《Experimental Parasitology》：First identification of Cryptosporidium meleagridis in wild white-eyed parakeet (Psittacara leucophthalmus)
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研究人员调查了来自巴西圣保罗州中东部地区的65只野生白眼鹦哥（Psittacara leucophthalmus）中隐孢子虫属（Cryptosporidium spp.）的遗传多样性。利用18S rRNA基因（18S rRNA）的实时巢式PCR（real-ti
研究人员调查了来自巴西圣保罗州中东部地区的65只野生白眼鹦哥（Psittacara leucophthalmus）中隐孢子虫属（Cryptosporidium spp.）的遗传多样性。利用18S rRNA基因（18S rRNA）的实时巢式PCR（real-time nested PCR）以及肌动蛋白（actin）和热休克蛋白（HSP-70）基因的常规巢式PCR（conventional nested PCR），两个样本为隐孢子虫属阳性，患病率为3.08%（95%置信区间[95% CI]：0.85–10.54%）。然而，通过粪便寄生虫学检查（coproparasitological examination）未观察到该原虫的卵囊（oocysts），也未在任何鸟类中记录到隐孢子虫病（cryptosporidiosis）的典型临床症状。本研究获得的扩增子（amplicons）进行了双向Sanger测序（Sanger sequencing）。在阳性样本中，一个样本提供了足够质量的18S rRNA和HSP70基因序列用于分析，与GenBank（基因库）中提交的火鸡隐孢子虫（Cryptosporidium meleagridis）序列分别表现出100%和99.64%的遗传相似性。使用隐孢子虫属HSP-70基因序列的系统发育分析（phylogenetic analysis）证实，扩增的隐孢子虫序列与C. meleagridis序列密切相关，并聚类在同一分支（clade）。针对寄生虫表面糖蛋白（GP60）基因进行了巢式PCR；然而，未获得足够数量的扩增子，因此无法进行亚基因分型（subgenotyping）。研究人员认为这是首次在与人共栖（synanthropic）的白眼鹦哥（P. leucophthalmus）中报道具有人畜共患潜力（zoonotic potential）的原虫C. meleagridis。
论文解读文章
**研究背景与问题**
隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）是一类广泛寄生于脊椎动物肠道和呼吸道的原虫，目前已有48个种和超过120个基因型被报道，可感染哺乳动物、鸟类、鱼类、爬行类和两栖类。在鸟类中，已描述6个种（包括火鸡隐孢子虫[Cryptosporidium meleagridis]、禽隐孢子虫[Cryptosporidium avium]、贝氏隐孢子虫[Cryptosporidium baileyi]等）和12个基因型。人类感染主要由人隐孢子虫（Cryptosporidium hominis）和微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）引起，约占95%，但C. meleagridis被认为是第三大常见种，与肠炎和死亡相关。在欠发达国家和发展中国家，隐孢子虫病是5岁以下婴幼儿腹泻的四大主要原因之一，可导致生长迟缓、认知障碍和死亡。野生鸟类中隐孢子虫的全球感染率为3.96%（范围0.41%–100%），但白眼鹦哥（Psittacara leucophthalmus）作为南美洲常见的大型群居鹦鹉科鸟类，其与人共栖的习性增加了人畜共患传播风险，然而关于该物种中隐孢子虫的流行率和遗传多样性信息极为匮乏，仅有一例隐孢子虫禽基因型II的报道。因此，本研究旨在调查巴西圣保罗州中东部地区自由生活的白眼鹦哥中隐孢子虫的感染情况及分子特征，以填补该宿主物种的空白。
