重新审视Eriochrome Cyanine R：一种适用于不同物种、病理状况及疾病模型中中枢与周围神经系统厚切片的标准化髓鞘染色方案

《Brain Structure and Function》：Eriochrome Cyanine R revisited: a standardized myelin stain protocol for thick sections of the central & peripheral nervous system across species, pathologies and disease models

　　

摘要

髓鞘有助于快速传导动作电位并为轴突提供支撑，而其结构受损则是多种神经系统疾病的发生原因。对髓鞘的检测对于研究神经系统的发育、可塑性和修复机制，以及诊断脱髓鞘疾病和评估再髓鞘化疗法具有重要意义。目前有多种组织学方法可用于检测髓鞘，但它们在灵敏度、成本和重复性方面存在差异。其中，花青素R是一种简单且价格低廉的髓鞘染色剂，被广泛用于薄切片染色，但其标准化程度较低，在厚切片中的应用也较少。在此，我们介绍并验证了一种简单、廉价且无需溶剂的EC-R染色方案，该方案可应用于七种脊椎动物的中枢及周围神经系统组织，以及多种脱髓鞘疾病样本。该方法通过固定时间控制的孵育过程替代主观的显微镜鉴别，且可根据切片厚度进行调整，从而提高实验结果的重复性。通过灌注固定和浸渍固定的样本实验，我们发现该方案能够在整个大脑、皮质切片、脊髓及周围神经中实现均匀的髓鞘标记，并呈现清晰的白色脑组织与灰色脑组织对比。用EC-R染色的厚切片能够保留组织的三维结构，清晰显示单个髓鞘化的轴突和皮质内结构，还可与类似尼氏染色的对比剂及免疫组化技术结合使用。新生大鼠的发育系列样本显示出了预期的周围神经系统到中枢神经系统的髓鞘化梯度，而实验性脱髓鞘模型以及犬瘟热和人类多发性硬化症等自然发病病例则证明了该方案能够清晰显示病灶核心、病灶周围的梯度变化，以及相关的胶质细胞和免疫反应。这种标准化的EC-R染色方法为比较神经解剖学、实验性神经病理学以及髓鞘形成、脱髓鞘和再髓鞘化的相关研究提供了强大且多功能的工具，同时也有助于髓鞘相关疾病的临床诊断。