摘要
在本研究中，我们探讨了转录因子锌指蛋白695（ZNF695）及其靶基因染色框蛋白同源物8（CBX8）在结直肠癌（CRC）细胞迁移和侵袭过程中的功能机制。我们使用HCT-116和LOVO细胞系建立了ZNF695被敲低以及CBX8被敲低或过表达的细胞模型。为全面评估ZNF695和CBX8对细胞表型的影响，我们分别采用CCK-8检测、伤口愈合实验和Transwell实验来检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。为了研究ZNF695对肿瘤进展的影响，我们利用裸鼠建立了异种移植模型。我们构建了带有FLAG标签的ZNF695表达质粒，并进行了ChIP-seq实验。通过将ZNF695被敲低后的mRNA测序数据与TCGA数据库中CRC高表达基因数据进行整合，我们确定CBX8是ZNF695的潜在下游靶标。我们采用双荧光素酶报告基因实验来验证ZNF695与CBX8启动子区域的特异性结合亲和力。为阐明ZNF695和CBX8调控的特定生物学途径，我们进行了全面的通路富集分析。我们还进行了拯救实验，以确定ZNF695/CBX8调控轴是否会上调Wnt信号通路下游靶基因AXIN2和CCND1的表达。体外实验和体内模型均表明，沉默ZNF695能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，同时延缓肿瘤进展。ChIP-seq实验结合双荧光素酶报告基因实验证实了ZNF695与CBX8启动子的直接结合。此外，减少CBX8的表达会显著减弱CRC细胞的迁移和侵袭能力。恢复CBX8的表达可以有效弥补因ZNF695沉默而导致的CRC细胞迁移和侵袭能力的下降。在ZNF695被沉默的细胞中重新表达CBX8能够恢复Wnt/β-catenin信号通路的活性，同时增加AXIN2和CCND1的表达。ZNF695通过转录激活CBX8，进而增强Wnt/β-catenin信号通路，从而促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。
利益冲突声明
作者声明不存在利益冲突。
数据可用性声明
本研究的相关数据已公开存储在国家生物信息中心旗下的基因组序列档案库（GSA）中，地址为https://ngdc.cncb.ac.cn/gsa/，参考编号分别为subHRA030007和subHRA029972。本研究中生成的ChIP-seq和RNA-seq数据集已存入中国国家生物信息中心数据库（地址：https://ngdc.cncb.ac.cn/），ChIP-seq数据的登录号为PRJCA066259，RNA-seq数据的登录号为PRJCA066184。完整的ChIP-seq峰注释结果以及RNA-seq差异表达基因列表详见支持信息S2和S3中的表格S1和S2。
