改变剪接的TP53错义突变：功能障碍的驱动因素及RNA疗法的靶点

《Stem Cell Research & Therapy》：Splice-altering TP53 missense mutations as drivers of dysfunction and targets for RNA-based therapy

　　

摘要

TP53错义突变会在p53蛋白中引入单个氨基酸的替换，从而导致多种功能上的变化。然而，这类突变在转录后的影响，尤其是对RNA剪接的影响，目前仍研究不足。在本研究中，我们分析了癌症基因组数据库，发现了34种能够生成新成剪接位点的TP53错义及同义突变。通过微基因检测，我们确认了包括c.178 C＞A、c.182 A＞G、c.318 C＞G、c.356 C＞G、c.362 C＞A、c.551 A＞G以及c.922 C＞G在内的几种突变具有改变剪接的潜力。为评估这些剪接变化的生理意义，我们利用细菌人工染色体DNA介导的同源重组技术构建了含有这些突变的TP53敲入细胞模型。由于异常剪接，这些错义突变可能表现为移码突变或功能减弱突变，进而严重破坏TP53 mRNA的完整性。同时，构成性剪接的严重受损表明，这可能与携带移码型早终止密码子的突变衍生替代转录本更容易发生无义介导的mRNA降解有关。通过设计针对新成剪接位点的反义morpholino寡聚物，我们成功恢复了csV1的表达并提升了p53的功能。将部分TP53突变从单纯的错义突变重新分类为干扰剪接的突变，有助于揭示其背后的功能丧失机制，并凸显出这些突变的治疗可逆性。我们的研究为针对TP53突变型癌症的基于RNA的治疗策略提供了新的思路。