一种结合纳米粒子生物传感器的LAMP-CRISPR/Cas12b一锅法，用于淋病奈瑟菌的现场检测

《BMC Microbiology》：One-pot LAMP-CRISPR/Cas12b coupled with nanoparticle-based biosensor for point-of-care test of Neisseria gonorrhoeae

　　

摘要

背景

淋病是由人类专性病原体淋病奈瑟菌引起的疾病，是全球第二常见的细菌性性传播感染。由于目前尚无有效的淋病疫苗，因此准确且便捷地诊断淋病奈瑟菌感染对于有效管理患者以及阻断疾病传播至关重要。

方法

本研究采用了定制设计的基于金纳米粒子的侧流生物传感器（AuNP-LFB）。通过特殊设计的LAMP引物和特定的单引导RNA（sgRNA），靶向淋病奈瑟菌的orf1基因。同时优化了检测的温度和时间等关键条件，并通过78份疑似感染淋病奈瑟菌患者的生殖道分泌物样本，验证了该检测方法的灵敏度和特异性，以及其临床应用可行性。

结果

定制设计的AuNP-LFB成功制备出来。Ng-CRISPR-One-Pot检测方法的检测限低至每检测7个病毒拷贝，且不会与其他检测的微生物发生交叉反应。整个检测流程，包括核酸提取（10分钟）、LAMP-CRISPR/Cas12b检测（56°C，50分钟）以及AuNP-LFB可视化读取（不到2分钟），无需特殊仪器即可在65分钟内完成。与参考用的淋病奈瑟菌qPCR方法相比，该检测方法的灵敏度为100%（95%置信区间：93.94–100.00%），特异性也为100%（95%置信区间：82.35–100.00%）。

结论

总体而言，这些初步结果表明，Ng-CRISPR-One-Pot检测方法有望成为一种实用的即时检测工具，能够准确且便捷地检测淋病奈瑟菌，尤其是在资源有限的地区。