综述：三级淋巴结构内T细胞介导的抗肿瘤免疫机制

《Frontiers in Immunology》：Mechanisms of T cell-mediated antitumor immunity within tertiary lymphoid structures

　　

三级淋巴结构（TLS）是在慢性炎症刺激下形成的异位淋巴样器官，在多种实体瘤中已被认为是良好临床预后和增强免疫治疗反应的指标。T细胞是TLS的重要组成部分，参与其形成、维持和免疫功能。在不同肿瘤类型中，T细胞在数量、表型和空间定位上表现出显著的异质性。滤泡辅助T（Tfh）细胞通过促进B细胞活化、生发中心（GC）发育和抗体产生，在TLS中发挥核心亚群作用。它们已被广泛认为是良好治疗反应和延长生存期的关键预测因子。此外，外周辅助T（Tph）细胞、调节性T（Treg）细胞和滤泡调节性T（Tfr）细胞也在TLS内发挥免疫调节功能。它们的作用可增强或抑制抗肿瘤反应，具体取决于肿瘤类型、TLS空间分布和成熟状态。本综述研究了TLS内T细胞的表型异质性、功能命运和细胞间相互作用，还探讨了TLS的免疫调节作用及其在新型免疫治疗策略中的潜力。进一步的研究应旨在阐明TLS内免疫群体的演化过程并建立标准化模型，以加速其在精准免疫治疗中的临床转化。

1 引言
三级淋巴结构（TLS）是肿瘤微环境（TME）研究的前沿热点，为癌症免疫治疗提供了新的生物学视角和研究策略。TLS是在慢性炎症或抗原刺激条件下在非淋巴器官中形成的淋巴结样结构，在形态和功能上类似于次级淋巴器官（SLOs）。TLS并非像SLOs那样预先存在的组织，而是在病理条件下形成的可诱导免疫聚集体。TLS的研究可追溯至20世纪60年代，最初在类风湿关节炎滑膜中发现淋巴样聚集体，随后在慢性炎症过程中被定义为“三级淋巴器官”或“三级淋巴组织”。2001年，TLS术语正式确立，用于描述具有生发中心（GC）样特征的淋巴簇。近年来，随着癌症免疫研究的深入，TLS与免疫检查点抑制剂（ICIs）疗效的关联在多种肿瘤中得到证实，凸显了其在癌症免疫中的临床意义。结构上，TLS由T细胞、B细胞、树突状细胞（DCs）、高内皮微静脉（HEVs）和成纤维细胞样细胞组成，形成空间上分区的T细胞区和B细胞区。B细胞是TLS的核心成分，尤其在成熟TLS中可经历体细胞高频突变、亲和力成熟、免疫球蛋白类别转换和浆细胞分化，从而介导体液免疫反应。相较于B细胞的免疫原性功能，TLS中的T细胞表现出更复杂的异质性和功能。辅助性T细胞（如Tfh和Tph细胞）可通过促进B细胞反应和生发中心形成增强体液免疫和抗肿瘤活性，而Treg和Tfr细胞则可能通过分泌免疫抑制性细胞因子限制免疫激活。因此，TLS内T细胞的组成和激活状态是决定其免疫功能和治疗结果的关键因素。当前研究表明，TLS的丰度、成熟状态、空间定位和免疫细胞组成共同决定了其在不同癌症类型中的免疫学作用和预后价值。

2 肿瘤相关TLS中T细胞的命运和功能
近年来，多重免疫组化、单细胞RNA测序（scRNA-seq）和空间转录组学的发展使研究人员能够绘制肿瘤相关TLS（TA-TLS）中不同T细胞亚群的图谱。这些T细胞群体在肿瘤及其他疾病如自身免疫病和器官移植中已被广泛报道。值得注意的是，T细胞的存在和浸润水平表现出显著的异质性。在大多数肿瘤类型中，初始CD4⁺或CD8⁺T细胞频率很低，这与TLS作为抗原经历T细胞富集区域的特征一致。而在结直肠癌（CRC）、卵巢癌（OC）和非小细胞肺癌（NSCLC）等实体瘤中，功能性辅助T细胞（包括Tfh和Tph细胞）的富集反映了TLS成熟和功能状态的异质性。此外，Treg和Tfr细胞是免疫抑制性T细胞亚群，常见于TLS中，可通过产生IL-10、IL-35和TGF-β等细胞因子减弱抗肿瘤免疫反应，并与不良预后相关。

