《Histopathology》：Hippo pathway disruption and YAP1 activation in anogenital papillary squamous intraepithelial lesion
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目的：乳头状鳞状上皮内病变（PSIL），亦称乳头状不成熟化生，是一种罕见的肛门生殖器病变，与低危型人乳头瘤病毒（HPV）感染相关。PSIL的分子发病机制尚不清楚。本研究旨在探讨Hippo信号通路共激活因子YAP1（yes-associated protein
目的：乳头状鳞状上皮内病变（PSIL），亦称乳头状不成熟化生，是一种罕见的肛门生殖器病变，与低危型人乳头瘤病毒（HPV）感染相关。PSIL的分子发病机制尚不清楚。本研究旨在探讨Hippo信号通路共激活因子YAP1（yes-associated protein 1）在PSIL中的激活情况，并将其与尖锐湿疣及乳头状高级别鳞状上皮内病变（HSIL）进行比较。方法与结果：研究人员采用针对活化/非磷酸化YAP1（act-YAP1）的抗体，通过免疫组织化学方法评估了36例PSIL、20例尖锐湿疣及2例乳头状HSIL中YAP1的激活状态。研究人员进行了HPV基因分型及显色原位杂交（CISH）以确定HPV状态。78.6%的PSIL中检测到低危型HPV，主要为HPV6。CISH显示PSIL中低危型HPV E6/E7转录本呈弥漫性细点状分布，不同于尖锐湿疣中的大灶性簇状分布，但与HSIL中高危型HPV的分布相似。所有PSIL均表现为非块状p16表达。act-YAP1免疫染色显示86.1%的PSIL中存在YAP1激活（72.2%弥漫，13.9%局灶），其模式类似于乳头状HSIL，但不同于尖锐湿疣（后者仅在基底层和颗粒层显示核act-YAP1）。YAP1激活与HPV状态或p16、p53、Rb1及CK7的免疫表型之间未发现显著关联。结论：PSIL表现出显著的YAP1激活，提示Hippo信号通路破坏可能是PSIL发病的潜在驱动因素。这些发现支持了PSIL独特的分子特征，并为理解这一罕见病变的生物学机制提供了见解。
研究背景方面，乳头状不成熟化生（PIM），亦称不成熟尖锐湿疣，最初被描述为子宫宫颈一种独特的向外生长性病变，是一种罕见的肛门生殖器上皮增生，以乳头状生长、细胞学不成熟、高增殖活性和复发倾向为特征。近期证据表明PIM是一种真正的低危型人乳头瘤病毒（HPV）相关的鳞状上皮内病变，而非化生过程，故提出术语乳头状鳞状上皮内病变（PSIL）以符合LAST指南。尽管其组织病理学呈低级别表现，但PSIL生长迅速，Ki67标记指数高，易被误诊为乳头状高级别鳞状上皮内病变（HSIL），且复发率高（约43%），常在临床被误认为恶性。目前PSIL的分子发病机制很大程度上尚未明确，既往研究表明Hippo信号通路下游效应因子YAP1（yes-associated protein 1）在高危型HPV相关的HSIL和浸润性鳞状细胞癌（SCC）中渐进性激活，而在低级别鳞状上皮内病变（LSIL/CIN1）中基本无活性，但Hippo-YAP1通路破坏是否参与低危型HPV相关的外生性肿瘤发生尚不清楚。为此，研究人员评估了大量PSIL病例中YAP1的激活情况，并与来源于宫颈及非宫颈部位的常规尖锐湿疣和乳头状HSIL进行比较，进一步探讨YAP1激活与HPV基因型及p16、p53、Rb1、CK7和Ki67免疫组化谱的关系，该论文发表在《Histopathology》。
研究人员回顾性检索医院病理数据库，确定肛门生殖器部位的尖锐湿疣、PIM、不成熟尖锐湿疣、PSIL、乳头状HSIL及具乳头状特征的HSIL病例作为研究队列；采用自动化染色平台进行免疫组织化学检测，使用特异性识别非磷酸化YAP1的活化YAP1（act-YAP1）抗体及其他标志物抗体；通过RNAscope显色原位杂交（CISH）检测HPV E6/E7 mRNA，并使用Allplex HPV28检测法和Cobas HPV检测法进行HPV基因分型；采用卡方或Fisher精确检验评估分类变量间关联。
