《Frontiers in Immunology》：Favorable safety and immunogenicity of a combined quadrivalent influenza and recombinant SARS-CoV-2 vaccine in Sprague-Dawley rats for both primary and booster immunization
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介绍：流感病毒和SARS-CoV-2（严重急性呼吸综合征冠状病毒2型）的同时流行持续给全球公共卫生系统带来压力。疫苗接种仍然是防御的基石，联合疫苗通过简化物流、降低成本和提高覆盖率提供战略优势。方法：在这组研究中，研究人员评估了一种新型联合四价流感疫苗和重组C
介绍：流感病毒和SARS-CoV-2（严重急性呼吸综合征冠状病毒2型）的同时流行持续给全球公共卫生系统带来压力。疫苗接种仍然是防御的基石，联合疫苗通过简化物流、降低成本和提高覆盖率提供战略优势。方法：在这组研究中，研究人员评估了一种新型联合四价流感疫苗和重组COVID-19（新型冠状病毒肺炎）疫苗（由安徽智飞龙科马生物制药有限公司开发），称为Flu-CoV2疫苗，在Sprague-Dawley（SD）大鼠中的安全性和免疫原性。根据ICH S6(R1)指南（生物技术衍生药物临床前安全性评价）进行了三项独立研究：初次免疫（研究1）以及分别在流感（研究2）或COVID-19（研究3）疫苗接种史后的加强免疫。免疫原性通过免疫球蛋白G（IgG）抗体酶联免疫吸附试验、SARS-CoV-2的噬斑减少中和试验和流感病毒的血凝抑制试验测定。结果：在任何研究中均未发生严重、危及生命或致命的不良反应。佐剂组的短暂注射部位结节完全消退，所有疫苗接种后的短暂血液学和生化参数变化在恢复期结束时恢复正常。作为初次免疫方案，Flu-CoV2疫苗有效诱导了针对流感和SARS-CoV-2的强效IgG和中和抗体反应。作为加强免疫，它显著增强了预先免疫模型中的特异性抗体水平，展示了其广泛增强回忆免疫反应的潜力。结论：这些临床前数据表明其良好的安全性和强效免疫原性，支持Flu-CoV2疫苗作为应对流感和COVID-19双重威胁的有前景工具的进一步开发。
**研究背景**
流感和SARS-CoV-2（严重急性呼吸综合征冠状病毒2型）的同时流行持续给全球公共卫生系统带来压力。据世界卫生组织（WHO）估计，每年季节性流感约导致10亿病例，其中300万至500万为重症，29万至65万死亡。COVID-19自2019年底以来已导致全球数亿确诊病例。疫苗接种是减轻这些威胁的最有效策略，但病毒抗原漂移和抗体免疫力下降促使每年需要重新接种，给个人和公共卫生系统带来重复负担。联合疫苗通过整合多种病原体抗原成分，可减少注射次数、降低物流成本、提高覆盖率，并可能引发协同免疫反应。目前全球正利用多种平台（包括mRNA、重组蛋白、病毒样颗粒和纳米颗粒）开发流感-SARS-CoV-2联合疫苗，但尚无获批产品。重组蛋白亚单位疫苗具有稳定性好（2–8°C）、与现有流感疫苗冷链兼容、安全性记录良好的优势。安徽智飞龙科马生物制药有限公司开发了一种联合四价流感疫苗和重组SARS-CoV-2疫苗（称为Flu-CoV2疫苗），该候选疫苗包含四种流感毒株的血凝素（HA）蛋白（H1N1、H3N2、B/Yamagata和B/Victoria）以及SARS-CoV-2的核衣壳蛋白（N）与受体结合域（RBD）融合抗原。研究人员在Sprague-Dawley（SD）大鼠中通过重复肌肉注射评估了该疫苗的安全性和免疫原性，包括初次免疫系列以及流感或SARS-CoV-2预免疫后的加强免疫。该研究发表在《Frontiers in Immunology》上。
**主要技术方法**
研究人员采用以下关键技术方法：疫苗由四价流感灭活疫苗（Flu疫苗，含四种HA各15 μg/0.5 mL）和重组SARS-CoV-2蛋白疫苗（CoV2疫苗，含25 μg NCP-RBD融合蛋白及铝佐剂0.25 mg Al/0.5 mL）以1:1比例混合后注射。使用SD大鼠（7–10周龄，雌雄各半，来自浙江维通利华实验动物技术有限公司）进行三项独立研究，遵循ICH S6(R1)指南。免疫原性通过免疫球蛋白G（IgG）酶联免疫吸附试验（ELISA）、SARS-CoV-2假病毒中和试验（Huh-7细胞，荧光素酶检测）和流感病毒血凝抑制（HAI）试验评估。安全性评估包括临床观察、体重与摄食量、血液学与血清生化分析、器官系数、尿检、尸检及组织病理学（H&E染色）、免疫毒性评估（流式细胞术检测T细胞亚群CD3
