《npj Gut and Liver》：Inhibition of bile acid conjugation improves cholestatic liver injury in mice with a humanized bile acid pool
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胆汁淤积期间胆汁酸（BAs）在肝内积累导致肝脏和胆管损伤。研究人员假设，抑制BA结合将增加非酰胺化BAs，改变BA组成，刺激胆汁流，从而改善肝脏和胆管损伤。雄性FVB/N小鼠接受3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢可力丁（DDC）喂养4周以诱导硬化性胆管炎样肝损
胆汁淤积期间胆汁酸（BAs）在肝内积累导致肝脏和胆管损伤。研究人员假设，抑制BA结合将增加非酰胺化BAs，改变BA组成，刺激胆汁流，从而改善肝脏和胆管损伤。雄性FVB/N小鼠接受3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢可力丁（DDC）喂养4周以诱导硬化性胆管炎样肝损伤，联合或不联合针对Cyp2c70的siRNA（siCyp2c70）使人源化BA池。DDC喂养的小鼠（联合或不联合siCyp2c70）接受抑制胆汁酸-CoA连接酶BACL（siBacl）的siRNA处理，进而抑制BA结合。通过生化及（免疫）组织学评估肝损伤。还评估了胆汁流、胆汁BA和谷胱甘肽水平、肝羟脯氨酸、转录组和蛋白质分析。在DDC siCyp2c70动物中，siBacl减少了胆汁结合型BAs，分别与胆汁流和胆汁谷胱甘肽输出增加2倍和3倍相关。此外，肝脏和胆管损伤的生化及组织学特征得到改善。虽然肝脏炎症仅部分减轻，但纤维化得到改善，表现为纤维化基因表达降低和羟脯氨酸水平降低。CK19和Vcam蛋白表达显著降低。RNA测序表明肝脏活性氧（ROS）解毒基因表达增强，伴随丙二醛水平降低。因此，抑制BA结合可能通过增加胆汁流、增强胆汁谷胱甘肽分泌和减少氧化应激来改善肝脏和胆管损伤。
**论文解读：抑制胆汁酸结合改善胆汁淤积性肝损伤的机制研究**
**研究背景与问题**
胆汁淤积性肝病，如原发性硬化性胆管炎（PSC）和原发性胆汁性胆管炎（PBC），其治疗选择仍然有限。尽管熊去氧胆酸（UDCA）作为PBC的一线治疗具有一定的利胆效应，但用于PSC时疗效存在争议，且高剂量时可能具有毒性。近年来，PBC的二线治疗药物如seladelpar和elafibranor虽靶向胆汁酸（BA）稳态，但能否逆转晚期纤维化仍不明确。值得注意的是，UDCA的侧链缩短衍生物——norucholic acid（NCA，前称norUDCA），因其相对抵抗酰胺化/结合，能够促进胆肝分流，在啮齿动物中表现出强大的利胆和抗纤维化作用，并在PSC患者中显示有益效果。基于此，研究人员提出假设：抑制BA结合的关键酶——胆汁酸-CoA连接酶（BACL，常规基因名：Slc27a5），可能通过增加非结合型BA的水平，促进胆肝分流，从而对抗胆汁淤积性肝损伤和纤维化。本论文发表于《npj Gut and Liver》，旨在验证这一假设，并探索其在人源化BA池背景下的作用。
**主要关键技术方法**
研究人员采用8周龄雄性FVB/N小鼠，通过腹腔注射小干扰RNA（siRNA）抑制Bacl（siBacl）和/或Cyp2c70（siCyp2c70），以抑制BA结合或获得人源化BA池（减少鼠胆酸合成）。动物给予含0.1% 3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢可力丁（DDC）的饲料4周，诱导硬化性胆管炎样损伤与胆汁淤积。关键方法包括：胆汁流测量（胆囊插管法）、胆汁BA谱分析（代谢组学平台）、血清生化检测（ALT、AST、AP等）、组织学染色（H&E、天狼星红）、免疫组化（Mac-2、CK19、Vcam）、肝羟脯氨酸定量、bulk RNA测序及基因表达分析。每组动物数量为6只。
