尼帕病毒检测用双基因等温测定的开发与分析验证

《Applied Microbiology and Biotechnology》：Development and analytical validation of a dual-gene isothermal assay for Nipah virus detection

　　

摘要

尼帕病毒是一种高致病性的动物源病毒，会导致致命的脑炎和严重的呼吸系统疾病，病死率可达75%。由于目前尚无获批的疫苗或治疗方法，快速准确的检测对于控制疫情至关重要。虽然实时逆转录聚合酶链反应仍是金标准，但其对复杂实验室设施的要求使得其在资源有限的现场环境中难以使用。在本研究中，我们开发并验证了一种快速的彩色双靶点逆转录环介导等温扩增检测方法，该方法针对保守的基质基因和核衣壳基因，以提高诊断的可靠性。该检测在62℃下运行40分钟，可给出清晰的视觉颜色结果。共检测了137份样本：包括用于检测限评估的体外转录RNA和组织培养液稀释液、57份非尼帕病毒样本用于交叉反应性评估、10份经过实验加标的阳性临床样本作为替代临床标本，以及50份已确认为尼帕病毒阴性的临床拭子用于初步评估诊断性能。该双靶点检测方法的分析灵敏度为100%（95%置信区间为72.2–100.0），特异性也为100%（95%置信区间为92.9–100.0），与实时逆转录聚合酶链反应的结果完全一致（κ=1.00）。“基质或核衣壳”综合判定规则确保了所有检测的替代阳性临床样本都能被准确识别。这种简单、经济且便携的分子检测工具非常适合在分散式环境中使用，有助于在尼帕病毒流行地区实现早期检测和疫情监测。