《European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases》：Molecular epidemiology and genotype diversity of Dientamoeba fragilis in a Czech hospital-based cohort: higher prevalence in paediatric patients and evidence of mixed G1/G2 infection in a single patient
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目的本研究旨在调查捷克一家医院队列中Dientamoeba fragilis的患病率、流行病学特征及基因型多样性。方法2022年至2023年间在利贝雷茨地区医院（Regional Hospital Liberec）接受常规寄生虫学诊断的患者组成了主要流行病学队
目的本研究旨在调查捷克一家医院队列中Dientamoeba fragilis的患病率、流行病学特征及基因型多样性。方法2022年至2023年间在利贝雷茨地区医院（Regional Hospital Liberec）接受常规寄生虫学诊断的患者组成了主要流行病学队列。另纳入2022年至2024年间在布拉格布洛夫卡大学医院（University Hospital Bulovka）收集的PCR阳性样本用于分子特征分析。检测采用多重实时PCR（Allplex, Seegene）和常规显微镜检查。基因型通过SSU rRNA基因674 bp片段的Sanger测序鉴定，并使用克隆技术解析单个样本中是否存在多种基因型。结果在流行病学队列中，PCR检测出D. fragilis的个体占25.3%。阳性结果与男性性别和较年轻年龄显著相关，其中5–9岁儿童的患病率最高。与其他肠道寄生虫的共检出很常见，最频繁的是芽囊原虫属（Blastocystis spp.）。腹痛最初与D. fragilis检出相关，但在调整芽囊原虫属（Blastocystis spp.）共检出后，该关联减弱。对87份分离株的分子特征分析显示，基因型G1占绝对优势。在一例患者中，克隆证实了同一宿主体内同时存在基因型G1和G2。结论D. fragilis在这一中欧临床人群中检出率高，尤其在学龄儿童中。分子分析显示单例患者宿主体内存在G1和G2基因型共存，证明了人类D. fragilis分离株中的混合基因型感染和遗传多样性。
**论文解读：Dientamoeba fragilis在捷克医院队列中的分子流行病学与基因型多样性**
**研究背景与问题**
Dientamoeba fragilis（Metamonada: Parabasalia: Dientamoebea）是一种广泛分布于全球的单细胞阿米巴原生生物，定植于人类大肠，其宿主范围还包括多种哺乳动物和鸟类，提示潜在的人畜共患传播途径。尽管该病原体被发现已超过一个世纪，但其传播方式、生命周期及临床意义仍未完全阐明。核心障碍在于缺乏明确的环境耐受性阶段（如包囊），尽管有假说认为其通过蛲虫（Enterobius vermicularis）卵传播，或存在类包囊结构，但均未得到最终证实。D. fragilis在各大洲的检出率差异显著（0.04%–71%），且与年龄、卫生条件及诊断方法相关。其致病性被关联到腹泻、腹痛、恶心、呕吐、胀气、厌食及肛门瘙痒等症状，但多项研究未能建立症状与携带状态之间的一致统计学关联。此外，D. fragilis常与其他肠道原生生物（尤其是芽囊原虫属Blastocystis spp.）共感染，增加了临床解释的复杂性。基于SSU rRNA基因（以及actin和EF-1α基因）序列变异，已描述两种基因型：基因型1（G1）全球占主导，基因型2（G2）罕见。本研究旨在分析捷克一家医院队列中D. fragilis的分子流行病学与基因型多样性，重点探讨年龄、性别、临床症状及共感染模式，并鉴定混合基因型感染。
**主要技术方法**
研究人员从两个医疗机构收集样本：利贝雷茨地区医院（RHL，2022–2023）的常规诊断样本构成流行病学队列（n=166名患者，280份粪便样本），另补充布拉格布洛夫卡大学医院（FHB，2022–2024）的PCR阳性样本（n=82名患者，166份样本）用于分子分型。检测方法包括多重实时PCR（Allplex? GI Parasite Assay, Seegene）和常规显微镜检查（包括直接湿片、卢戈碘染色、改良加藤厚涂片、永久三色染色、漂浮或甲醛-乙醚沉淀浓缩法及肛周胶带试验）。基因型鉴定通过对SSU rRNA基因约674 bp片段进行Sanger测序；对于混合基因型样本，采用克隆技术（pGEM?-T Easy载体转化大肠杆菌）分离单个基因型。系统发育分析采用最大似然法（IQ-TREE），统计模型基于贝叶斯信息准则。流行病学分析限定于RHL队列，使用多变量逻辑回归评估年龄、性别、转诊指征及症状与D. fragilis阳性结果的关联，并调整Blastocystis spp.共检出。
