、C4（3份）、C5、C9各1份、C11（5份）、C15（1份）、C19（2份）、C26、C28各1份、C35（6份）、C44（2份）、C50（1份）及3份未分型C。系统发育树采用传统矩形模型绘制。

**3.2 RV的季节性、年龄和性别**
RV全年均有检出，无论类型如何，15个月研究期间秋季（9月至12月）检出率最高。RV-A在秋季比RV-B更常见（p = 0.0041）。RV-B仅在春季和秋季检出。RV-C除夏季外所有月份均有检出，且在秋季比其他季节更流行（p < 0.001）。秋季患者平均年龄13.40岁，明显高于其他季节的1.99岁（p = 0.0012）。在年龄分布上，RV-A平均年龄3.66岁，RV-B 9.65岁，RV-C 13.69岁。RV-A感染见于更年轻年龄（p = 0.0097），RV-C见于更年长年龄（p = 0.0066）。RV类型与年龄组之间存在显著关联（p = 0.008）。性别方面，36名女性（50%）和36名男性（50%）中，RV-A、RV-B、RV-C分布无显著差异（p = 0.87）。

**讨论与结论**

本研究表明，RV-A和RV-C在土耳其流行呈共优势，RV-B循环有限，与COVID-19大流行前国内研究一致，类型未受大流行影响。共鉴定出31种不同亚型，其中RV-A 16种、RV-B 3种、RV-C 12种。RV-A全年流行，秋季更常见；RV-C在秋季高发；RV-B仅见于春季和秋季。年龄分析显示，RV-A常见于2岁以下儿童，RV-C多见于学龄儿童和成人，而性别无显著差异。这些结果与既往研究部分一致，但年龄相关倾向存在争议，提示不同RV种可能演化出不同的免疫逃避策略。研究局限性包括：回顾性设计、样本量较小（仅80份测序样本）、地理范围有限（仅南马尔马拉地区一家大学医院）、缺乏全面临床数据。尽管如此，本研究是COVID-19大流行期间在土耳其进行的首次RV分型研究，为理解RV分子流行病学提供了重要数据，并为后续基于先进测序技术和扩大参考数据库的研究奠定了基础。

**研究结论翻译**
本研究发现，RV类型及其分布与COVID-19大流行前在我国进行的研究相似，且类型未受大流行影响。