2.1 滤泡辅助T细胞
Tfh细胞具有典型的CD4⁺CXCR5⁺PD-1⁺ICOS⁺Bcl6⁺IL-21⁺表型，是TLS中T细胞区的关键组分。Tfh细胞的存在和丰度与TLS成熟状态密切相关，位于滤泡区域外周，是成熟TLS的重要标志之一。未成熟TLS以Tfh细胞缺乏和基质细胞及淋巴细胞为主为特征。这些细胞分泌CXCL13和IL-7等趋化因子，招募淋巴组织诱导（LTi）细胞至肿瘤部位，启动TLS形成的早期阶段。从未成熟向成熟TLS的转变伴随着Tfh细胞的逐渐积累。Tfh细胞的分化由初始CD4⁺T细胞在抗原刺激和共刺激信号（如ICOS/ICOSL、IL-12、IL-23和TGF-β）驱动下完成。通过分泌IL-4和IL-21，Tfh细胞辅助B细胞进行亲和力成熟、GC形成和类别转换。Bcl6通过下调PSGL-1和CCR7、上调CXCR5和PD-1控制Tfh细胞命运，促进其向滤泡区域迁移，并通过CXCL13引导B细胞募集。Tfh细胞与B细胞在TLS中的空间共定位反映了活跃的抗肿瘤免疫和良好的治疗反应。Tfh细胞对B细胞的辅助依赖于多种共刺激通路，包括ICOS-ICOSL、CD40-CD40L和CD30-CD30L。Tfh细胞产生的IL-21对B细胞成熟和抗体亲和力成熟至关重要，同时也能增强CD8⁺T细胞抗肿瘤功能，该机制已在慢性病毒感染模型和人类NSCLC组织中得到证实。此外，Tfh细胞可通过“DC桥”机制在DC、CD4⁺和CD8⁺T细胞空间邻近的条件下辅助CD8⁺T细胞的初始激活。Tfh细胞的命运和功能受PD-1信号调控，持续的PD-1信号会损害Tfh细胞维持和IL-21分泌，而ICIs可能通过阻断PD-1通路增强Tfh介导的B细胞激活和抗体产生。Tfh细胞与耗竭CD8⁺T（Tex）细胞之间的串扰也受到关注。Tex细胞来源的CXCL13招募Tfh和CXCR5⁺B细胞进入TLS，促进其结构成熟；同时Tfh细胞分泌的IL-21抑制Tex细胞的终末耗竭，维持其效应功能。值得注意的是，CXCL13⁺CD8⁺Tex细胞可预测免疫治疗反应，并通过CXCL13轴驱动早期TLS形成，形成正反馈。然而，Tfh细胞在自身免疫和慢性炎症条件下可能通过诱导Treg募集或分化为Tfr细胞发挥免疫抑制作用，突显了分析Tfh功能的必要性。

2.2 T外周辅助细胞
Tph细胞最初在类风湿关节炎中被鉴定为PD-1^highCXCR5^-CD4⁺T细胞，可通过分泌CXCL13招募B细胞并支持体液免疫，尽管缺乏典型的Tfh标志物CXCR5。在风湿性疾病中，Tph细胞数量与疾病活动度呈正相关，提示其在慢性炎症中的致病作用。Tph细胞通常表现为终末分化的效应或记忆表型，具有组织驻留特征，并在炎症环境中持续刺激B细胞。功能上，Tph细胞通过产生IL-21、ICOS、Maf和SLAM家族蛋白支持B细胞反应。与Tfh细胞相比，Tph细胞的Bcl-6表达水平显著降低，Blimp-1表达水平较高，可能限制其在GC中的作用。关于Tph细胞的起源，谱系追踪研究表明Tph细胞与Tfh细胞具有显著的TCR克隆重叠，表明共同克隆起源。Tph细胞可能源于Tfh细胞在特定炎症环境中的表型重塑，Bcl-6/Blimp-1拮抗轴在此转化过程中起核心作用。在炎症细胞因子持续刺激下，一些Tfh细胞可能下调CXCR5并获得迁移至非淋巴组织的能力，转化为Tph细胞。该过程可能使Tph细胞在TLS形成前定植于发炎肿瘤部位，启动B细胞激活和体液反应。Tph细胞最近在卵巢癌、鼻咽癌和乳腺癌中被观察到，通常聚集在肿瘤基质或TLS区域，表达CXCL13，招募CXCR5⁺B和Tfh细胞以促进TLS形成和成熟。较高的Tph浸润与更多的TLS形成、更好的免疫治疗反应和生存结局相关。然而，体外共培养实验显示，Tph细胞可促进记忆B细胞增殖和激活，但无法诱导类别转换或高亲和力抗体产生，而这些特征是Tfh细胞所特有的。因此，Tph细胞被认为是外周组织中具有滤泡样功能的关键CD4⁺T细胞，能够在缺乏淋巴微环境的情况下促进B细胞反应和TLS新生。Tph细胞作为肿瘤微环境中体液免疫的潜在启动子，增强其功能或稳定其表型可能为未来调节TLS形成和改善抗肿瘤免疫反应提供新策略。