**研究结果**
**抑制Bacl刺激胆汁流并改变胆汁BA谱**
通过胆汁流测量发现，DDC喂养小鼠中抑制Bacl（DDC siBacl组）及联合抑制Bacl与Cyp2c70（DDC siCombi组）均显著增加肝胆胆汁流。胆汁中BA绝对浓度不变，但胆汁谷胱甘肽（GSH）水平及输出量显著增加，提示GSH输出增加可能促进胆汁流。BA谱分析显示，DDC siBacl组中非结合型BA（如胆酸CA和β-鼠胆酸β-MCA）成为主要成分，而结合型BA（如牛磺胆酸TCA和牛磺-β-鼠胆酸TβMCA）减少；在DDC siCyp2c70组中，牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）占约75%，联合抑制后CA增加且TCDCA减少。
**抑制Bacl改善DDC诱导的肝损伤**
H&E染色显示，抑制Bacl后DDC喂养小鼠肝脏炎症细胞浸润减少。血清转氨酶（ALT、AST）和碱性磷酸酶（AP）水平显著降低，总BA水平在DDC siBacl组中下降，但在DDC siCombi组中与DDC siCyp2c70组相比无显著变化，表明肝损伤生化指标改善。
**抑制Bacl部分改善人源化BA池小鼠的DDC诱导肝炎症**
Mac-2/半乳糖凝集素-3免疫组化显示，DDC siBacl组巨噬细胞数量减少，但DDC siCombi组与DDC siCyp2c70组相比无明显差异。促炎标志物（F4/80、Cxcl1、Cxcl2、Ccl2、Ccl5）的mRNA水平在DDC siBacl组中显著降低，而在DDC siCombi组中未进一步改善，表明抑制Bacl在非人源化BA池背景下更能减轻炎症。
**抑制Bacl改善DDC诱导的肝纤维化**
天狼星红染色显示，DDC siBacl和DDC siCombi组肝脏纤维化面积减少。纤维化基因Col1a1的mRNA表达及肝羟脯氨酸含量在两组中均显著降低，证实抑制Bacl可减轻纤维化。
**抑制Bacl改善DDC诱导的胆管反应和反应性胆管细胞表型**
CK19（胆管反应标志物）和Vcam-1（反应性胆管细胞标志物）的免疫组化及基因表达分析显示，DDC siBacl和DDC siCombi组中两者水平均显著降低，表明抑制Bacl可减少胆管细胞增殖与活化。
**抑制Bacl上调ROS解毒相关基因表达**
bulk RNA测序分析显示，DDC siBacl和DDC siCombi组中参与活性氧（ROS）解毒的基因（如Gstm1/2/3/4、Gsta1/2/5、Gstp1）表达上调，同时肝丙二醛（MDA）水平降低，提示抑制BA结合具有抗氧化效应。
**讨论与结论总结**
讨论部分指出，抑制BA结合改善DDC诱导的胆汁淤积性肝损伤可能通过以下机制实现：非结合型BA的胆肝分流，增加胆汁流并稀释细胞毒性BA；胆汁GSH输出增加，促进胆汁酸非依赖性胆汁流并中和ROS；非结合型BA（如β-MCA）的直接细胞保护和抗凋亡作用，以及CA等对肝星状细胞活化的潜在调控。在DDC siBacl组中，肝炎症改善更明显，可能归因于β-MCA的亲水性；而在人源化BA池背景下，TCDCA等疏水性结合BA的毒性可能抵消部分抗炎效果。但纤维化改善在两组中均显著，提示非结合BA可能具有直接抗纤维化效应。研究结论可总结为：抑制BA结合通过增加胆汁流、增强胆汁谷胱甘肽分泌及非结合BA的抗氧化和潜在抗纤维化作用，改善胆汁淤积性肝损伤（包括纤维化）。这一策略为治疗胆汁淤积性肝病提供了新思路。
