通过包括重复抗原刺激在内的代谢与功能分析，可以更准确地评估CAR-T细胞产品的质量及其长期功能性

《Journal of Translational Medicine》：Metabolic and functional analysis including repetitive antigen stimulation provides a more accurate assessment for CAR-T cell product quality and long-term functionality

　　

摘要

背景

针对BCMA的CAR-T细胞疗法在多发性骨髓瘤治疗中展现了显著的临床疗效，但目前用于评估产品质量及预测其长期功能的方法仍不完善。虽然外周血单核细胞分离产物の免疫表型特征与临床预后相关，但对于输注后的CAR-T细胞产品的特性描述仍面临挑战，且不同研究之间的结果也存在差异。

方法

我们比较了两种版本的BCMA-CAR产品CARTemis-1，二者仅在共刺激结构域上存在差异（4-1BB与CD28），并在抗原刺激前后对其进行了详细的功能和分子特性分析，以确定哪种分析方法最能反映CAR-T细胞产品之间的功能差异。分析方法包括常规流式细胞术、短期细胞毒性检测、反复抗原刺激、代谢谱分析以及转录组分析。此外，还对15例患者来源的CAR-T细胞产品的代谢谱进行了分析。

结果

尽管先前的研究已报道过具有不同共刺激结构域的CAR-T细胞产品在功能上的差异，但在我们的实验体系中，常规检测并未发现其在存活率、扩增动态、免疫表型或激活/耗竭标志物表达方面存在显著差异。相反，那些对功能要求更高的检测方法则显示出了两者之间的明显差异。反复抗原刺激试验表明，CARTemis-1-BB具有更强的长期细胞毒性，而代谢谱分析则显示其在抗原暴露后具有更强的呼吸储备能力和最大呼吸能力。转录组分析进一步揭示了不同的信号通路调控情况：CARTemis-1-BB中T细胞激活相关信号更为活跃，而CARTemis-1–28则表现出Wnt/TGFβ相关反应。重要的是，对输注后CAR-T细胞产品的代谢谱分析还发现了与临床预后相关的独特特征，从而可以区分那些用于长期缓解患者的产品与那些用于短期缓解或无缓解患者的产品。

结论

持久性分析和代谢分析是临床前开发阶段优化CAR-T细胞构建体选择的重要工具，相比传统的免疫表型分析，它们能更准确地评估CAR-T细胞产品的质量，有助于识别出具有更好治疗潜力的构建体。