2.3 T helper 1/T helper 2/T helper 17细胞
Th细胞是TLS中的关键效应T细胞，在维持局部免疫稳态和驱动抗肿瘤免疫的启动与维持中发挥核心作用。TLS中的Th细胞主要包括Th1、Th2和Th17亚群，在不同免疫反应通路中发挥不同功能。Th细胞通过与DC和B细胞的相互作用被激活并进行谱系极化，依赖于CD40-CD40L等共刺激信号，从而增强B细胞扩增、浆细胞分化和抗体类别转换。Th细胞的分化受TME中多种细胞因子和趋化因子的精细调控：IL-12、IL-18和IFN-γ诱导Th1细胞生成；IL-4和IL-13促进Th2分化；IL-6、TGF-β和IL-23对Th17细胞生成至关重要。这些信号可能来源于局部抗原提呈细胞（APCs）或肿瘤细胞及肿瘤相关基质细胞，反映了TME的深刻影响。在TLS内，各种Th亚群协同调节多层次的免疫反应。Th1细胞通过分泌IFN-γ增强巨噬细胞、DC和细胞毒性T细胞的抗原提呈和杀伤活性，通常与更好的免疫浸润和预后相关。Th2细胞通过释放IL-4、IL-5和IL-13驱动体液免疫，增强B细胞增殖和抗体分泌，但在某些肿瘤类型中可能发挥免疫抑制作用。Th17细胞通过IL-17A、IL-17F和IL-22分泌参与中性粒细胞招募、组织修复和黏膜屏障维持，在肿瘤免疫中表现出复杂的双向作用。IL-17促进成纤维网状细胞（FRCs）增殖和网络稳定性，同时触发CXCL13或CCL19分泌，促进T和B细胞归巢至TLS。在未成熟TLS中，Th17细胞作为LTi细胞参与TLS启动。然而，在食管鳞状细胞癌（ESCC）中，预后良好的患者具有成熟TLS，其特征是高增殖B细胞和CD4⁺T细胞（包括记忆B细胞和Th17细胞）比例高。在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型中，活化的Th17细胞可在TLS区域转化为Tfh细胞。Th17细胞的表型可塑性使其在不同环境中发挥不同生物学作用。此外，Th细胞与Treg细胞的功能状态之间存在动态平衡。Treg细胞分泌IL-10和TGF-β限制过度Th细胞激活，维持免疫耐受并防止组织损伤。Th17和Treg细胞的谱系命运受转录因子RORγt和FOXP3相互调控，该转录调控轴在肿瘤免疫中发挥重要作用，其平衡倾斜可能决定TLS主导炎症还是免疫抑制反应。

