《Journal of Translational Autoimmunity》：Anti-C2–Mediated Complement Inhibition Prevents Disease in a Rat Passive Transfer Model of Myasthenia Gravis
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乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力（AChR-MG）是一种罕见的自身免疫性疾病，其中AChR自身抗体触发补体激活并导致神经肌肉接头损伤。本研究评估了抗C2抗体在大鼠重症肌无力被动转移模型（PTMG）中的治疗潜力。雌性Lewis大鼠（n=36）在皮下注射mAb35（
乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力（AChR-MG）是一种罕见的自身免疫性疾病，其中AChR自身抗体触发补体激活并导致神经肌肉接头损伤。本研究评估了抗C2抗体在大鼠重症肌无力被动转移模型（PTMG）中的治疗潜力。雌性Lewis大鼠（n=36）在皮下注射mAb35（PTMG）或生理盐水（非MG）前两小时，预防性接受抗大鼠C2抗体或IgG同种型对照处理。研究过程中在多个时间点收集血清样本，并每日评估肌肉无力、体重和临床表现。研究人员在安乐死前进行肌电图检查。通过放射免疫测定法测定胫骨前肌中的AChR含量。抗C2抗体处理动物的体重、握力和肌肉AChR含量（功能性和总AChR）维持在非MG动物相当的水平。血清分析证实，在实验过程中抗C2处理动物的补体活性降低。这些发现表明，抗C2治疗在该模型中有效预防疾病发展，支持其作为管理AChR-MG治疗策略的潜力。
重症肌无力（MG）是一种自身免疫性神经肌肉疾病，其中乙酰胆碱受体抗体（AChR抗体）阳性重症肌无力（AChR-MG）是最常见的类型。AChR自身抗体（主要为IgG1和IgG3亚型）与神经肌肉接头（NMJ）的AChR结合，激活经典补体途径，导致膜攻击复合物（MAC）形成，引起AChR丢失和突触后膜损伤，从而产生肌无力症状。目前临床已批准补体蛋白成分5（C5）抑制剂（如依库珠单抗、ravulizumab、zilucoplan）用于治疗AChR-MG，但这些药物仅阻断MAC形成，不抑制C3b沉积，仍可促进免疫细胞激活，且存在疗效不完全的局限性。因此，开发更上游的补体抑制策略具有重要价值。补体成分2（C2）位于经典和凝集素途径的关键交汇点，是目前尚未被充分开发的靶点。此前已有研究通过siRNA沉默C2 mRNA在慢性MG小鼠模型中显示疗效，但尚无抗C2药物进入MG临床试验。本研究旨在评估一种高亲和力抗大鼠C2单克隆抗体在大鼠MG被动转移模型（PTMG）中的预防性疗效，为C2抑制作为AChR-MG治疗策略提供概念验证。该研究由Mario Losen等研究人员在Maastricht University进行，论文发表在《Journal of Translational Autoimmunity》。
研究人员采用雌性Lewis大鼠（n=36，购自Charles River Laboratories）建立PTMG模型，通过皮下注射mAb35（抗大鼠AChR单克隆抗体）诱导疾病。实验分为四组：PTMG抗C2组、PTMG同种型对照（IC）组、非MG抗C2组、非MG IC组。主要技术方法包括：腹腔注射抗大鼠C2抗体（50 mg/kg）进行预防性治疗；血清学检测通过ELISA测定游离C2水平、经典补体途径（CP）活性（C3沉积）和可溶性MAC（sMAC）；神经肌肉功能评估通过肌电图（EMG）和库拉明（curare）连续输注测定功能性AChR的安全因子；AChR含量通过放射免疫测定（RIA）检测胫骨前肌（TA）的总AChR；局部补体激活通过免疫荧光染色NMJ的MAC沉积进行定性评估。
研究结果分为三个部分：
1. 抗C2抗体减少经典补体途径活性、游离C2和可溶性MAC
通过ELISA检测血清样本，结果显示抗C2处理组游离C2水平在24小时和48小时显著降低，但24小时时5只动物不完全抑制（<95.48%），可能与体重较高影响药物生物利用度有关。经典补体途径活性（C3沉积）被完全抑制，可溶性MAC（sMAC）水平较同种型对照组显著降低，表明系统末端补体途径被抑制，但sMAC未完全降至零，符合替代途径背景激活。
2. 靶向C2预防体重减轻和MG临床症状
通过每日监测体重、MG临床评分、前肢握力测试和攀爬任务评估疾病进展。PTMG IC组动物在24-48小时出现体重下降（平均下降7.5%），握力逐步下降至基线53%，且48小时无法完成攀爬任务。而抗C2处理组动物体重稳定，无临床症状，握力保持与非MG组相似，所有动物均能完成攀爬任务。此外，通过EMG和库拉明输注评估功能性AChR，PTMG IC组均出现CMAP递减反应，库拉明耐受剂量（平均3.3 μg）显著低于非MG组（10.2 μg），提示功能性AChR减少；抗C2处理组无递减反应，库拉明耐受剂量（8.4 μg）与非MG组无显著差异，表明功能性AChR保存。放射免疫测定显示，PTMG IC组总AChR浓度降低60.4%（13.9 fmol/g），而抗C2处理组AChR浓度（22 fmol/g）与非MG组（23 fmol/g）相当，证实AChR丢失被完全预防。
3. 靶向C2预防神经肌肉接头处MAC沉积
通过免疫荧光染色胫骨前肌NMJ，使用α-银环蛇毒素标记AChR，抗C5b-9抗体标记MAC，同时使用突触囊泡蛋白2（SV2）作为突触前标记。定性评估显示，PTMG IC组NMJ处AChR染色强度减弱，MAC明显共定位沉积；而抗C2处理组AChR染色强度与非MG组相似，MAC染色微弱或仅背景水平，表明局部补体激活被有效抑制。
讨论部分指出，C2靶向相比C5抑制具有更上游和更特异性的优点，可保留替代途径介导的免疫防御，且可与B细胞靶向药物或FcRn拮抗剂联合使用。抗C2治疗后sMAC仅部分降低，符合替代途径维持基线水平。不完全游离C2抑制可能与腹腔给药受体脂影响有关。局部MAC沉积的预防是疗效的关键指标。研究还比较了siRNA介导的C2敲低与抗体疗法的差异，单克隆抗体具有起效快、可预测、给药间隔长等优势。目前抗C2抗体empasiprubart已在其他适应症中进入临床开发，支持其在MG中的潜力。结论：本研究结果表明，靶向C2的单克隆抗体在AChR-MG中具有治疗潜力。给PTMG大鼠施用抗C2抗体可预防MG特征性症状的发展，血清分析证实了靶向补体途径的失活。这种靶向方法可为现有补体抑制剂提供替代方案，并可能在补体介导的疾病中具有更广泛的应用。
