《Ticks and Tick-borne Diseases》：Tick-borne bacterial and protozoal pathogens in horses in Austria – A cross-sectional study on current and past infections and potential risk factors
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蜱传细菌和原生动物病原体是对全球马匹健康的主要威胁。在奥地利，关于马匹中梨形虫（piroplasms）、噬吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum, A. phagocytophilum）和疏螺旋体属（Borrelia spp.）等病
蜱传细菌和原生动物病原体是对全球马匹健康的主要威胁。在奥地利，关于马匹中梨形虫（piroplasms）、噬吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum, A. phagocytophilum）和疏螺旋体属（Borrelia spp.）等病原体的研究很少，且未覆盖全国马群。为解决这一问题，研究人员采集了无先前蜱传病原体感染记录的马匹（n=588）血液样本，通过PCR检测驽巴贝斯虫（Theileria equi, T. equi）、马巴贝斯虫（Babesia caballi, B. caballi）或A. phagocytophilum的DNA，并使用商业试剂盒检测针对这些病原体以及伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi, B. burgdorferi）的特异性抗体。虽然未能扩增出B. caballi的DNA，但在11匹马中检测到特异性抗B. caballi抗体（ELISA检测率为1.9%）。在12匹马中扩增出T. equi的DNA。在两匹马中检测到大巴贝斯虫（Babesia canis, B. canis）的DNA。在T. equi PCR阳性的马匹以及一匹B. canis PCR阳性的动物中检测到抗T. equi抗体。未能扩增出A. phagocytophilum DNA，但在544匹马中，42.7%（IFAT）和57.3%（ELISA）检测到抗A. phagocytophilum（抗Ap）抗体，44.2%的马匹具有特异性抗B. burgdorferi抗体。在A. phagocytophilum血清阳性的马匹中，57.8%同时也对B. burgdorferi呈阳性。总体而言，28%的马匹对两种或三种病原体呈阳性。与感染相关的常见显著关联因素包括放牧和饲养方式，对于T. equi还包括出生地/进口情况。A. phagocytophilum和B. burgdorferi的高感染率表明奥地利马匹普遍暴露于蜱虫和蜱传病原体，加之在全国范围内检测到的T. equi感染，突出了在放牧或户外活动期间蜱虫叮咬后病原体传播给媒介、进而感染其他马匹并导致疾病的潜在风险，应提醒兽医在临床表现明显的病例中将这些病因作为鉴别诊断。
马匹蜱传细菌和原生动物病原体在奥地利的研究背景、问题与意义：蜱传感染（如马梨形虫病equine piroplasmosis, EP、马粒细胞无形体病equine granulocytic anaplasmosis, EGA和莱姆病Lyme borreliosis, LB）是全球马匹健康的重要威胁。在中欧，EGA和LB分布广泛，而EP被认为不具地方性，但近年来在德国、奥地利和瑞士等地无旅行史的病例报告提示需重新评估。奥地利马群约14万匹，但缺乏全国性病原体流行率和分布数据，尤其是EP。现有研究仅基于零星病例，无法指导预防策略。为此，研究人员开展了这项横断面研究，旨在系统评估奥地利马匹中蜱传病原体的暴露情况，识别风险因素，为防控提供依据。论文发表在《Ticks and Tick-borne Diseases》。
主要关键技术与方法：本研究于2023年5月至2024年9月从奥地利588匹私人马匹采集血液样本，涵盖所有9个联邦州，平均抽样比例0.46%。主要技术包括：（1）分子检测：采用巢式PCR（巢式聚合酶链反应，nested PCR）扩增梨形虫18S rRNA基因，常规PCR扩增无形体科16S rRNA基因，阳性产物经Sanger测序和BLAST比对鉴定；（2）血清学检测：使用竞争性ELISA（competitive ELISA, cELISA）和间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence test, IFAT）检测抗T. equi和B. caballi抗体，使用ELISA检测抗A. phagocytophilum和抗B. burgdorferi抗体；（3）系统发育分析：基于18S rRNA序列用最大似然法（Maximum Likelihood）和Tamura 3参数模型构建T. equi系统发育树；（4）统计分析：采用卡方检验、决策树（CART分析）和逻辑回归评估风险因素，Kappa统计评估检测方法一致性。