+、CD4
+、CD8
+，以及血清IgG和补体C3水平）。统计分析采用单因素方差分析（ANOVA）及LSD或Games-Howell检验。
**研究结果**
**一般观察、体重和摄食**：通过每日观察，含铝佐剂的组（包括佐剂组、CoV2疫苗组和Flu-CoV2疫苗组）均出现注射部位可触及结节，但无死亡或其他临床异常。所有组的体重增长和摄食量均未受不良影响，各组间趋势一致。
**血液学和血清生化**：在研究1（初次免疫）中，Flu-CoV2疫苗组和佐剂组出现中性粒细胞（NEUT）和纤维蛋白原（Fbg）升高。研究2中，Flu疫苗预免疫后接种Flu-CoV2疫苗的组嗜酸性粒细胞（EOS）升高。研究3中，CoV2疫苗预免疫后接种Flu-CoV2疫苗的组白细胞相关参数（NEUT、EOS）升高，并出现短暂凝血异常（凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间和凝血酶时间缩短，Fbg降低）。所有变化在恢复期结束时恢复正常。
**器官系数和尿检**：在所有三项研究中，Flu-CoV2疫苗未对器官重量或器官/体重系数产生不良影响，尿检参数均在正常范围内，表明无肾功能或体内稳态异常。
**尸检和组织病理学**：系统尸检和组织病理学检查显示，所有含佐剂组在注射部位出现亚急性炎症反应，伴巨噬细胞吞噬佐剂灶，引流淋巴结（腹股沟和腘淋巴结）出现反应性增生和吞噬活性增强，恢复期后几乎消退。其他器官偶见微灶性病变，但与疫苗无关。心脏、肝脏和肾脏等关键器官未见疫苗相关病理改变。
**免疫毒性评估**：所有接受Flu-CoV2疫苗的组在末次剂量后血清IgG和补体C3水平显著升高，并持续至恢复期结束。T细胞亚群（CD3
+、CD4
+、CD8
+及CD4
+/CD8
+比值）出现短暂轻微波动，但在2周内恢复至基线水平。免疫器官（脾脏和胸腺）重量和系数无异常变化。
**免疫原性**：作为初次免疫，Flu-CoV2疫苗有效诱导了针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白（NCP）-RBD抗原的强效IgG抗体和假病毒中和抗体，以及针对四种流感毒株（H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata）的强效HAI抗体。在流感疫苗预免疫的大鼠中，Flu-CoV2疫苗加强免疫显著增强了SARS-CoV-2特异性IgG和中和抗体，并显著提升了流感特异性抗体滴度，且SARS-CoV-2成分未干扰流感免疫原性，反而增强。在SARS-CoV-2疫苗预免疫的大鼠中，Flu-CoV2疫苗加强免疫显著提高了SARS-CoV-2结合抗体、假病毒中和抗体和流感HAI抗体水平，且联合疫苗组的抗体反应显著高于单独Flu疫苗加强组。
**讨论与结论**
讨论部分指出，铝佐剂引起的注射部位结节是已知的局部反应，与既往报道一致。免疫毒性评估显示Flu-CoV2疫苗仅引起轻微、可逆的T细胞亚群波动，且无疫苗相关的全身不良反应或免疫器官系数变化，表明其局部反应可接受且对细胞免疫无持久影响。无论既往免疫史如何，联合疫苗未引起额外毒性，支持其作为加强免疫的良好安全性。在免疫原性方面，Flu-CoV2疫苗作为初次免疫可诱导强效体液免疫，作为加强免疫显著增强预先存在的抗体水平，且SARS-CoV-2成分不仅未干扰流感抗原免疫原性，反而增强其效果。与mRNA和灭活病毒联合疫苗相比，该重组蛋白疫苗仅引起短暂、可逆的局部反应和血液学/生化变化，无全身毒性。研究局限性包括研究1缺少单一成分对照组，以及未进行细胞因子/趋化因子分析，未来需纳入更大规模临床研究。
研究结论翻译：研究人员的研究结果提供了强有力的临床前证据，支持该联合流感-SARS-CoV-2疫苗在初次和加强免疫中的安全性和免疫原性。它通过简化、有效且耐受性良好的疫苗接种，为减轻这两种感染带来的公共卫生负担提供了一种有前景的策略。