2.4 调节性T细胞
Treg细胞是TLS中关键的免疫抑制性CD4⁺T细胞亚群，以高表达CD25和FOXP3为特征。Treg细胞在维持免疫耐受、防止自身免疫和控制炎症反应中发挥核心作用，但在癌症中常与免疫逃逸、抗肿瘤免疫抑制和不良治疗反应相关。FOXP3驱动的Treg分化受IL-2、TGF-β和IL-10等细胞因子调控，这些细胞因子可来源于肿瘤细胞或肿瘤相关免疫细胞。在TLS内，Treg主要位于T细胞区，与APC形成局部免疫调节热点。Treg细胞通过多种机制直接抑制效应T（Teff）和B细胞：首先，通过分泌IL-10、TGF-β和IL-35等抑制性细胞因子广泛抑制T细胞激活、B细胞抗体产生和APC成熟；其次，通过表达CTLA-4、PD-1和LAG-3等免疫检查点分子，与APC竞争结合并限制共刺激信号；第三，通过细胞接触方式下调外周免疫细胞的代谢和功能状态。TA-TLS中Treg的积累与局部免疫抑制和不良预后密切相关。未成熟TLS通常伴随Treg浸润介导免疫抑制效应，而在成熟TLS中，Treg可通过与Tfh和B细胞的直接接触发挥更强大的免疫抑制作用。在肝细胞癌（HCC）中，瘤内TLS常具有富集IL-10和TGF-β的免疫抑制环境，提示Treg可能塑造对免疫治疗无反应的“冷”免疫状态。在乳腺癌、前列腺癌和肺癌中，Treg细胞富集与抗肿瘤治疗抵抗和免疫逃逸反复相关。近期研究表明，Treg可能通过CXCL13-CXCR5信号促进肿瘤进展，CXCL13介导Treg和髓源性抑制细胞（MDSCs）等抑制性细胞招募，诱导IL-10产生并形成免疫抑制反馈，削弱抗肿瘤反应。更重要的是，Treg的免疫抑制效应常抵消CD8⁺T细胞的有益抗肿瘤作用，在NSCLC、CRC和软组织肉瘤（STS）中均有报道。Treg还调节PNAd⁺HEVs的形成，间接影响淋巴细胞（尤其是初始T细胞和记忆T细胞）的归巢和招募，进一步限制免疫动员。值得注意的是，Treg不仅单独发挥抑制作用，还常与调节性B细胞（Bregs）合作维持TLS内的免疫抑制状态。动物实验证实Treg是TLS免疫活性的关键调节因子，在肺癌小鼠模型中，Treg耗竭缓解了局部免疫抑制，增强了TA-TLS中CD8⁺T细胞和Th1细胞的活性，为靶向Treg激活TLS功能提供了有力依据。

2.5 滤泡调节性T细胞
Tfr细胞是调节性T细胞的一个特殊亚群，在调节GC活性以及塑造体液免疫的强度和特异性中发挥关键作用。Tfr细胞独特表达FOXP3、BCL6、CXCR5、CD25和GARP，使其能够响应CXCL13迁移至滤泡区域。Tfr细胞调节Tfh细胞与B细胞之间的相互作用，在GC内与Tfh细胞竞争细胞因子IL-21，从而限制Tfh细胞的存活及其辅助B细胞的能力。TCR测序分析显示Tfr细胞与经典Treg共享发育谱系，提示Tfr可能来源于胸腺或外周诱导的Treg。功能上，Tfr细胞保留Tfh细胞的某些特征（如GC趋向性和有限的IL-21表达），同时在免疫抑制分子（如CTLA-4和GARP）表达上与Treg高度重叠。Tfr细胞主要局限于具有发达GC的成熟TLS，其招募依赖于CXCR5和CXCL13。在缺乏GC的未成熟TLS中，Tfr细胞很少被检测到，突出了其作为GC调节因子的专业角色。Tfr细胞通过多种机制精细调节体液免疫：限制Tfh激活和克隆扩增；约束B细胞体细胞高频突变和抗体类别转换；防止自身反应性B细胞克隆的产生和扩增；调节GC反应的时间和范围以防止过度免疫病理。Tfr细胞的分化机制与Tfh细胞密切相关，两者均依赖CD28和ICOS等共刺激信号激活BCL6表达，实现滤泡定位和功能成熟。然而，Tfr细胞必须维持FOXP3表达和适度的BCL6表达，这种平衡被认为是Treg和Tfh细胞的关键。研究表明，在特定条件下，记忆Tfh细胞可在IL-2、STAT3和STAT5信号通路共同激活后转化为功能性Tfr细胞，该过程呈IL-2剂量依赖性。Tfr细胞高表达免疫检查点分子CTLA-4，其免疫调节功能可能对免疫治疗产生重要影响。一方面，Tfr细胞通过CTLA-4阻断DC表面CD80/CD86的共刺激信号，限制T细胞激活，削弱ICIs治疗效果；另一方面，Tfr细胞对单独PD-1阻断的反应有限，但在PD-1抑制前联合或序贯使用抗CTLA-4治疗可增强免疫活性，提示Tfr可能通过CTLA-4主导的负调控通路限制抗PD-1治疗的治疗窗口。Tfr细胞也可能参与TLS的早期免疫组织和稳态调节，在原发干燥综合征（pSS）患者中，Tfr/Tfh比例升高与唾液腺TLS形成密切相关，提示Tfr细胞在精细调节TLS发育中的作用。在乳腺癌中，Tfr细胞通过GARP依赖的TGF-β信号机制抑制IL-21和IFN-γ产生，从而抑制B细胞激活和抗体产生。Tfh/Tfr比率在塑造TLS功能中起关键作用，Tfh主导的TLS显示促炎特征，而Tfr主导的TLS呈现免疫抑制表型。在微浸润肺腺癌（LUAD）中，滤泡定位的Tfr细胞富集与低CD8⁺T细胞浸润相关，提示其可能损害T细胞介导的抗肿瘤免疫。在肝内胆管癌中，瘤周TLS中Tfr细胞积累与较差预后强烈相关。

