重新利用基础编辑器实现靶向敲入与多重同时敲除，以生成具有最少易位现象的异源CAR T细胞

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《Molecular Therapy》：Repurposing base editors for targeted knock-in and simultaneous multiplex knockouts to generate allo-CAR T cells with minimal translocations

【字体：大中小】 时间：2026年07月22日 来源：Molecular Therapy 11.4

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　　摘要在细胞疗法中，多重基因组编辑通常需要形成多个DNA双链断裂，而这可能会通过染色体重排和大规模缺失引发基因毒性。碱基编辑器能够以较少的DNA双链断裂实现精准的序列修改，被广泛用于基因破坏，但其用于转基因插入的能力至今尚未被探索。在此，我们开发了碱基编辑器介导的敲入技术（BEKI

摘要

在细胞疗法中，多重基因组编辑通常需要形成多个DNA双链断裂，而这可能会通过染色体重排和大规模缺失引发基因毒性。碱基编辑器能够以较少的DNA双链断裂实现精准的序列修改，被广泛用于基因破坏，但其用于转基因插入的能力至今尚未被探索。在此，我们开发了碱基编辑器介导的敲入技术（BEKI），这是一种非病毒平台，可通过单一酶同时实现转基因插入与多重基因破坏。该技术利用碱基编辑器的Cas9切刻酶结构域在目标位置产生配对切口（从而形成局部DNA双链断裂），同时通过碱基编辑实现多重基因敲除。经过优化的引导RNA方向和间距使得转基因能高效插入多个与T细胞相关的基因位点。DNA-PK抑制剂可提高敲入效率，但也会增加千碱基级别的缺失，而通过同时抑制Polθ可缓解这一问题。与多重Cas9编辑相比，BEKI显著减少了染色体易位，同时保持了细胞的存活率。该技术不仅能实现靶向CAR基因的敲入，还能同时进行多达10个基因的敲除，从而培育出具有更强细胞因子分泌能力、更能抵抗免疫抑制剂及同种异体排斥反应的异体CAR T细胞。总体而言，BEKI为多重CAR T细胞工程提供了一种更为高效且可扩展的方法，提升了基因组稳定性，有助于开发更安全的新一代癌症及自身免疫性疾病治疗疗法。

德国柏林大学医学院柏林先进疗法中心（BeCAT），地址：德国柏林13353

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