分离肝细胞中摄取与代谢活性的时间依赖性下降及低温保存延长其功能稳定性的可行性

《Journal of Pharmaceutical Investigation》：Time-dependent decline of uptake and metabolic activity in isolated hepatocytes and feasibility of hypothermic preservation to extend functional stability

　　

摘要

目的

分离出的肝细胞是用于评估肝脏代谢和摄取功能的常用体外模型。本研究分析了培养过程中这些肝细胞的某些代谢及摄取功能随时间的变化情况，并探讨了在4℃下进行低温保存作为短期储存方法的可行性。

方法

从大鼠体内分离出肝细胞，分别在37℃培养和4℃下保存的情况下检测其功能稳定性。通过测定睾酮、4-甲基伞形酮和丁螺环酮的清除率来评估代谢活性，而摄取活性则通过检测肝脏对Zombie Violet和瑞舒伐他汀的摄取量来衡量。功能稳定性则通过90%功能保持时间（T₉₀）来量化。

结果

在37℃条件下，代谢活性迅速下降，睾酮的T₉₀值为13.2±1.8分钟，4-甲基伞形酮的T₉₀值为9.0±3.0分钟。摄取活性下降更为明显，Zombie Violet的T₉₀仅为3.6±1.8分钟。而在4℃低温保存条件下，这些肝细胞的代谢和摄取功能得以更好维持，睾酮代谢的T₉₀值为7.4±3.6小时，4-甲基伞形酮代谢的T₉₀值为2.5±0.3小时，Zombie Violet摄取的T₉₀值为0.7±0.4小时。丁螺环酮代谢和瑞舒伐他汀摄取的数据进一步证明了短期低温保存的实用性。

结论

在培养过程中，所研究的那些代谢和摄取功能会迅速下降，其中摄取功能的不稳定性更为突出。将肝细胞在4℃下进行低温保存，有望成为一种有效的短期策略，从而延长用于代谢和摄取功能检测的时间窗口。