在LPS刺激的RAW264.7细胞中，通过蛋白质组学方法鉴定与Gomisin R抗炎作用相关的NF-κB相关靶标

《BMC Complementary Medicine and Therapies》：Proteomic identification of NF-κB-related targets associated with the anti-inflammatory activity of Gomisin R in LPS-stimulated RAW264.7 cells

　　

摘要

背景

Kadsura longipedunculata Finet et Gagnep.属于木兰科越橘属植物。它主要分布于中国的广西、四川、福建和云南等地。作为一种传统中药，常被用于抗炎和镇痛，在民间医学中有着悠久的应用历史。近年来，关于K. longipedunculata Finet et Gagnep.的活性成分及其药理作用的研究受到了广泛关注。许多研究指出，木脂素是其主要的活性成分，其中gomisin类化合物被频繁报道，包括Gomisin A、G、N和M2。我们之前的研究发现，另一种此类化合物Gomisin R能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7单核巨噬细胞中炎症因子的分泌，并降低NF-κB p65蛋白的表达。然而，Gomisin R的抗炎信号通路及作用靶点仍不明确。

目的

探讨Gomisin R的抗炎信号通路及作用靶点，阐明其抗炎分子机制，为药理学研究和临床应用提供实验依据，同时帮助发现新的药物治疗靶点并开发新药物。

方法

实验对象被分为三组：对照组、LPS模型组以及Gomisin R组。通过LPS诱导RAW264.7细胞来建立体外炎症模型。利用数据独立采集（DIA）蛋白质组学测序技术筛选Gomisin R相关的抗炎信号通路及靶蛋白，通过Western blot验证这些靶蛋白，再利用分子对接技术预测Gomisin R与这些靶蛋白的结合活性。

结果

与LPS模型组相比，Gomisin R组细胞成分中有163种差异表达蛋白被鉴定出来，其中90种蛋白表达上升，73种蛋白表达下降。共筛选出四条富集信号通路：NF-κB信号通路、AMPK信号通路、mTOR信号通路以及PI3K-Akt信号通路。经典的炎症通路即为NF-κB信号通路。验证结果显示，Gomisin R主要下调NF-κB信号通路中的4种蛋白：CCL4、PARP1、TNFRSF11A和ERC1，从而发挥抗炎作用，并且与这4种蛋白具有较好的结合活性。

结论

本研究发现了与CCL4、PARP1、TNFRSF11A和ERC1相关的蛋白，这些蛋白可能是Gomisin R发挥抗炎作用的潜在分子靶点。由于这四种蛋白都存在于NF-κB信号通路中，因此推测Gomisin R的抗炎机制可能涉及对NF-κB信号通路的调控，进而降低CCL4、PARP1、TNFRSF11A和ERC1的蛋白水平，从而抑制炎症反应。该研究为将Gomisin R进一步开发成小分子天然抗炎药物提供了参考。