《Clinical Immunology》：Serum soluble CD25, Galectin-9, and CXCL9 as immunological markers differentiating complete remission from refractory acute myeloid leukemia
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摘要背景急性髓系白血病仍是一种侵袭性较强的血液系统恶性肿瘤，其对诱导化疗的反应存在差异。为了能够对治疗反应进行免疫学评估，需要可靠的生物标志物来区分达到完全缓解的患者与疾病难治的患者。目的旨在探讨急性髓系白血病完全缓解患者、疾病难治患者与健康对照组之间血清可溶性CD25、半乳糖凝
摘要
背景
急性髓系白血病仍是一种侵袭性较强的血液系统恶性肿瘤，其对诱导化疗的反应存在差异。为了能够对治疗反应进行免疫学评估，需要可靠的生物标志物来区分达到完全缓解的患者与疾病难治的患者。
目的
旨在探讨急性髓系白血病完全缓解患者、疾病难治患者与健康对照组之间血清可溶性CD25、半乳糖凝集素-9以及CXCL9的水平是否存在差异，并评估这些指标在区分疾病缓解状态与难治状态方面的作用。
方法
在这项单中心病例对照研究中，共纳入155名参与者（50名健康对照组、55名急性髓系白血病完全缓解患者、50名疾病难治的急性髓系白血病患者）。通过夹心ELISA法检测血清中的sCD25、Gal-9和CXCL9水平。组间比较采用Kruskal-Wallis检验，并结合Dunn事后配对对比分析；为校正多重比较效应，使用Benjamini-Hochberg假发现率方法调整p值。通过ROC分析并结合Bootstrap法得出的95%置信区间（1000次重采样）来评估各指标的区分能力，同时使用DeLong检验比较不同指标的AUC值。
结果
与完全缓解组和健康对照组相比，疾病难治患者的血清sCD25和Gal-9水平显著升高（调整后p值均＜0.001），而CXCL9水平在完全缓解组中最高，在疾病难治组中最低（调整后p值＜0.001）。在区分疾病缓解状态与难治状态方面，CXCL9作为单一指标的区分效果最佳（AUC=0.94，95%置信区间：0.90–0.98），其次为sCD25（AUC=0.91，95%置信区间：0.86–0.96），再者为Gal-9（AUC=0.89，95%置信区间：0.83–0.94）。将这三个指标结合使用的逻辑回归模型经交叉验证后，其AUC值为0.96（95%置信区间：0.93–0.99）；不过与单独使用CXCL9相比，这种改善并未达到统计学上的显著意义（DeLong p值=0.31）。
结论
sCD25、Gal-9和CXCL9共同反映了急性髓系白血病中两种相互补充的免疫机制：即免疫激活/耗竭机制（由sCD25和Gal-9体现）以及效应细胞迁移机制（由CXCL9体现），并在该横断面研究群体中能够有效区分疾病缓解状态与难治状态。在这些指标被用于预后判断或临床决策之前，还需要开展前瞻性纵向研究。
临床意义
本研究发现了一组可重复使用的血清生物标志物——sCD25、半乳糖凝集素-9和CXCL9，它们能够反映急性髓系白血病中免疫激活与免疫耗竭之间的动态平衡。通过同时检测这些指标，可以区分完全缓解患者与疾病难治患者，其结果也与治疗反应及残留的免疫功能紊乱状况相关。这些发现表明，这类非侵入性的免疫学检测工具有望帮助早期发现疾病复发、指导治疗监测，并优化急性髓系白血病的风险分层管理。
引言
急性髓系白血病是一种由发生突变的造血干细胞所引发的克隆性疾病。尽管在细胞遗传学和分子特征分析方面已取得一定进展，但该疾病的临床预后依然存在较大差异，尤其是那些疾病难治的患者，其预后更为不良[1]、[2]、[3]。血清中sCD25（可溶性IL-2受体α）水平升高反映了T细胞的慢性激活状态，它会在活化的T细胞上表达的三聚体IL-2受体复合物（CD25/CD122/CD132）被激活后释放出来。在急性髓系白血病中，sCD25水平升高与白血病负荷加重以及更差的预后相关[4]、[5]、[6]、[7]。
