印度南部韦洛尔地区阴道毛滴虫的基因分型

《Immunology Letters》：Genotyping of Trichomonas vaginalis in rural Vellore, South India

　　

Nagarajan Lakshmi Surya|Rani Diana Sahni|Thangamani Suji|Santhosh Rani|Irene Dorathy|Shantidani Minz

印度南部韦洛尔基督教医学院临床微生物学系

摘要

引言

阴道毛滴虫是一种全球范围内普遍存在的性传播原生动物寄生虫，可引发多种临床表现，从无症状感染到有恶臭的阴道分泌物、宫颈炎，甚至增加患宫颈癌的风险。

通过肌动蛋白基因多态性进行分子特征分析，可将阴道毛滴虫分为不同的基因型，从而有助于研究不同基因型与特定临床表现及地理分布之间的关联。然而，目前关于印度地区流行的基因型数据仍较为缺乏。本研究旨在分析印度南部农村地区流行的阴道毛滴虫基因型，并探讨其与相应临床表现的关系。

方法

2020年7月至2021年2月期间，对印度南部韦洛尔农村地区的600名自愿参与的性活跃女性进行了这项横断面研究。使用InPouch? TV培养系统（美国加利福尼亚州圣何塞市Biomed Diagnostics公司）、针对TVK3/7基因的聚合酶链反应以及Seegene Allplex? STI Essential检测方法来分离阴道毛滴虫感染样本。随后通过基于肌动蛋白基因的PCR反应，再结合HindII、MseI和RsaI限制性内切酶进行限制性片段长度多态性分析，以确定基因型。

结果

阴道毛滴虫的感染率为1.5%。共检测出四种不同的基因型，其中G基因型最为常见（n=6；67%），而E、I和N基因型则仅在个别样本中被检测到。G基因型的感染既可见于有症状的女性，也见于无症状女性，而E、I和N基因型则仅从有症状的参与者中分离出来。

结论

这项初步研究在韦洛尔农村地区的女性中发现了四种阴道毛滴虫基因型（G、E、I和N）。据我们所知，这是首份描述印度地区阴道毛滴虫分子基因型的研究。受限于当前研究的条件，尚未发现基因型与临床表现或疾病结局之间存在关联。

引言

阴道毛滴虫是一种带鞭毛的原生动物寄生虫，是导致滴虫病的病原体，而滴虫病是全球范围内最常见且可治愈的性传播感染疾病。高达80%的感染者没有明显症状，这既增加了疾病的传播风险，也导致了该病的漏诊。有症状的感染者通常会出现瘙痒、绿色恶臭的阴道分泌物、宫颈发红和糜烂等症状，这些情况还可能增加患癌症的风险[1]。由于该病临床表现多样，人们对其流行病学特征和遗传多样性产生了极大兴趣。目前，尚不存在一种被广泛认可的用于阴道毛滴虫基因分型的“金标准”方法。为研究其遗传多样性和群体结构，人们采用了多种方法，包括同工酶分析、重复序列杂交、随机扩增多态性DNA分析、限制性片段长度多态性分析、rRNA基因和基因间区域的序列多态性分析、脉冲场凝胶电泳以及抗原特性分析等[2]、[3]。

在这些方法中，Crucitti等人于2008年开发并验证的基于肌动蛋白基因的PCR-RFLP技术，已被成功用于阴道毛滴虫的分子特征分析。该方法可将分离出的菌株分为八种基因型：A、E、G、H、I、M、N和P[3]。来自中东、非洲大陆以及中国的流行病学研究，为了解阴道毛滴虫的流行基因型、地理分布以及基因型与感染表型之间的关系提供了重要依据。本研究旨在明确韦洛尔农村地区的流行基因型，并梳理全球范围内各基因型的分布情况及其与表型之间的关联。

章节节选

方法

这项前瞻性观察性研究在获得机构审查委员会的批准后开展，时间跨度为2019年11月至2021年9月，其中患者招募工作在2020年7月至2021年2月的COVID-19疫情封锁期间进行。根据5%的误差范围和95%的置信水平，以及印度相关研究中估计的1.5%的阴道毛滴虫感染率，计算得出的最小样本量为542例，最终样本量定为600例。

本研究

结果

阴道毛滴虫的感染率为1.5%。对所有9个阴道毛滴虫分离株的肌动蛋白基因进行嵌套PCR扩增后，均检测到了1100碱基对的片段。随后使用Hind II、RsaI和MseI限制性内切酶对这些PCR产物进行消化，结果出现了与先前研究一致[3]的、具有基因型特异性的消化模式，如图1所示。共检测出四种不同的基因型，其中G基因型最为常见（n=6；67%），其他检测到的基因型为E基因型（n=1；11%）。

讨论

阴道毛滴虫拥有庞大的160Mb基因组以及约60,000个蛋白质编码基因，因此具有较高的遗传变异程度。为解释其在致病机制、临床表现和治疗效果方面的差异，人们开展了多项基因分型研究。目前用于阴道毛滴虫基因分型的方法包括限制性片段长度多态性分析、随机扩增多态性DNA分析、单克隆抗体结合分析[6]、核型多态性分析等等。

结论

这项研究为了解印度农村地区这种低感染率区域内的阴道毛滴虫遗传多样性提供了初步信息，同时也凸显了开展更大规模的多中心研究的必要性，这类研究需要整合基因组学、临床学和流行病学数据，以便更深入地了解基因型分布、致病性、治疗反应以及基因型与表型之间的关联。

CRediT作者贡献说明

Rani Diana Sahni：写作——审稿与编辑、研究监督、项目管理、方法设计、正式数据分析、数据整理、概念构建。Nagarajan Lakshmi Surya：写作——初稿撰写、方法设计、资金获取、正式数据分析、数据整理、概念构建。Santhosh Rani：写作——审稿与编辑、数据整理。Thangamani Suji：写作——审稿与编辑、方法设计、数据整理。Shantidani Minz：写作——审稿与编辑、方法设计。Irene Dorathy：写作——

利益冲突声明

作者声明不存在任何利益冲突。

伦理审批与参与同意

该研究已获得韦洛尔基督教医学院机构审查委员会的批准，审批编号为12405，批准日期为2019年12月2日。所有参与本研究的女性都签署了书面知情同意书。

出版同意

无需特殊同意

资金支持信息

本研究由印度韦洛尔基督教医学院的内部研究基金资助。

利益冲突声明

? 作者声明自己不存在任何可能影响本文研究结果的已知财务利益或个人关系。

致谢：

我们感谢印度班加罗尔的3i Molecular Solutions公司的Ajmeer K. Sheriff博士，感谢其对样本在Seegene Allplex? STI Essential检测仪上的检测工作所提供的支持。