流式细胞术的优化及其在甘薯倍性鉴定中的应用

　　

摘要：

目的 染色体倍性鉴定是甘薯种质资源评价过程中的重要环节，为了克服传统方法在甘薯取材中的局限性，优化流式细胞术在甘薯倍性鉴定中的应用，建立一种高效的倍性鉴定方法，为后续不同倍性甘薯材料大规模鉴定提供基础。 方法 以‘徐紫薯8号’为试材，系统比较液氮研磨叶片法与刀片切碎根尖法在细胞核悬液制备中的效果，重点评估两种方法在细胞核得率、样品制备耗时及流式检测图谱质量方面的差异；同时，针对珍贵材料取材难的问题，通过调整裂解液中MgSO₄?7H₂O、DTT及Triton X-100的浓度，探索利用甘薯成熟展开叶进行倍性鉴定的可行性，并利用不同倍性材料对液氮研磨叶片法进行了单独及混合检测验证。 结果 液氮研磨叶片法在保证检测精度的同时，显著提升制备效率，单个样品在破碎环节和上机检测环节的耗时均明显缩短。在成熟叶鉴定中，将裂解液中DTT和Triton X-100浓度加倍后，有效细胞核释放量显著增加，成功克服成熟叶难以检测的问题。该方法在二倍体、四倍体及六倍体材料的单独及混合检测中均表现出优异的区分度，荧光强度比值与理论倍性比（1∶2∶3）高度吻合，验证了其稳定性和普适性。 结论 基于液氮研磨法改进后的流式细胞术在甘薯倍性鉴定中，不受根尖等取材限制，可以快速、准确检测倍性和筛选材料。