急性髓系白血病发生在高度免疫抑制的骨髓微环境中，其中的细胞因子和免疫检查点分子会促使疾病持续存在[8]、[9]。在这一过程中起作用的多种介质中，CXCL9和半乳糖凝集素-9已被认为是调控抗白血病免疫反应的重要因子[10]。CXCL9是一种由干扰素-γ诱导产生的趋化因子，它能招募表达CXCR3的效应T细胞和自然杀伤细胞，从而助力免疫监视功能[11]。在急性髓系白血病中，常常观察到CXCR3表达水平升高，这反映出炎症微环境的存在；然而，由于存在免疫抑制性介质，CXCL9的趋化作用和抗肿瘤作用往往会受到削弱，进而影响效应细胞的招募和活化[12]、[13]、[14]、[15]。半乳糖凝集素-9是一种由白血病原始细胞和基质细胞分泌的β-半乳糖苷结合凝集素[16]、[17]，它能与T细胞和自然杀伤细胞表面的TIM-3受体结合；这种相互作用会促进T细胞耗竭和凋亡，同时抑制细胞的细胞毒性效应表型，进而帮助癌细胞逃避免疫监视并推动疾病进展[18]、[19]。高水平的半乳糖凝集素-9同样与不良预后和治疗抵抗有关。总体而言，CXCL9和半乳糖凝集素-9代表了急性髓系白血病免疫学中的两个对立方面：即趋化因子驱动的免疫激活与检查点介导的免疫抑制，二者都具备作为潜在治疗靶点的价值[20]、[21]。
基于以上原因，本研究开始检测急性髓系白血病患者的血清中可溶性IL-2Rα、半乳糖凝集素-9以及C-X-C结构域趋化因子配体9的水平，这些患者根据是否缓解以及疾病难治程度被分为不同组别，同时还将这些检测结果与健康对照组的结果进行比较。虽然此前已有研究单独探讨过某些生物标志物，但尚无研究在同一研究群体中同时将sCD25、Gal-9和CXCL9作为互补的三大指标进行评估，也尚未有研究在此背景下明确提出“免疫激活/耗竭与效应细胞迁移”这两种相互对立的免疫机制概念。我们推测，急性髓系白血病完全缓解患者、疾病难治患者与健康对照组之间的血清sCD25、Gal-9和CXCL9水平存在显著差异，而这些差异有望在横断面研究中用于区分疾病缓解状态与难治状态。至于这些指标是否真的具有预测未来治疗反应的预后价值，则超出了本项病例对照研究的范畴，需要通过前瞻性纵向研究来进一步验证。
章节要点
材料与方法
图1展示了该研究的具体流程。参与者（健康对照组、急性髓系白血病完全缓解患者、疾病难治的急性髓系白血病患者）首先接受血清采样，随后通过ELISA法检测sCD25、Gal-9和CXCL9的水平，之后再进行统计分析、相关性分析、ROC分析以及聚类分析。
基线特征
本研究共纳入155名参与者，他们被分为三组：50名健康对照组、55名急性髓系白血病完全缓解患者，以及50名疾病难治的急性髓系白血病患者。三组患者的平均年龄存在显著差异（p值＜0.05；见表1）：急性髓系白血病患者年龄大于健康对照组，而急性髓系白血病完全缓解组与疾病难治组之间的年龄差异较小（分别为58±3.5岁和61±2.9岁）。各组的血液学指标也存在非常显著的差异，
讨论
与该疾病已知的流行病学特征一致，本研究群体中也以男性为主[24]、[25]、[26]、[27]。即便在疾病难治组、完全缓解组与健康对照组之间，各组的血液学参数也存在统计学上的显著差异（经Kruskal-Wallis检验并校正假发现率后的P值＜0.001；见表1）。这类差异很可能是由多种因素共同导致的，包括遗传易感性、免疫功能的变化，以及药物治疗方面的差异等。
结论
在这项针对155名参与者的单中心病例对照研究中，急性髓系白血病完全缓解患者、疾病难治的急性髓系白血病患者与健康对照组之间的血清sCD25、半乳糖凝集素-9和CXCL9水平存在显著差异。在疾病难治患者中，sCD25和Gal-9水平升高，这与慢性免疫激活和T细胞耗竭状态相符；而在完全缓解患者中，CXCL9水平较高，这则反映出效应细胞迁移功能仍然保持正常。各个指标都能以较高的准确率区分疾病缓解状态与难治状态，
作者贡献
Abdullah Salim Al-Karawi负责设计研究方案，监督研究的各个环节，并参与数据解读工作；Ali Saad Al-Budairi负责检测血清样本中的免疫学标志物并参与论文修改工作。Ali M. Atoom（通讯作者）协助进行实验室分析，参与数据验证，并为论文撰写提供支持。
CRediT作者贡献说明
Abdullah Salim Al-Karawi：负责文章初稿撰写、项目管理、研究实施以及概念构思工作。Ali Saad Al-Budairi：负责方法设计、正式数据分析以及数据整理工作。Ali M. Atoom：负责文章的审阅与编辑、资金申请以及正式数据分析工作。
Abdullah Salim Al-Karawi|Ali Saad Al-Budairi|Ali M. Atoom
