《International Journal of Molecular Sciences》：Modulation of TP53 Expression by Cosmos caudatus (Ulam raja) in OSCC Cell Lines
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口腔鳞状细胞癌（OSCC, oral squamous cell carcinoma）是最常见的头颈部恶性肿瘤之一，现有治疗对生存率改善有限，因此研究者关注具有潜在抗肿瘤活性的天然化合物。Cosmos caudatus（CC，黄花鬼针草，乌兰拉贾）被认为具有抗
口腔鳞状细胞癌（OSCC, oral squamous cell carcinoma）是最常见的头颈部恶性肿瘤之一，现有治疗对生存率改善有限，因此研究者关注具有潜在抗肿瘤活性的天然化合物。Cosmos caudatus（CC，黄花鬼针草，乌兰拉贾）被认为具有抗氧化和抗癌活性，但其对OSCC的作用尚缺乏系统研究。本研究旨在评估CC提取物对OSCC细胞的细胞毒性，并考察其对TP53/p53和CD44表达的影响。
细胞通过免疫细胞化学（ICC, immunocytochemistry）进行表征，并接受不同浓度CC提取物处理（10–80 mg/mL）。研究采用MTT法评估细胞活力，采用逆转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR, reverse transcription quantitative polymerase chain reaction）检测TP53和CD44基因表达，采用酶联免疫吸附测定（ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay）定量p53蛋白水平，并通过ICC观察蛋白定位与表达。结果显示，CC具有显著细胞毒性，IC50为58 mg/mL（p<0.05）。CC处理后，TP53/p53在基因和蛋白水平均显著下调（p<0.05），同时CD44 mRNA升高而蛋白染色减弱。研究者认为，CC可能作为植物来源的辅助治疗候选物，但仍需进一步阐明其机制及临床适用性。
本研究围绕天然植物提取物Cosmos caudatus（CC）对口腔鳞状细胞癌（OSCC）的抑制作用展开，聚焦其对TP53/p53与CD44两条关键分子轴的调控。OSCC占口腔癌的大多数，尽管手术、放疗和化疗等综合治疗不断进步，但总体预后仍不理想，5年生存率仅约50%–60%。其原因与肿瘤局部侵袭强、复发率高、易转移以及治疗毒性和耐药性相关。另一方面，OSCC的分子发生机制复杂，TP53是维持基因组稳定和诱导DNA修复、细胞周期阻滞及凋亡的重要抑癌基因，而p53蛋白被称为“基因组守护者”。OSCC中TP53突变高发，异常p53表达与不良预后和治疗抵抗相关。与此同时，癌症干细胞（CSC, cancer stem cell）在肿瘤异质性、复发和耐药中发挥作用，CD44作为OSCC中研究最广泛的CSC标志物，与肿瘤侵袭、转移及放化疗耐受有关。因此，研究者从“凋亡相关抑癌通路”和“干性相关CSC标志物”双重角度评估CC的作用，具有明确的研究必要性。
研究者首先对CC提取物的营养和植物化学组成进行了分析，结果提示其含有碳水化合物、矿物质、黄酮、槲皮素、多酚以及维生素A、C、E等活性成分，这些成分被认为与抗氧化和抗肿瘤效应相关。随后，研究者使用来源于牙龈上皮癌原发灶切除组织的OSCC细胞系OECM-1（SCC180）开展体外实验，通过MTT法、RT-qPCR、ELISA和ICC系统观察CC的细胞学与分子效应。研究结论提示：CC对OSCC细胞具有抑制增殖作用，并可下调TP53/p53表达，说明其可能干预异常p53相关信号；同时其对CD44呈现“mRNA升高而蛋白下降”的不一致效应，提示可能存在转录后调控或对特定细胞亚群的选择性作用。该研究的意义在于为植物来源辅助治疗OSCC提供了实验依据，也提示CC可能影响肿瘤细胞生存及干性维持相关通路。
主要技术方法包括：商业获得的CC水提物处理OSCC细胞；OECM-1细胞系体外培养；MTT法检测细胞活力；RT-qPCR检测TP53和CD44 mRNA；ELISA测定p53蛋白；ICC观察p53与CD44蛋白表达及定位；并以顺铂作为阳性对照、无血清培养基作为阴性对照。
结果部分首先在“营养成分分析”中显示，CC提取物含有黄酮类、槲皮素和多酚等可能具有生物活性的成分，为后续抗肿瘤效应提供物质基础。其次在“OSCC细胞表征”中，未染色细胞呈多角形至梭形、边界不规则、失去接触抑制；ICC显示细胞膜CD44呈强阳性棕色染色，结合核异型性和高核质比，证实所用细胞具有恶性表型。第三，在“细胞毒性实验（MTT）”中，CC对OSCC细胞呈剂量依赖性抑制，90 mg/mL时细胞活力降至31%，IC50为58 mg/mL；顺铂也表现出剂量依赖性抑制，IC50约46 μM。第四，在“基因表达分析（RT-qPCR）”中，CC和顺铂均显著下调TP53表达；与此同时，两者均使CD44 mRNA表达上调。第五，在“蛋白分析（ELISA）”中，CC显著降低p53蛋白水平，而顺铂则显著升高p53蛋白。第六，在“免疫细胞化学（ICC）”中，CC处理后p53核染色减弱，CD44膜染色也下降；顺铂处理则表现为p53核染色增强，CD44仍以膜阳性为主。以上结果共同提示CC可抑制OSCC细胞活性，并影响p53与CD44相关分子特征。
讨论部分指出，CC的生物学效应可能与其复合营养和植物化学成分有关，其中黄酮、多酚及抗氧化维生素可能通过清除活性氧（ROS, reactive oxygen species）和减轻氧化应激而参与抗肿瘤作用。研究者强调，CC导致的TP53下调可能反映对OSCC中突变p53相关异常信号的抑制，而不一定代表抑癌功能减弱，因为OSCC中TP53突变普遍存在。对于CD44，研究者认为CC引起的mRNA升高但蛋白下降，提示存在转录后调控或选择性清除快速增殖细胞、相对富集CD44阳性亚群的可能。与此同时，本研究未直接进行凋亡检测，因此不能据现有数据确认CC诱导凋亡；MTT仅反映代谢活性，且单一细胞系和粗提物使用也限制了机制解释。研究结论部分指出，CC提取物对OSCC细胞具有显著抗增殖作用，可下调TP53/p53并影响CD44表达，显示其作为OSCC辅助治疗候选物的潜力，但其具体机制、活性成分及临床可行性仍需进一步验证。