研究结果部分，临床病理特征方面，研究队列包括来自28例患者的36例PSIL（21例原发、8例复发，女性25例、男性3例，年龄27至85岁，平均53岁，多见于宫颈21例，其次阴道6例、肛管6例、子宫内膜2例、外阴1例），均表现为外生性、息肉样或乳头状肿物；20例尖锐湿疣来源于阴道3例、外阴13例、肛门4例，镜下呈宽乳头状结构伴鳞状成熟及明显挖空细胞；2例宫颈HSIL呈乳头状结构伴显著核异型。HPV检测与基因分型方面，20例尖锐湿疣均为低危型HPV阳性、高危型阴性，CISH示表面挖空细胞中大簇状E6/E7转录本；2例乳头状HSIL均为高危型HPV阳性、低危型阴性，CISH示随机细点状信号；PSIL中78.6%（22/28）检出低危型HPV（以HPV6为主），无高危型HPV阳性，21.4%（6/28）两者均阴性，CISH示PSIL全层呈独特细点状低危型HPV E6/E7转录本分布，类似HSIL但不同于尖锐湿疣的簇状模式；额外19例PSIL的Allplex检测示68.4%携带低危、高危或两者兼有HPV，20例宫颈PSIL术前Cobas检测均高危型阴性，CISH确认所有PCR检出的低危型HPV但未检出6例PCR阳性的高危型，且在3例PCR阴性的PSIL中检出低危型E6/E7转录本。尖锐湿疣的p16与act-YAP1免疫组织化学方面，20例尖锐湿疣均无非块状p16染色（6例阴性、14例仅局灶胞质染色），act-YAP1呈限制性染色，仅见于基底层和颗粒层，中间层挖空细胞基本阴性。乳头状HSIL的p16与act-YAP1免疫组织化学方面，2例乳头状HSIL均呈块状p16染色，act-YAP1示显著弥漫性激活。PSIL的p16、p53、Rb1、CK7与Ki67免疫组织化学方面，36例PSIL均无块状p16（17例阴性、11例仅局灶胞质染色）；22例中多数PSIL基底旁基底层野生型p53标记增加，无HSIL的中层基底缺失或null样模式；Rb1较非肿瘤性鳞状上皮升高；CK7 14例阴性、8例局灶阳性，无弥漫性全层表达；Ki67增殖指数20%至75%（平均55%），68%大于50%，主要限于病变上皮下半至三分之二。乳头状鳞状上皮内病变中的YAP1激活方面，36例PSIL中86.1%（31/36）显示YAP1激活，其中72.2%（26/36）弥漫染色、13.9%（5/36）局灶、13.9%（5/36）限制性；弥漫者act-YAP1核标记从基底层延伸至中间及表层。PSIL中YAP1激活与HPV状态及其他生物标志物的相关性方面，低危型HPV阳性PSIL中90%（27/30）见YAP1激活（11.1%局灶、88.9%弥漫），HPV阴性中66.7%（4/6）检出（33.3%局灶、66.7%弥漫），两者无统计学差异（P=0.19）；与p16模式（P=0.96）、p53、Rb1、CK7或Ki67均无显著相关。原发、复发及部位变异PSIL的YAP1激活方面，宫颈21例与非宫颈15例PSIL均一致高表达act-YAP1，弥漫/局灶激活分别占85.7%和86.7%（P=0.98）；8例复发PSIL与原发相比染色模式可比但强度更高。合并HSIL或AIS的PSIL中YAP1激活方面，2例合并病例中PSIL仅检出低危型HPV、HSIL/AIS仅高危型，PSIL为非块状p16而HSIL/AIS为块状；1例肛PSIL与HSIL均示相似强度弥漫性act-YAP1核标记，1例宫颈PSIL-AIS中PSIL呈局灶弱染色、AIS阴性。
讨论部分总结，PSIL是与低危型HPV相关的真性鳞状上皮内病变，生长快、Ki67高、易复发误诊；本研究约79% PSIL含低危型HPV（主为HPV6），CISH示其细点状E6/E7分布不同于尖锐湿疣的大灶簇状，提示病毒转录调控不同；PSIL中野生型p53稳定增加、Rb1升高但无非块状p16，提示pRb-p16通路功能完整且与高危型HPV致p53/pRb失活不同；Hippo通路破坏致YAP1激活在PSIL中达86.1%，呈弥漫核标记从基底至表层，模式似HSIL但不同于尖锐湿疣（仅基底/颗粒层限制激活），提示YAP1激活差异致形态不同——尖锐湿疣有限激活维持分化，PSIL广泛激活致高增殖与分化受损；低危型HPV E6可能通过靶向降解NHERF1（Na+/H+ exchanger regulatory factor 1）而非降解PTPN14致YAP1激活，具体机制待阐；YAP1激活与部位、复发、HPV状态及p16/p53/Rb1/CK7/Ki67无关，是PSIL潜在驱动因素且独立于经典p53/pRb通路，据此提出分层模型：HSIL需YAP1激活+p53/pRb失活；PSIL仅需YAP1激活（p53/pRb完整）致非浸润但高增殖；尖锐湿疣有限YAP1激活保分化；局限性包括未行功能分析、未明低危型HPV是否整合、act-YAP1诊断效用有限但难辨时或有助区分。
研究结论部分翻译：总之，研究人员的研究表明YAP1激活存在于大多数PSIL病变中，且独立于p53或pRb肿瘤抑制因子的经典失活发生。这些结果提示，通过YAP1激活导致的Hippo-YAP1通路破坏可能参与了低危型HPV相关的PSIL的发病机制。对这些机制的深入理解有助于更准确地将其与乳头状HSIL及常规尖锐湿疣进行诊断区分，并最终可能支持探索YAP1作为管理这种罕见但频繁复发的HPV相关病变的治疗靶点。
