基于μ-SPE与铵化加合物的MRM技术协同整合，用于PEG1000的高灵敏度UPLC-MS/MS定量分析：与原位CID技术的比较研究及其在斑马鱼组织分布中的应用

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Synergistic integration of μ-SPE and ammoniated adduct-based MRM for sensitive UPLC-MS/MS quantification of PEG1000: a comparative study against in-source CID and application to zebrafish tissue distribution

　　

摘要

本研究建立并验证了一种灵敏的UPLC-MS/MS分析方法，用于测定斑马鱼组织中的聚乙二醇1000（PEG1000）含量。该方法对两种质谱采集策略进行了系统比较。通过全面优化，选择代表性18-EO寡聚体的铵加合物[M+NH₄]⁺（m/z 828.5）作为前体离子，其信号强度约为[M+H]⁺的4倍。重要的是，与传统的高去簇势能原位CID方法监测碎片离子相比，优化的MRM方法监测完整的铵化前体离子，其信号强度提升了2.7倍，且选择性更高。结合微固相萃取（μ-SPE）进一步提升了方法性能，与传统的蛋白质沉淀法相比，信号强度提升了1.5倍，且基质效应显著降低。经过全面验证，该方法的线性范围为0.5–50 μg/mL，相关系数r＞0.995，具备出色的准确性、精密度和稳定性。将该方法应用于斑马鱼组织分布研究后发现，当暴露于200 μg/mL的PEG1000溶液时，不同器官会出现特异性积累现象，肠道组织中的浓度随时间上升，其次是肌肉组织，而肌肉组织中的浓度则始终较低。这一分析平台通过结合μ-SPE净化技术和基于铵化加合物的MRM技术，相较于传统原位CID方法具有更高的灵敏度，为聚合物生物分析提供了实用框架，有助于深入了解基于PEG的化合物在体内的命运。本研究的主要创新点如下：(i)首次对PEG1000定量中的铵化加合物MRM方法与高DP原位CID方法进行了系统比较；(ii)在斑马鱼组织样本制备中引入μ-SPE技术，使信号强度提升1.5倍；(iii)成功应用该平台揭示了PEG1000在器官中的特异性积累规律。

图形摘要