斯洛伐克产食动物中戊型肝炎病毒的检测与分子特征描述

《Folia Microbiologica》：Detection and molecular characterization of hepatitis E virus in food-producing animals in Slovakia

　　

戊型肝炎病毒（HEV）是发达国家日益关注的公共卫生问题，大多数感染与食源性传播的人畜共患基因型HEV-3有关。随着斯洛伐克人类戊型肝炎病例数量的增加，了解产食动物群体中的情况变得愈发重要。研究人员对来自四种不同产食动物（猪、牛、绵羊和山羊）的290份样本（采集于2023年3月至2025年8月）进行了HEV RNA检测。通过实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR），在来自同一农场的120份育肥猪粪便样本中，有5份（4.2%）确认存在HEV RNA。HEV RNA的流行率相对低于先前的研究结果，这可能反映了采样策略的局限性。对所选开放阅读框1（ORF1）和开放阅读框2（ORF2）序列的系统发育分析显示，它们聚在基因型HEV-3f（HEV-3组1）内。该基因型在斯洛伐克猪群中的存在支持了人畜共患传播的可能性，因为该基因型最常出现在斯洛伐克感染严重的人类患者中。尽管HEV在斯洛伐克猪群中循环（n=5/120），但研究人员未在牛、绵羊或山羊中检测到HEV RNA（n=0/170）。研究期间，斯洛伐克产食反刍动物中未检出HEV RNA，这表明这些物种可能不是HEV的主要储库，而猪才是。持续的研究对于追踪HEV在储库间的循环至关重要。

**论文解读：斯洛伐克产食动物中戊型肝炎病毒的流行与分子特征**

**研究背景与问题**
戊型肝炎病毒（HEV）是发达国家日益严峻的公共卫生威胁，其感染多与食源性传播的人畜共患基因型HEV-3相关。在斯洛伐克，人类戊型肝炎病例数逐年上升，但对该国产食动物群体中HEV的流行状况及基因型分布缺乏系统认知。尽管猪已被公认为HEV-3的主要储库，但牛、绵羊、山羊等反刍动物在HEV传播中的作用尚不明确，尤其是在斯洛伐克，这些动物的肉类和乳制品消费普遍，但相关流行病学数据空白。因此，开展本研究以明确斯洛伐克多种产食动物（猪、牛、绵羊、山羊）中HEV的流行率、基因型特征及其潜在的人畜共患风险。该论文发表在《Folia Microbiologica》。

**主要关键技术方法**
本研究基于2023年3月至2025年8月从斯洛伐克21个农场采集的290份粪便样本（猪120份、牛100份、绵羊40份、山羊30份），采用实时RT-PCR（针对ORF3区域）进行HEV RNA筛查，阳性样本进一步通过巢式PCR扩增ORF1（242 bp）和ORF2（304 bp）片段，经Sanger测序后，利用最大似然法（Tamura-Nei模型，Gamma分布及不变位点，bootstrap 1000次）构建系统发育树，以确定基因型与亚型。内参基因β-肌动蛋白（ACTB）用于消除假阴性，阳性对照为已知序列的HEV RNA样本。

**研究结果**

**HEV RNA检测结果**
实时RT-PCR结果显示，猪粪便样本中HEV RNA阳性率为4.2%（5/120，95%置信区间1.8–9.4%），循环阈值（Ct值）范围为26.6–34.2。所有阳性样本均来自斯洛伐克西部同一农场，且均为育肥期猪（即达到市场屠宰体重的最后一阶段）。170份牛、绵羊和山羊粪便样本均未检出HEV RNA。该结果表明，斯洛伐克猪群中存在HEV循环，但流行率低于欧洲多国（如法国8.4%、西班牙11.5%、意大利14.5%等），可能与采样数量、动物年龄、季节及检测方法差异有关。

**基因型与系统发育分析**
对3份阳性猪样本（其余2份因PCR产物质量低未成功测序）的ORF1和ORF2序列进行系统发育分析，结果显示所有序列均属于基因型HEV-3组1，亚型HEV-3f，彼此间核苷酸同源性（nt.id.）为100.0%，与HEV-3f参考株E116YKH98C（GenBank登录号AB369687）的nt.id.为85.5%（ORF1）和85.2%（ORF2）。与GenBank数据库比对，ORF1序列与匈牙利、德国的人类HEV株及意大利的猪HEV株最接近（93.4–98.8% nt.id.），ORF2序列与匈牙利的人类HEV株及波兰、瑞典的猪HEV株最接近（92.8–99.0% nt.id.）。与斯洛伐克既往报道的HEV序列相比，本研究序列与人类HEV株（GenBank登录号PQ283546、PQ283550）的nt.id.最高（ORF1为92.6%，ORF2为86.5%）。这是斯洛伐克猪群中首次检出HEV-3f亚型，该亚型正是斯洛伐克人类重症患者中最常见的基因型。

**反刍动物阴性结果**
170份反刍动物（牛、绵羊、山羊）粪便样本均未检出HEV RNA，与欧洲多国（匈牙利、克罗地亚、德国等）在牛中的阴性结果一致，但与中国、韩国、巴西等国的阳性报道不同。本研究结果表明，在斯洛伐克研究期间，产食反刍动物可能不是HEV的主要储库，其传播风险有限，但需考虑样本量、农场分布及检测方法的局限性。

**讨论与结论**
讨论部分指出，猪群中HEV流行率较低可能与采样策略（仅采集粪便而非血清或肝脏）、动物年龄（育肥期猪易感）及单一农场阳性有关。所有阳性猪均来自同一农场，提示农场内部管理及生物安全措施可能影响病毒传播。系统发育分析证实，猪源HEV-3f序列与斯洛伐克人类患者序列高度同源，支持了猪作为人畜共患传播源的可能性，增加了受感染猪到达屠宰场后其肉制品成为人类感染源的风险。反刍动物中未检出HEV，表明这些物种在斯洛伐克可能仅为偶然性溢出宿主，对公共卫生的直接威胁较小，但需扩大监测范围以确认。

**结论**：本研究证实了斯洛伐克产食动物中存在人畜共患基因型HEV-3，尤其育肥期猪的感染提示食品安全风险；猪源与人类HEV序列的高度相似性进一步支持了动物源性传播。研究期间未在反刍动物中检出HEV RNA，表明其作为储库的重要性较低。未来需开展更全面的流行病学调查，以持续追踪HEV在储库间的循环动态。