2.6 记忆T细胞
在TME中，记忆T细胞（特别是CD8⁺亚群）是维持抗肿瘤免疫反应的核心效应细胞，在早期免疫监视和持久抗肿瘤反应中发挥作用。TLS提供了一个专门的微环境，维持记忆T细胞的激活、分化和持久功能。在TLS内，DC通过抗原提呈和分泌IL-12、IL-15等细胞因子，引导初始T细胞向中央记忆T（Tcm）细胞和效应记忆T（Tem）细胞分化。Tcm细胞以其归巢能力和长期存活能力为特征，在HCC等肿瘤的早期TLS中富集，支持其参与长期抗肿瘤记忆。组织驻留记忆T（Trm）细胞，特别是CD103⁺CD8⁺Trm细胞，与多种实体瘤（包括肺癌、黑色素瘤、膀胱癌和卵巢癌）的改善预后相关。Trm细胞通常局部驻留在肿瘤中，具有增强的杀伤能力和快速响应局部抗原暴露的能力。值得注意的是，Trm细胞分泌CXCL13，招募B细胞并促进TLS形成和稳定，连接适应性免疫与TLS构建。尽管Trm细胞常表达PD-1、TIM-3和CD39等耗竭标志物，但累积研究表明这些标志物并不意味着完全功能丧失。在NSCLC中，高表达CXCL13和CD39的Trm细胞亚群仍保持强效效应功能，其浸润密度强烈预测延长的无复发生存期。TLS中的记忆T细胞在自身免疫性疾病中表现出独特作用，在慢性天疱疮中，scRNA-seq和空间蛋白质组学鉴定出TLS中富集的CXCL13⁺CD4⁺记忆T细胞，促进B细胞聚集、TLS维持和自身抗体产生。然而，记忆T细胞在TLS中的功能并不总是有利于抗肿瘤反应，在HPV阳性喉咽癌中，CD161⁺CD8⁺Trm细胞在TLS中积累但缺乏与B细胞的有效相互作用，导致未成熟、受抑制的TLS。记忆T细胞在肿瘤免疫治疗中也显示出重要响应性，例如恶性胸膜间皮瘤的II期临床试验显示，联合PD-L1和CTLA-4阻断有效激活了CD57⁺记忆T细胞，这些细胞在TLS中富集并与改善的总生存期和免疫反应相关。

