《Virchows Archiv》：FGFR2 amplification and fusion identified by NGS align with FGFR2b overexpression
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FGFR2b是HER2阴性晚期胃癌（AGC）中的新兴治疗靶点。然而，由于肿瘤异质性，FGFR2b免疫组化（IHC）与基因组检测之间的诊断一致性一直不一致。FGFR2融合的临床相关性也因其低发生率而不明确。本研究使用全切片手术标本评估了FGFR2b过表达与FGF
FGFR2b是HER2阴性晚期胃癌（AGC）中的新兴治疗靶点。然而，由于肿瘤异质性，FGFR2b免疫组化（IHC）与基因组检测之间的诊断一致性一直不一致。FGFR2融合的临床相关性也因其低发生率而不明确。本研究使用全切片手术标本评估了FGFR2b过表达与FGFR2基因组改变的诊断一致性和临床意义。共113例AGC胃切除术标本接受了FGFR2b IHC（FPR2-D抗体）和基于组织的下一代测序（NGS）检测（TruSight Oncology 500试剂盒）。FGFR2b阳性遵循FORTITUDE标准（≥10%中等到强膜染色）。FGFR2b IHC阳性率为10.6%，FGFR2扩增在13.3%的病例中检测到。手术标本显示IHC与NGS之间具有实质性一致性（κ=0.62），当纳入FGFR2融合时进一步改善（κ=0.67）。FGFR2融合相对罕见（5.3%），但与扩增和FGFR2b过表达相关（分别为83%和67%）。融合阳性患者的总生存期显著较差（p=0.02）。总之，充足的手术组织使FGFR2b IHC与NGS之间具有高度一致性。FGFR2b IHC是一种有效的一线筛查方法，而NGS对于检测定义侵袭性、预后不良亚型的罕见FGFR2融合至关重要。
**FGFR2扩增与融合的NGS检测与FGFR2b过表达的一致性分析：一项基于全切片手术标本的胃癌诊断与预后研究**
**研究背景与问题**
胃癌（GC）是全球第五大癌症死亡原因，转移性GC预后极差。在HER2阴性GC中，成纤维细胞生长因子受体2b（FGFR2b）作为FGFR2的一种亚型，在转移性胃病变中频繁过表达，并与不良预后密切相关，因此成为重要的治疗靶点。FIGHT研究（2期临床试验）显示，靶向FGFR2b的单克隆抗体bemarituzumab联合化疗显著改善了FGFR2b阳性GC患者的总生存期（OS），随后FORTITUDE-101（3期临床试验）正在开展，这凸显了精准生物标志物检测的必要性。然而，FGFR2b蛋白过表达率因所使用的一抗、评价标准和标本类型不同而波动（2.5%–31.1%），导致其预后意义存在争议。此外，FGFR2基因扩增在GC中发生率约4%，但基于循环肿瘤DNA（ctDNA）的检测与免疫组化（IHC）之间的一致性非常低（κ=0.11），而FGFR2融合的发生率极低（<3.1%），其与FGFR2b蛋白过表达的关系及临床影响尚不明确。因此，研究人员旨在利用全切片手术标本（目前被认为最具代表性的肿瘤组织），系统评估FGFR2b IHC与基于组织的下一代测序（NGS）在FGFR2基因组改变（扩增和融合）和蛋白表达水平上的诊断一致性，并探索FGFR2融合的临床意义，为建立合适的生物标志物诊断和治疗策略提供依据。
**研究方法**
本研究从三星医疗中心（Samsung Medical Center）2019年3月至2024年10月期间接受NGS检测的523例GC患者中，筛选出161例接受过治愈性或姑息性胃切除术的晚期胃癌（AGC）患者，最终纳入113例具有可用且合适的福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）标本的病例（排除48例因肿瘤体积不足、组织保存不佳或组织块耗尽）。主要技术方法包括：
1. **FGFR2b免疫组化（IHC）**：使用VENTANA FGFR2b（FPR2-D）RxDx Assay在全切片FFPE组织上进行标准化染色，并按照FORTITUDE-101标准（≥10%的肿瘤细胞呈中等到强[2+/3+]膜染色）判定为阳性。
2. **基于组织的下一代测序（NGS）**：使用TruSight Oncology（TSO）500基因面板试剂盒（Illumina）进行杂交捕获测序，在DRAGEN软件中通过CRAFT拷贝数调用器检测拷贝数变异（CNV），以log2-比值≥1.0为扩增阈值；使用Manta融合调用器检测基因融合，以≥5个异常比对cDNA片段定义为融合事件。所有分析基于GRCh37/hg19参考基因组，FGFR2改变以对应FGFR2b亚型（包含外显子8[IIIb]、排除外显子9[IIIc]）的参考转录本NM_022970.3进行注释。