**研究结果**
**研究人群与D. fragilis患病率**：在RHL的166名个体中，多重实时PCR检出D. fragilis的阳性率为25.3%（95% CI 18.9–32.6%），显微镜检查的灵敏度仅为19.0%。PCR与显微镜检出率差异显著（McNemar检验，p<0.001）。
**性别与年龄分布**：男性阳性率（33.8%）高于女性（19.4%），多变量逻辑回归调整年龄和转诊指征后，男性仍与阳性独立相关（aOR 2.60, 95% CI 1.21–5.56; p=0.014）。儿科患者（0–17岁）阳性率（31.0%）高于成人（≥18岁，16.7%）。年龄分层分析显示，0–10岁儿童的阳性优势比显著高于成人（aOR 2.76, 95% CI 1.18–6.42; p=0.019），5–9岁年龄组患病率最高（43.8%），并与阳性独立相关（aOR 2.87, 95% CI 1.26–6.56; p=0.012）。年龄作为连续变量时，显示阳性概率随年龄增加而降低的趋势（OR 0.98, 95% CI 0.96–1.00; p=0.062），未达到统计学显著性。
**转诊指征**：因胃肠道症状转诊的个体阳性率最高（32.7%），而预防性筛查（6.1%）和旅行后检查（7.7%）最低。多变量分析中，预防性筛查的阳性优势比显著低于胃肠道症状组（aOR 0.13, 95% CI 0.03–0.59; p=0.008）。
**胃肠道症状**：腹痛是转诊时最常报告的症状（58.4%）。D. fragilis阳性个体中腹痛报告率（33.0%）高于阴性个体（14.5%），多变量调整年龄组和性别后，腹痛与阳性独立关联（aOR 2.89, 95% CI 1.24–6.72; p=0.014）。然而，进一步调整Blastocystis spp.共检出后，该关联减弱至不显著（aOR 2.17, 95% CI 0.88–5.35; p=0.092）。腹泻和便秘在调整后未显示显著关联。
**寄生虫共检出**：57.1%的D. fragilis阳性个体存在至少一种其他肠道寄生虫共检出，以Blastocystis spp.最常见（40.5%）。Blastocystis spp.共检出与D. fragilis阳性强关联（aOR 10.57, 95% CI 3.92–28.53; p<0.001）。E. vermicularis仅在D. fragilis阳性个体中检出（p<0.001）。
**分子鉴定与系统发育分析**：对87名患者（来自RHL和FHB）的分离株成功测序。86株SSU rRNA基因序列一致，鉴定为基因型1（G1），与参考序列（JQ677147等）同源性99.8–100%。一名患者（L157）的三份独立粪便样本（Ct值约36）直接测序显示混合信号，克隆后分析18个克隆：14个为基因型2（G2），4个为基因型1（G1），证实同一宿主体内G1/G2共存。系统发育树将序列分为两个支持良好的D. fragilis进化枝，分别对应G1和G2。
**讨论与结论**
讨论部分指出，本研究在捷克临床队列中25.3%的D. fragilis检出率与荷兰、丹麦等欧洲国家的分子研究结果相近，但低于某些北欧的43%或高于南欧的9%及澳大利亚的11–12%，提示地理、年龄结构和医疗环境差异是主要异质性来源。年龄是独立流行病学决定因素，0–10岁儿童（尤其5–9岁）阳性率最高，与丹麦、荷兰、意大利等国的年龄分布一致。男性性别与阳性独立相关的发现较为罕见，需进一步研究。显微镜灵敏度低（19%）符合预期，因为未使用SAF固定或TFT方案，形态学识别受限于滋养体分解。多重实时PCR检测灵敏度高，即使Ct值≥35（甚至41）仍可成功测序，但Ct值应谨慎解释为半定量指标，而非直接反映寄生虫负荷。Blastocystis spp.的高共检出率（40.5%）可能与共享粪-口传播途径（如家蝇机械传播）或共同肠道微生态有关。腹痛与D. fragilis阳性之间的原始关联在调整Blastocystis spp.后消失，提示该关联可能受共感染因素混杂，或D. fragilis的致病性需在更广泛的肠道定殖背景下评估。基因型分析再次确认G1全球主导地位，而G2罕见。L157患者中G1/G2混合感染的克隆证据，是D. fragilis混合基因型感染的明确例证，类似于其他肠道原生生物（如Giardia intestinalis和Blastocystis spp.）的混合感染。研究局限性包括：基于转诊人群而非一般人群，症状数据有限，部分效应估计置信区间较宽，分子分型未能覆盖所有PCR阳性样本（124例中成功87例）。
**结论翻译**：总之，D. fragilis在这一捷克医院队列中检出率高，尤其在学龄儿童中。分子特征分析确认成功测序的分离株中基因型G1占主导地位。值得注意的是，克隆揭示了单例患者中G1和G2基因型共存，提供了D. fragilis宿主体内基因型多样性的一个明确例证。
