一种西番莲提取物对选定的睡眠相关受体发挥多靶点效应

《Journal of Ethnopharmacology》：A Passiflora incarnata extract exerts multi-target effects on selected sleep-related receptors

　　

民族药理学相关性：自古以来，西番莲（Passiflora incarnata L.）被用于治疗失眠、神经紧张、焦虑及其他神经系统疾病，但对潜在神经生理过程的理解主要局限于GABA能系统的参与。研究目的：本研究旨在阐明P. incarnata调节中枢神经系统中选定的睡眠促进受体和神经递质通路的机制。材料与方法：研究人员使用竞争性结合和摄取试验，在体外研究了标准化P. incarnata提取物对选定的睡眠促进受体和神经递质的影响。结果：P. incarnata提取物浓度依赖性地抑制[³H]-DPCPX与腺苷A₁受体、[¹²⁵I]-ZM 241385与腺苷A_2A受体以及[¹²⁵I]-LSD与5-羟色胺5-HT_2A受体的结合，而褪黑素MT₁受体和食欲素OX₁受体不受影响。该提取物还抑制[³H]-多巴胺、[³H]-去甲肾上腺素和[³H]-5-羟色胺进入大鼠皮质突触体的摄取。结论：迄今为止尚未确定的P. incarnata提取物活性成分抑制单胺摄取，并对腺苷A₁、A_2A和5-HT_2A血清素受体显示亲和力。这项探索性研究的结果支持了P. incarnata长期用于促进睡眠的传统用途。

西番莲（Passiflora incarnata L.）在传统医学中被长期用于治疗失眠、焦虑及神经系统疾病，但其作用机制过去主要归因于GABA能系统的激活。然而，睡眠调节涉及多种受体和神经递质通路，包括腺苷（A₁、A_2A）、褪黑素（MT₁、MT₂）、食欲素（OX₁、OX₂）、5-羟色胺（5-HT_2A）以及多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺等单胺类物质。当前问题在于，P. incarnata是否通过影响这些非GABA靶点发挥促睡眠作用尚不清楚。为阐明其多靶点机制，研究人员开展了本研究。

研究人员使用标准化P. incarnata乙醇干提取物（Lioran?的活性成分，源自意大利和法国种植的植物，符合欧洲药典标准），通过体外放射性配体竞争结合实验和突触体摄取实验，系统评估了该提取物对五种睡眠相关受体（腺苷A₁、A_2A、褪黑素MT₁、食欲素OX₁、5-HT_2A）的结合活性以及对三种单胺（多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺）摄取的抑制作用。实验结果表明，提取物浓度依赖性地抑制腺苷A₁、A_2A和5-HT_2A受体结合，并显著抑制单胺摄取，但对褪黑素MT₁和食欲素OX₁受体无生理相关作用。这些发现首次揭示了P. incarnata对腺苷系统和单胺摄取的影响，为其传统促睡眠用途提供了新的分子机制证据，支持其作为多靶点草药产品的应用。该研究论文发表在《Journal of Ethnopharmacology》。

关键技术方法：采用放射性配体竞争结合实验，使用[³H]-DPCPX（腺苷A₁）、[¹²⁵I]-ZM241385（腺苷A_2A）、[¹²⁵I]-LSD（5-HT_2A）、[¹²⁵I]-iodomelatonin（褪黑素MT₁）和[¹²⁵I]-orexin A（食欲素OX₁）作为配体，在表达相应人类受体的细胞膜（购自PerkinElmer和Charles River Laboratories）上进行。单胺摄取实验使用从雄性Sprague Dawley大鼠（8-10周龄，来自认可设施，符合欧盟指令2010/63/EU）皮质制备的突触体，以[³H]-多巴胺、[³H]-去甲肾上腺素和[³H]-5-羟色胺为底物。IC₅₀值通过非线性回归分析（GraphPad Prism）计算，所有实验均采用参考化合物验证。

研究结果：

3.1 验证研究：通过比较参考化合物（DPCPX、ZM241385、碘褪黑素、食欲素A、酮色林、甲基苯丙胺、普罗替林、丙咪嗪）的IC₅₀值与文献数据，确认各实验模型有效，IC₅₀偏差在一个对数单位内，验证了实验方法的可靠性。

3.2 结合实验：P. incarnata提取物浓度依赖性地抑制[³H]-DPCPX与腺苷A₁受体结合（IC₅₀=117 μg/mL）、抑制[¹²⁵I]-ZM241385与腺苷A_2A受体结合（IC₅₀=43 μg/mL）、抑制[¹²⁵I]-LSD与5-HT_2A受体结合（IC₅₀=153 μg/mL）。对褪黑素MT₁受体（IC₅₀≈2630 μg/mL）和食欲素OX₁受体（IC₅₀≈2344 μg/mL）仅在极高浓度时产生抑制，提示在体内无生理相关性。

3.3 摄取实验：提取物抑制[³H]-多巴胺摄取（IC₅₀=107 μg/mL）、[³H]-去甲肾上腺素摄取（IC₅₀=30 μg/mL）和[³H]-5-羟色胺摄取（IC₅₀=28 μg/mL）进入大鼠皮质突触体，呈浓度依赖性。

讨论部分总结：研究人员指出，提取物对腺苷A₁和A_2A受体的拮抗作用可能促进睡眠，这与咖啡因通过阻断腺苷受体增强觉醒的机制相反；对5-HT_2A受体的拮抗作用可增加深度睡眠强度；单胺摄取抑制（尤其是5-羟色胺）可能通过情绪改善间接促进睡眠，与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRI）的次级效应一致。这些结果与既往文献中P. incarnata对GABA和5-HT系统的调节作用相呼应，并扩展了其作用靶点。按照欧洲药品管理局草药产品委员会（EMA HMPC）推荐的每日剂量（1.14-1.6 g干提取物），理论血药浓度可达320 μg/mL，高于多数IC₅₀，支持其传统适应症“缓解轻度精神紧张症状和辅助睡眠”。研究局限性包括样本量小、缺乏化学表征（无法确定具体活性成分）、无药代动力学数据，以及无法完全排除非特异性结合的可能性，但高浓度下MT₁和OX₁受体未受影响表明选择性。

研究结论翻译：迄今为止尚未确定的P. incarnata提取物活性成分抑制单胺摄取，并对腺苷A₁、A_2A和5-HT_2A血清素受体显示亲和力。这项探索性研究的结果支持了P. incarnata长期用于促进睡眠的传统用途。此外，讨论最后强调：标准化干乙醇提取物影响与失眠病理生理相关的机制，这是阐明该草药产品作用机制的第一步，EMA HMPC已接受其传统适应症“缓解轻度精神紧张症状和辅助睡眠”。