达沙替尼改善小鼠免疫检查点抑制剂相关心肌炎

《Letters in Drug Design & Discovery》：Dasatinib ameliorates immune checkpoint inhibitor-associated myocarditis in mice

　　

免疫检查点抑制剂相关心肌炎（immune checkpoint inhibitor-associated myocarditis, ICIM）是肿瘤免疫治疗一种罕见但危及生命的并发症。目前主要基于糖皮质激素的管理策略常受限于疗效欠佳和副作用。本研究在ICIM小鼠模型中探讨了达沙替尼的治疗潜力和作用机制。研究人员通过在雄性A/J小鼠中腹腔注射抗PD-L1和抗CTLA-4抗体建立ICIM模型。治疗组接受达沙替尼（50 mg/kg/d）灌胃给药。通过H&E染色评估心脏组织病理学。通过免疫组织化学评估CD4+和CD8+ T淋巴细胞浸润及IFN-γ和IL-6的表达。进行转录组测序和生物信息学分析以探索涉及的潜在机制。结果显示达沙替尼治疗显著减轻心肌结构破坏和炎性细胞浸润。其显著减少心脏组织中CD4+和CD8+ T细胞浸润并抑制IFN-γ和IL-6的产生。转录组分析揭示达沙替尼逆转了ICI诱导的差异基因表达，在如G2M checkpoint等可能通路中富集。鉴定出Hmmr和Ttk等关键基因作为潜在靶点。结论为达沙替尼通过减轻T淋巴细胞浸润和促炎细胞因子释放保护ICIM，可能通过调节细胞周期相关通路实现。研究结果表明达沙替尼是ICIM一种有前景的老药新用治疗候选药物，值得进一步临床调查。

该研究发表于《Letters in Drug Design 》。免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors, ICIs）通过靶向PD-1、PD-L1和CTLA-4等分子阻断T细胞抑制信号以增强抗肿瘤免疫，彻底改变了多种恶性肿瘤的治疗格局。然而ICIs伴随广泛的免疫相关不良事件（immune-related adverse events, irAEs），其中ICI相关心肌炎（ICIM）虽发生率低约0.04%至1.7%，但死亡率高达40%至60%，联合ICI治疗进一步升高严重度和死亡率。目前ICIM管理主要依赖停用ICI及高剂量糖皮质激素，疗效有限且伴显著不良反应，其他辅助疗法亦存风险，因此亟需识别更安全有效的治疗手段。达沙替尼（dasatinib）为口服多激酶抑制剂，靶向BCR-ABL、SRC家族激酶等，具免疫调节特性如可逆抑制T细胞活性，但其在ICIM中的作用及机制尚未探明。研究人员据此在小鼠模型中探究达沙替尼对ICIM的保护效应及潜在机制。

研究人员为开展研究用到的主要关键技术方法如下。实验采用雄性A/J小鼠构建样本，通过腹腔注射抗PD-L1和抗CTLA-4抗体建立ICIM小鼠模型并设置分组。关键技术包括心脏组织苏木精伊红（haematoxylin and eosin, H&E）染色进行组织病理学评估；免疫组织化学（immunohistochemical, IHC）染色检测CD4⁺和CD8⁺ T细胞及IFN-γ、IL-6表达；转录组测序（RNA-sequencing）结合生物信息学分析进行差异基因表达（differentially expressed genes, DEGs）筛选、蛋白互作（protein-protein interaction, PPI）网络构建及功能富集分析。

研究结果如下。

Dual ICI administration successfully induces myocarditis in mice。研究人员通过双ICI攻击成功诱导小鼠心肌炎，组织病理学检查显示心肌结构严重破坏伴大量淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞浸润，达沙替尼治疗显著减轻上述病理改变并减少炎性细胞浸润。

Dasatinib mitigates myocardial infiltration of T lymphocytes。研究人员通过免疫组织化学评估发现ICIM组心脏组织内CD4⁺和CD8⁺ T细胞数量和染色强度增加，达沙替尼治疗减少了这种增强的T细胞浸润。

Dasatinib suppresses the production of inflammatory cytokines。研究人员通过免疫组织化学分析证实ICIM模型小鼠心脏中IFN-γ和IL-6水平升高，达沙替尼治疗有效抑制了这两种细胞因子的产生。

Potential mechanisms underlying the protective effects of dasatinib。研究人员通过转录组测序比较分析发现ICI处理组与对照组相比有72个上调及57个下调基因，达沙替尼加ICI组相比单用ICI有224个下调及78个上调基因，交集得27个共同差异基因作为达沙替尼在ICIM中潜在关键靶点。PPI网络及功能富集分析显示这些基因主要关联G2M checkpoint、纺锤体等有丝分裂相关通路，研究人员聚焦G2M checkpoint通路中具免疫调节作用的Hmmr、Stil和Ttk基因，提示达沙替尼保护作用可能通过调控这些生物学过程实现。

讨论部分总结如下。研究人员指出ICIM虽罕见但致死率高，现有管理受限。本研究首次通过药理和转录组方法在小鼠模型评估达沙替尼治疗潜力，表明其通过减少CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞心肌浸润及抑制IFN-γ和IL-6产生缓解ICIM。研究人员选用抗PD-L1联合抗CTLA-4及A/J小鼠系因后者对ICIM易感且具MHC四聚体优势，模型病理特征与人类活检一致。达沙替尼效益归因其免疫调节抗炎特性，包括抑制CD4⁺和CD8⁺ T细胞增殖、细胞因子释放及巨噬细胞趋化等。转录组提示G2M checkpoint可能涉及ICIM，达沙替尼下调Hmmr（透明质酸介导的运动受体，参与纺锤体组装、细胞运动及心血管炎症巨噬细胞趋化）和Ttk（双特异性激酶，对染色体排列、中心体复制及T细胞活化增殖至关重要）表达可能是保护机制部分。研究人员也承认局限，如缺乏达沙替尼单独对照组、单剂量无剂量反应、无标准治疗对照、未评估心功能、免疫组化未定量及需明确用药时机以防削弱抗肿瘤免疫等。

结论部分翻译如下。总之，研究表明达沙替尼可能通过减少心肌CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞浸润及抑制IFN-γ和IL-6产生来改善ICIM。这些发现表明达沙替尼很可能被视为管理ICI诱导心功能不全的潜在治疗候选药物。尽管如此，仍需进一步研究阐明潜在分子机制并确立达沙替尼在此背景下的转化潜力。

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