**研究结果**
**1. FGFR2b IHC表达与临床病理特征及预后**
在113例AGC手术标本中，FGFR2b蛋白过表达率为10.6%（12/113）。异质性（10%–50%肿瘤细胞2+/3+）见于25%（3/12）的IHC阳性肿瘤。与IHC阴性组相比，IHC阳性组更多起源于胃贲门和体部（91.7% vs 63.4%），Borrmann 4型比例更高（50.0% vs 24.8%），且组织学类型以低黏附性癌（PCC）或印戒细胞（SRC）为主（83.3% vs 58.4%），但均未达到统计学显著差异。总生存期（OS）分析显示，FGFR2b IHC阳性组与阴性组之间无统计学差异（p=0.72）。
**2. FGFR2b IHC与NGS检测扩增的一致性**
NGS检测的FGFR2扩增率为13.3%（15/113），与IHC之间的Cohen's κ系数为0.62，表明实质性一致性。以IHC阳性为参考标准，NGS检测扩增的敏感性为0.75，特异性为0.94。具体而言，12例IHC阳性病例中有9例经NGS确认存在FGFR2扩增，101例IHC阴性病例中有95例无扩增。
**3. FGFR2融合的特征与预后**
FGFR2融合在5.3%（6/113）的病例中检出，其中83%（5/6）同时存在FGFR2扩增，67%（4/6）表现为FGFR2b IHC过表达。融合结构分析显示，一半融合（3/6）中FGFR2位于5’端（断裂点位于外显子17，伙伴基因包括TACC2[2例]和ATE1[1例]）；另一半融合（3/6）中FGFR2位于3’端（伙伴基因包括TACC2[2例]和PPAPDC1A[1例]），且所有3’端FGFR2融合保留了FGFR2的全部功能结构域（配体结合Ig样结构域[外显子3–8]、跨膜结构域[外显子9]和酪氨酸激酶结构域[外显子11–17]）。融合阳性组与阴性组相比，平均年龄略低（48.7 vs 56.4岁），所有病例起源于胃贲门和体部，且Borrmann 4型（50%）和PCC组织学类型（83%）比例高，但均无统计学差异。所有融合病例均为微卫星稳定（MSS）、HER2阴性和EB病毒（EBV）阴性。生存分析显示，FGFR2融合阳性组的总生存期显著短于融合阴性组（p=0.02）。
**4. FGFR2b IHC与NGS基因组改变（扩增和融合）的综合一致性**
纳入FGFR2扩增和融合后，NGS检测的基因组改变率为14.2%（16/113）。与仅基于扩增的标准相比，IHC与NGS的总体一致性κ系数提高至0.67，敏感性升至0.83，特异性维持0.94。此外，共检出6个FGFR2单核苷酸变异（SNV），但均为良性或意义不明确的变异（VUS），无显著临床意义。
**讨论与结论**
本研究表明，在手术切除的全切片标本中，FGFR2b IHC与NGS检测的FGFR2基因组改变（扩增和融合）之间具有高度一致性（κ=0.67），远高于既往ctDNA与IHC的一致性（κ=0.11）。这种诊断差异主要源于FGFR2b表达的瘤内异质性和胃癌的低脱落特性，而手术标本的充足组织取样可显著克服这一局限。此外，FGFR2融合尽管罕见（5.3%），但常伴有扩增和蛋白过表达，且与显著更差的总生存期相关，提示其作为侵袭性生物学表型标志物的作用。研究人员首次在GC中系统证明FGFR2融合与不良预后相关，并确认了FGFR2作为3’伙伴的融合类型（如TACC2-FGFR2、PPAPDC1A-FGFR2）同样保留功能域并导致蛋白过表达。因此，IHC可作为有效的一线筛查方法，而NGS（尤其是杂交捕获法）对于检测这些高风险融合亚群至关重要，能够实现精准分子分层和优化治疗策略。
**结论翻译**：总之，本研究证明，手术标本的全切片IHC与基于组织的NGS确定的FGFR2分子状态高度相关。这些发现表明，充足的组织取样（通过手术标本的重新评估或内镜下的多点活检）对于克服FGFR2b表达瘤内异质性导致的诊断差异至关重要。此外，研究还发现了罕见但具有临床意义的FGFR2融合病例，即使在缺乏基因扩增的情况下，这些病例也表现出强烈的蛋白过表达和不良预后。因此，虽然IHC是一种有效的主要方法，但NGS作为补充工具是必要的，用以识别这些高风险融合亚组，从而实现GC患者的精准分子分层和优化治疗策略。