**研究目的与结论**
研究人员对65只被救援后送往Mata Ciliar Association康复中心的白眼鹦哥进行了粪便样本的分子检测，通过实时巢式PCR和常规巢式PCR扩增18S rRNA、肌动蛋白和热休克蛋白（HSP-70）基因，发现2例阳性（患病率3.08%），其中1例经测序和系统发育分析确认为C. meleagridis。这是全球首次在白眼鹦哥中鉴定出具有人畜共患潜力的C. meleagridis，扩展了该寄生虫的宿主范围，并提示这些共栖鸟类可能成为人类感染来源，构成公共卫生问题。该论文发表在《Experimental Parasitology》。
**关键技术与方法**
研究样本来源于巴西圣保罗州Jundiaí市被环境军事警察救援并送往Mata Ciliar Association康复的65只野生白眼鹦哥（Psittacara leucophthalmus）。主要技术方法包括：粪便样本经蔗糖漂浮法（sucrose flotation）浓缩后提取基因组DNA；采用18S rRNA基因（18S rRNA）的实时巢式PCR（real-time nested PCR）进行初筛，阳性样本进一步用肌动蛋白（actin）和热休克蛋白（HSP-70）基因的常规巢式PCR（conventional nested PCR）扩增，并双向Sanger测序（Sanger sequencing）；基于HSP-70基因序列使用最大似然法（Maximum Likelihood）进行系统发育分析（phylogenetic analysis），以确认物种身份。此外，针对表面糖蛋白（GP60）基因进行巢式PCR尝试亚基因分型，但未获得足够扩增子。
**研究结果**
**分子检测与患病率**：通过18S rRNA基因实时巢式PCR和肌动蛋白及HSP-70基因常规巢式PCR，从65份粪便样本中检出2份阳性，患病率为3.08%（95% CI: 0.85–10.54%）。显微镜检查未见卵囊，所有鸟类未表现隐孢子虫病的临床症状。
**序列分析与物种鉴定**：对阳性样本进行Sanger测序，其中1份样本获得高质量18S rRNA（GenBank登录号PZ013965）和HSP-70（PZ019878）序列。18S rRNA序列与C. meleagridis参考序列（KP730306和EU717830）的相似性为100%，HSP-70序列与参考序列（AF329190和AF402281.1）的相似性为99.64%，并在AF329190序列的第870位点发现一个同义突变（腺嘌呤替换为鸟嘌呤）。
**系统发育分析**：基于HSP-70基因序列构建的最大似然系统发育树显示，本研究获得的序列（PZ019878）与C. meleagridis序列紧密聚类在同一分支，并与C. parvum和C. hominis共享共同祖先，进一步确认了物种身份。
**GP60基因亚基因分型**：尝试对C. meleagridis阳性样本进行GP60基因巢式PCR扩增，但未获得足够数量的扩增子，无法进行亚基因分型，可能由于粪便中卵囊密度较低。
**讨论与结论**
**讨论**：本研究首次在全球范围内于白眼鹦哥中鉴定出C. meleagridis，扩展了该寄生虫的已知宿主范围。C. meleagridis最初在苏格兰火鸡中发现，但多基因座系统发育分析提示其原为哺乳动物寄生虫，后扩展宿主范围。虽然人类感染主要由C. hominis和C. parvum引起，但C. meleagridis是第三大常见种，且已在巴西的家鸡和人类中检出，并在全球多种野生鸟类（如鸡尾鹦鹉、红腿石鸡、太平鸟等）中报道。本研究的感染率（3.08%）与全球野生鸟类平均值（3.96%）相符。尽管未鉴定年龄，但年龄是影响隐孢子虫感染的重要变量。显微镜检查阴性而PCR阳性，可能由于鸟类粪便量小导致卵囊回收率低，且PCR灵敏度更高，能克服形态学方法无法区分种的问题。白眼鹦哥在巴西城市中常见群居，其与人类的密切接触增加了人畜共患传播风险。
**研究结论**：在白眼鹦哥（P. leucophthalmus）中首次检测到C. meleagridis，进一步扩展了该寄生虫的宿主范围，因为人类和多种鸟类已被证实感染该种。白眼鹦哥作为巴西的共栖动物，其角色可能构成公共卫生问题。