2.7 细胞毒性T细胞
CD8⁺T细胞是肿瘤免疫中的主要效应细胞，具有强大的细胞毒性活性，可识别并清除表达MHC-I的肿瘤细胞。TLS中的髓样树突状细胞（mDCs）通过抗原提呈和CD80/CD86等共刺激信号激活CD8⁺T细胞，促使其分化为Th1样和细胞毒性表型。值得注意的是，TCF1⁺CD8⁺T细胞在新生的TLS中富集，它们不仅支持TLS发育，还呈现干细胞样状态。机制上，TLS微环境通过CXCL13-CXCR5介导的滞留以及B细胞和MHCII⁺APC的共刺激信号维持这一干细胞样池。在黑色素瘤和泌尿生殖系统癌症中，TCF1⁺CD8⁺T细胞常与B细胞或MHCII⁺APC共定位于TLS，这与更好的治疗反应和生存期相关。转录上，TCF1-BATF-IRF4轴维持前体状态并防止终末耗竭，而局部微环境提供IL-15和Tfh来源的IL-21以支持存活并抵抗耗竭。成熟TLS含有更高频率的ICI敏感的TCF1⁺PD-1⁺CD8⁺T细胞，相对于终末耗竭的TIM-3⁺PD-1⁺细胞，因此有利于对免疫检查点阻断的良好反应。进一步研究表明，TME中的CD8⁺T细胞不仅执行细胞毒性功能，还可能通过分泌CXCL13招募B细胞促进TLS形成和成熟。TGF-β可上调CD8⁺T细胞中CXCL13的表达，使其表现出类似Tfh细胞的功能特征并参与体液免疫。在结直肠癌和卵巢癌中，一些CD8⁺T细胞分化为表达CXCR5和CD40L的滤泡样细胞毒性T（Tfc）细胞，从而辅助B细胞激活并增强抗体反应。然而，CD8⁺T细胞在TLS中的功能也受到多种免疫抑制信号的限制，Treg细胞及其分泌的TGF-β可诱导CTL功能障碍并削弱其效应能力。在癌症治疗中，CD8⁺T细胞的激活状态与治疗反应密切相关，例如吉西他滨-顺铂（GP）治疗通过激活STING介导的I型干扰素信号通路上调肿瘤细胞MHC-I表达，促进TLS中CD8⁺CTL大量扩增，改善鼻咽癌的抗肿瘤反应和预后。

3 TLS与T细胞在肿瘤免疫中的协同作用
TA-TLS与肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）在调节抗肿瘤免疫中密切协作，已成为近年研究热点。TLS不仅是TME中的异位免疫激活中心，也是T细胞分化、激活、迁移和持续应答的重要场所。大量研究表明，TLS中不同的T细胞亚型可能促进或抑制肿瘤免疫，T细胞的丰度、组成和激活状态与肿瘤类型、免疫治疗反应和临床预后密切相关。因此，TLS和T细胞群体的功能状态日益被视为多种癌症临床结局的潜在预测因子。

3.1 临床预后生物标志物
TLS的作用在不同疾病状态下存在差异，其对预后的影响具有疾病特异性。乳腺癌中TLS的存在与较低的肿瘤侵袭性和转移能力密切相关。TLS中T细胞和B细胞组成和特征的差异也影响患者治疗反应和生存预后。Tfh细胞作为TLS内的核心调节细胞，在多种癌症（包括乳腺癌、CRC、NSCLC、HNSCC、黑色素瘤和ccRCC）中与临床获益呈正相关。当Tfh细胞与B细胞在TA-TLS中形成空间共定位时，这种良性预后关联尤为突出。Tfh细胞分泌的CXCL13和IL-21不仅介导B细胞激活和GC发育，还与良好临床结局相关，成为CRC中的潜在生物标志物。Trm细胞主要适用于肺癌、黑色素瘤和膀胱癌的复发风险评估，其浸润密度与无复发生存期显著相关。免疫抑制性标志物呈现更复杂的预后意义，Treg浸润在肝癌、肺癌和乳腺癌中与不良预后相关，可作为免疫冷肿瘤的标志物。Tfr/Tfh比率更精确地反映了TLS内的免疫平衡，高比率与乳腺癌、肺腺癌和胆管癌中的免疫抑制性TLS和不良预后相关。