研究结果：
3.1 梨形虫（Piroplasms）：通过PCR检测，588份样本中12份（2.0%）为T. equi阳性，2份（0.3%）为B. canis阳性，未扩增出B. caballi DNA。对T. equi阳性样本进行系统发育分析，8份属于基因型E，4份属于基因型A（首次在奥地利发现）。血清学检测显示，所有T. equi PCR阳性样本在cELISA和IFAT中均为T. equi血清阳性；11份PCR阴性样本在B. caballi-cELISA中阳性；B. caballi-IFAT全部阴性。T. equi的cELISA与IFAT完全一致（Kappa=1），B. caballi的两种方法无一致性（Kappa=0）。
3.1.1 无形体（Anaplasma）：PCR未检测到A. phagocytophilum DNA。血清学检测显示，588匹马中42.7%（IFAT）和57.3%（ELISA，514匹马）为A. phagocytophilum抗体阳性。ELISA与IFAT结果一致性强（Kappa=0.85）。抗体阳性马匹遍布奥地利全境。
3.1.2 疏螺旋体（Borrelia）：588份血清样本中44.2%为B. burgdorferi s.l.抗体阳性，0.3%为临界值，55.4%阴性。阳性马匹遍布全国。
3.2 多病原体共同暴露：综合分析PCR和血清学结果，167匹马（28.0%）对两种或三种病原体呈阳性。最常见的组合是A. phagocytophilum + B. burgdorferi（147匹）。A. phagocytophilum血清阳性马匹中57.8%同时为B. burgdorferi阳性，且A. phagocytophilum血清阳性马匹对B. burgdorferi血清阳性的几率是阴性组的3.41倍（p<0.001）。
3.3 风险因素：通过CART分析和卡方检验，识别出以下关联。（1）T. equi：出生地（南欧 vs. 其他地区，OR=23.0）和进口状态是最重要预测因子，其次为饲养方式（室内马厩 vs. 其他，OR=4.8）和夏季放牧（限量放牧 vs. 全天放牧，OR=0.3）。（2）A. phagocytophilum：年龄增长（OR=1.1/年）、非运动用马（OR=3.2）、开放式马厩（OR=3.6）、夏季和冬季全天放牧（OR=3.6和3.7）增加风险；雌马高于骟马（OR=1.6）；进口马风险较低（OR=0.36）。（3）B. burgdorferi：雌马（OR=2.6）、年龄增长（OR=1.1/年）、非运动用马（OR=2.1）、北欧出生（OR=3.1）、夏季和冬季全天放牧（OR=2.1和2.3）增加风险；开放式马厩风险低于 paddock box（OR=0.5）。
讨论与结论翻译：本研究证明，除零星病例报告外，奥地利马匹确实暴露于马梨形虫、A. phagocytophilum和B. burgdorferi。A. phagocytophilum和B. burgdorferi具有人兽共患性，在奥地利地方流行，临床健康马群中血清阳性率较高；而马梨形虫病此前不被认为在奥地利流行，仅偶有与从流行区进口相关的病例。然而，在不同省份检测到临床亚临床梨形虫阳性马匹（包括T. equi PCR阳性携带者），表明奥地利作为无EP国家的状态可能需要在不久的将来重新评估。此外，必须考虑Dermacentor spp.作为媒介在奥地利传播马梨形虫的潜力。由于欧洲尚无批准用于马匹的蜱驱避剂，且缺乏许可疫苗，加之T. equi阳性马匹的检出，预计未来感染马匹数量将增加。因此，奥地利也可能发展成为T. equi的流行区。鉴于多数阳性病例来自进口马匹，应在引入马匹前进行病原体筛查。兽医应将EP视为出现相关临床症状马匹的可能鉴别诊断，并考虑无症状携带者作为感染储库。在缺乏许可疫苗的情况下，减少或预防蜱暴露是唯一有效的预防策略。由于抗B. burgdorferi抗体滴度的临床意义尚不明确，不建议在缺乏充分临床怀疑LB的情况下进行非特异性血清学检测。建立标准化的诊断和治疗指南将有助于减少兽医人员的不确定性。最后，实施系统性监测计划对追踪病原体分布和传播的变化至关重要，有助于早期风险评估，防止奥地利最终确立为马梨形虫病流行区。
