马铃薯‘新疆2号’遗传转化体系的建立

　　

摘要：

目的 构建马铃薯‘新疆2号’高效再生及遗传转化体系，为抗病毒育种提供技术支撑。 方法 以‘新疆2号’马铃薯为试验材料，用农杆菌介导法将含有植物RNA干扰载体质粒pCAMBIA2300-CP-RNAi转化马铃薯茎段外植体，探究预培养时间、植物激素组合及抗生素的种类及浓度对愈伤组织诱导及芽分化的影响；通过RT-qPCR技术，以Actin基因作为内参，检测CP基因mRNA表达水平，运用酶联免疫吸附（ELISA）技术定量检测植株中PVY病毒的实际含量，验证RNAi沉默效果及病毒抑制作用。 结果 当预培养、共培养时间均为2 d时，愈伤组织诱导的最适激素和抗生素组合为2.0 mg/L 6-BA + 0.8 mg/L 2,4-D + 50 mg/L Kan + 200 mg/L TMT，诱导率为85%，愈伤组织形态紧密，为鲜绿色，茎段两端膨大呈哑铃状；茎段分化的最适激素、抗生素配比为2 mg/L 6-BA + 2 mg/L ZT + 0.5 mg/L GA₃ + 50 mg/L Kan + 200 mg/L TMT时，出苗率及转化频率均达到最高，幼苗长势良好。转化苗在1/2 MS+0.6 mg/L IAA + 75 mg/L Kan + 200 mg/L TMT培养基中可形成再生植株，且根系发达。与未转化的对照植株相比，转基因植株中CP基因的相对表达量显著下调，PVY病毒的含量也明显降低，说明所构建的RNA干扰载体成功激发了特异性基因沉默效应，有效抑制了病毒在植株体内的积累。 结论 成功建立了稳定、高效的‘新疆2号’马铃薯遗传转化体系。构建的RNAi载体有效抑制了Y病毒在植株体内的积累。