3.2 治疗反应预测价值
TLS与多种实体瘤（包括黑色素瘤、ccRCC和HNSCC）的免疫治疗反应性密切相关。TLS的存在通常预示对ICIs更好的治疗反应。乳腺癌新辅助治疗研究进一步表明，TLS及其生物学特征（如Tfh细胞遗传特征、CXCL13表达水平和T或B细胞高密度浸润）预测更高的病理完全缓解（pCR）率和改善预后。此外，一些研究将TLS与免疫相关不良事件（irAEs）风险增加联系起来，提示TLS在免疫治疗中的潜在双重作用。在进展期STS中，基线TLS富集的患者对PD-1阻断的反应显著更好，生存期更长，支持TLS作为预测性生物标志物指导患者分层。在T细胞水平，特定Trm细胞亚群（如CXCL13⁺CD103⁺CD8⁺TRMs）在TLS丰富区域高度活跃，被认为是ICIs效果的潜在预测因子。近期研究指出，T细胞耗竭并非单一的功能耗竭状态，而是免疫激活的前体状态，PD-1⁺CXCL13⁺耗竭T细胞与TLS之间可能在空间和功能层面形成正反馈网络，共同参与瘤内免疫微环境重塑和免疫激活。在结直肠肿瘤中，CD8⁺CXCR5⁺Tfc细胞与检查点分子水平升高和ICIs反应性增加密切相关，成为有前景的免疫预测标志物。

4 结论与展望
作为肿瘤中具有组织化淋巴细胞聚集特征的微环境结构单元，TLS已在多种恶性肿瘤中被广泛观察到。随着对TME认识的深入，TLS日益被视为一种新型特异性生物标志物，不仅在预后评估中表现出重要价值，在免疫治疗反应预测中也具有显著意义。因此，TLS有望成为下一代免疫治疗策略的关键组成部分，为提高治疗精准性和反应率提供新见解。未来TLS研究主要聚焦于两个科学挑战。

4.1 TLS内组成和功能的全面解析
尽管大量证据表明TLS通常与良好的免疫反应和治疗结局相关，但其生物学作用在不同肿瘤类型中存在显著差异。瘤内和瘤周TLS在结构组成和免疫功能上可能有实质性差异。一些研究甚至表明，在特定背景下TLS的存在可能与肿瘤进展相关。这种“悖论”现象可能主要源于TLS内免疫细胞群体的高度异质性。近年来，越来越多的证据强调了TLS中T细胞的表型、命运和空间分布对其免疫功能的决定性作用。除了经典活化的CD8⁺细胞毒性T淋巴细胞和Tfh细胞，TLS还可能包含多种新型或“非经典”T细胞亚群，包括应激反应T细胞（Tstr）、耐受性CD8⁺T细胞和“旁观者”T细胞，每种具有独特的激活谱、抗原特异性和功能潜力。此外，DC与初始CD4⁺/CD8⁺T细胞在TLS内的空间耦合关系和功能协调仍未被充分理解。为了解析这些复杂的细胞网络和功能状态，未来研究应依赖于高维空间生物学技术，如多重免疫荧光和CODEX空间转录组学，从时间和空间两个维度揭示TLS中细胞间相互作用的动态过程。

4.2 靶向TLS诱导的治疗策略
诱导TLS形成以增强局部免疫激活已成为癌症免疫治疗的重要研究方向。特别是对于以强免疫抑制为特征的“冷肿瘤”，TLS诱导可能是将其转化为“热肿瘤”的关键。目前已探索了多种治疗性诱导TLS的策略，包括疫苗、ICIs、局部细胞因子递送和基于生物材料的组织工程。在组织工程策略方面，研究人员利用生物材料支架和水凝胶在体外构建TLS，负载肿瘤相关抗原（TAA）后植入体内以触发免疫反应。初步研究表明，TLS样结构可诱导DC激活和T、B细胞招募，但临床验证有限，其广泛应用仍面临技术障碍和免疫安全性评估不足的问题。当前研究进展也暴露了该领域的几个关键瓶颈。首先，缺乏成熟、稳定、可重复的TLS小鼠模型阻碍了TLS诱导策略的标准化验证并限制了其临床转化。当前的诱导方法常存在TLS成熟度不足或结构异质性高的问题，亟需进一步优化动物模型和生物材料平台以更真实地模拟人类TME中的TLS构建过程。另一个关键挑战在于管理免疫干预的不良反应。鉴于TLS与T细胞激活密切相关，过度的TLS形成或激活可能破坏免疫稳态并导致自身免疫疾病或irAEs。研究表明，PD-1抑制增强Tfh细胞活性可能增加自身免疫反应风险。因此，如何在加强